GC测定香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量

程雅婷，王晓云，王学涛，王艳博，庞静，刘凯娜，郑斓

1.秦皇岛市食品药品检验中心，河北 秦皇岛 066004；2.正大青春宝药业有限公司，浙江 杭州 310000

香砂养胃丸为纳入我国基本医疗保险目录的甲类非处方药，由木香、砂仁、白术、陈皮、茯苓、半夏(制)、醋香附、枳实(炒)、豆蔻(去壳)、姜厚朴、广藿香、甘草、生姜、大枣十四味药组成，具有温中和胃的功效[1]。香砂养胃丸中砂仁醒脾开胃，与白术、木香共为君药，起主要治疗作用。砂仁为姜科植物阳春砂、绿壳砂或海南砂的干燥成熟果实[1]，主要活性成分为乙酸龙脑酯、樟脑、龙脑等挥发油，具有抗溃疡、抗炎、镇痛、抗菌、止泻等药理作用[2-6]。豆蔻挥发油亦含少量乙酸龙脑酯[6-7]。香砂养胃丸的现行质量标准为《中华人民共和国药典》2015年版一部，其中并未收载砂仁的含量测定方法，现有的针对香砂养胃丸的研究也多为白术、厚朴、香附的质量控制[8-10]。笔者采用气相色谱[11](GC)测定香砂养胃丸中乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量[12]，对控制药品的有效性有重要意义。

1 材料

1.1 仪器

Agilent 7890A气相色谱仪；METTLER TOLEDO AG-135电子天平。

1.2 试药

乙酸龙脑酯对照品(批号：110759-201105，含量：99.6%)、龙脑对照品(批号：110881-201508，含量：96.8%)、樟脑对照品(批号：110747-201409，含量：98.7%)均购于中国食品药品检定研究院；无水乙醇、环己烷均为分析纯(天津市光复科技发展有限公司)。

香砂养胃丸15批，保定中药制药有限公司生产，批号分别为161206(S1)、161005(S2)；北京御生堂集团石家庄制药有限公司生产，批号分别为16014003(S3)、16114008(S4)；河南明善堂药业有限公司生产，批号为161212(S5)；山西旺龙药业集团有限公司生产，批号为20151204(S6)；石药集团河北永丰药业有限公司生产，批号分别为10516080514(S7)、10516110114(S8)、10517010214(S9)；药都制药集团股份有限公司生产，批号分别为161201(S10)、170401(S11)；湖北瑞华制药有限责任公司生产，批号分别为161220(S12)、170521(S13)；河北万岁药业有限公司生产，批号为161002(S14)；河南金鸿堂制药有限公司生产，批号为20160401(S15)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Agilent 7890A气相色谱仪，Agilent Technologies Inc.DB-1(30 m×0.320 mm，0.50 μm)色谱柱，进样口温度：230 ℃；载气为氮气，流速为4.0 mL·min-1，氮气-氢气-空气(1∶1∶10)，进样量为1 μL，进样方式为分流进样，分流比10∶1，氢火焰离子检测器(FID)，检测器温度为280 ℃。柱温采用程序升温，条件见表1。

表1 程序升温条件

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取樟脑对照品11.38 mg、龙脑对照品10.82 mg、乙酸龙脑酯对照品17.19 mg，加无水乙醇制成质量浓度分别为45.06、21.49、34.24 μg·mL-1的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约8 g，精密称定，照挥发油测定法(《中华人民共和国药典》2015年版四部通则2204)提取，加环己烷3 mL，缓缓加热至沸，并保持微沸约1 h，放置30 min后，取环己烷提取液转移至5 mL容量瓶中，再取1 mL环己烷冲洗挥发油测定器，合并冲洗液至上述5 mL容量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性考察

分别配制乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑系列浓度对照品溶液，以对照品进样量(ng)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程：乙酸龙脑酯Y=0.856 0X+1.494 3，r=0.999 8，进样量在0.807 3～322.903 2 ng与峰面积呈良好的线性关系；龙脑Y=0.959 9X+1.381 1，r=0.999 8，进样量在0.647 6～259.036 8 ng与峰面积呈良好的线性关系；樟脑Y=0.977 8X+2.055 7，r=0.999 8，进样量在1.014 1～405.657 0 ng与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 稳定性试验

分别吸取同一供试品溶液(S2)，分别在0、4、12、24 h进样，记录峰面积，不同时间供试品溶液乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑峰面积RSD分别为1.29%、1.42%、1.45%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.6 重复性试验

取同一供试品(S2)，按拟定含量测定方法制备6份供试品溶液，测定3种成分含量，供试品溶液乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑含量测定结果RSD分别为3.16%、2.39%、2.15%。本方法有较好重复性。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液1 μL，按拟定色谱条件重复进样6次，记录3种成分峰面积积分值。结果乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑峰面积RSD分别为0.69%、0.32%、0.63%。表明本方法有较好精密度。

2.8 回收率试验

精密称取已知含量的供试品(S2，乙酸龙脑酯0.017 mg·g-1、龙脑0.011 mg·g-1、樟脑0.039 mg·g-1)6份，每份约4 g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入一定浓度的混合对照品溶液，按上述供试品溶液的制备方法制备回收率试验用供试品溶液并测定含量，计算回收率。结果表明，本方法回收较好。回收率试验结果见表2。

表2 香砂养胃丸中3种成分的加样回收率结果(n=6)

2.9 专属性试验

按工艺要求制备砂仁及豆蔻阴性对照样品，并依次精密吸取对照品溶液、样品溶液及阴性样品溶液各1 μL，按2.1色谱条件测定，结果表明，香砂养胃丸中其他成分不影响乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的检出，本方法专属性强。见图1。

注：A.对照品；B.样品；C.阴性；1.樟脑；2.龙脑；3.乙酸龙脑酯。图1 对照品、样品、阴性样品气相色谱图

2.10 检验结果

取全部15批香砂养胃丸，按2.3项下方法制备供试品溶液，并按2.1色谱条件测定含量，结果见表3。

3 讨论

3.1 提取时间考察

分别考察了提取供试品0.5、1、1.5 h的含量测定结果，确定提取时间为1 h。

3.2 色谱条件优化

试验中分别考察了不同流速、不同程序升温条件对分离结果的影响，同时考察了不同进样口、检测器温度对测定结果的影响，表明在2.1项下的气相色谱条件效果最佳。

3.3 测定结果讨论

本方法测定的3种成分是香砂养胃丸中君药砂仁的主要成分，测定结果能直观反映君药砂仁的质量及香砂养胃丸的有效性。经测定，15批香砂养胃丸样品中，乙酸龙脑酯的含量均较低，且仅有2批乙酸龙脑酯的含量高于樟脑。根据文献记载，《中华人民共和国药典》收载的砂仁——阳春砂、绿壳砂及海南砂中，乙酸龙脑酯的含量远高于樟脑，而《中华人民共和国药典》未收录的红砂仁中，樟脑含量高于乙酸龙脑酯[6，13-14]。国内市场砂仁质量问题严峻，以近缘品种冒充砂仁的情况较为突出[15-17]，相关厂家投料的砂仁品种是否为正品有待进一步考察。本方法的建立对考察香砂养胃丸的质量，确保药品的有效性有重大意义。

表3 乙酸龙脑酯、龙脑及樟脑的含量测定结果 mg·g-1