悬钩子二元醇质体凝胶对日光性皮炎小鼠模型的保护作用

鲁昊昊 汤荣凡 侯春羽 王楚桥 童丽

（青海大学医学院 西宁 青海 810000）

日光性皮炎（Sunshine dermatitis）是一种长时间暴露在日光下所致的皮肤病[1]，该疾病是由于太阳光中波长为290~320nm的紫外线照射皮肤，引起皮肤组织释放组织胺等一系列炎症介质产生的炎症反应。临床表现为红肿、红斑、水泡、糜烂甚至休克，该疾病若未及时治疗则可能留有疤痕，给患者的生活带来极大的痛苦[2-3]。而紫色悬钩子（Rubus irritans Focke）蔷薇科，悬钩子属落叶灌木，该属植物含有挥发油、黄酮苷、萜类、鞣质、酚类等多种化学成分， 具有抑菌、抗肿瘤、抗氧自由基、抗炎、保护心血管、抗过敏等多种药理作用[4-5]。按照日光性皮炎的发病机理，该植物是治疗日光性皮炎的良好药材，本研究旨在为紫色悬钩子预防日光性皮炎皮肤病提供理论依据及实验基础。

1.实验材料

1.1 实验动物

KM小鼠（体重18～22g，雌雄各半）。

1.2 实验药材及试剂

紫色悬钩子果实；大豆卵磷脂；聚山梨醇酯-80；无水乙醇；1，2-丙二醇；三乙醇胺；pH=6.8（±0.01）磷酸盐缓冲液；卡波姆940；HE染色试剂盒。

1.3 实验仪器

磁力加热搅拌器；紫外灯；旋转蒸发仪。

2.实验方法

2.1 提取实验

2.1.1 紫色悬钩子果实的提取 将紫色悬钩子果实捣碎，在磁力加热搅拌器上先用乙醇于30℃，750r/min提取9小时，共提取两次，过滤，合并滤液，旋蒸溶剂，得醇提物；将滤渣置于磁力加热搅拌器上用蒸馏水于30℃，750r/min提取9小时，共提取两次，过滤，合并滤液，旋蒸溶剂，得水提物。

2.1.2 二元醇质体的制备 采用乙醇注入-超声法制备二元醇质体[6]。分别取处方量的醇提物和水提物加入磷酸盐缓冲液溶解，低温4℃保存。准确称取处方量的大豆卵磷脂、聚山梨醇酯-80溶解于处方量的二元醇相中（无水乙醇:1，2-丙二醇=7:3），在30℃，750r/min的条件下缓缓将磷酸盐缓冲液加入二元醇相中，持续搅拌30min，探头超声3min（频率20kHz，超声3s，间隔3s），即得水提物和醇提物二元醇质体，以相同的方法制备加入生理盐水的二元醇质体作为对照。

2.1.3 凝胶的制备 将2g卡波姆溶于200ml水中，充分溶胀。用三乙醇胺缓慢调节pH为6.5～7.0，将二元醇质体与其质量比2:3混合，搅拌即得。

2.2 动物实验

2.2.1 分组及给药 将30只KM小鼠随机分为三组，每组各10只，分别为对照组、醇提物组和水提物组，适应性喂养3天。在小鼠背部皮肤1cm×2cm范围内脱毛，每天涂抹等量二元醇质体凝胶（0.15g·cm-2），每隔8小时一次，一日三次，共涂抹3天[7]。

2.2.2 日光性皮炎造模 小鼠涂抹给药3天后，将小鼠固定，于20cm处紫外300nm线照射，连续照射一小时后给药一次，再连续照射1小时。照射完毕后12小时再给药一次。72小时后可见对照组、醇提物组和水提物组小鼠皮肤出现明显红肿、红斑甚至组织破溃，说明造模成功。建立皮肤组织损伤程度评价标准[8]，见表1。

2.2.3 HE染色病理切片检查 颈椎脱臼法处死小鼠，减去小鼠患处皮肤，置于10%福尔马林中固定，制备病理切片，HE染色，镜检。

2.2.4 统计学分析 实验数据采用SPSS24.0统计软件进行分析，组间比较采用K-W（Kruskal-Wallis）检验，P＜0.05差异具有统计学意义。

3.实验结果

3.1 实验数据分析

实验结果数据见表2。三组实验小鼠脱毛处皮肤出现不同程度的红肿、红斑等病理状态，说明三组小鼠均造模成功。与水提物组和醇提物组相比，空白对照组具有更明显的红肿、红斑甚至皮肤破溃等现象，说明醇提物组和水提物组均产生了预防日光性皮炎的作用（P＜0.05）。醇提物组与水提物组相比，醇提物组预防效果更佳（P＜0.05）。

表2 不同小鼠组别病理切片检查结果比较（n=10）

3.2 小鼠病理切片分析

空白对照组由于未加入提取物小鼠皮肤均出现红肿、红斑及炎症细胞浸润，说明空白醇质体凝胶不具备预防日光性皮炎的作用；水提物组和醇提物组皮肤损伤等级均较空白对照组低，说明紫色悬钩子果实提取物中含有预防日光性皮炎的有效成分。但水提物组和醇提物组相比，醇提物组对日光性皮炎产生了更佳的预防作用，可能是由于紫色悬钩子有效成分大部分于醇提物中，具体为何种成分，需要进一步实验分析。

4.小结

日光性皮炎为一种长时间暴露在日光下所致的皮肤病，皮肤经紫外线照射后引起血管扩张渗透增加、组织水肿等一系列反应[9-10]，患上此病的患者长时间无法直接接触日光，为其生活带来了极大的不便。而根据本实验研究发现，紫色悬钩子果实中含有能够预防日光性皮炎的有效成分，经动物实验显示该成分药理效果高，极具开发价值，同时本实验也为紫色悬钩子治疗日光性皮炎提供了理论指导和实验基础。我们有理由相信，该类药材的更多药理作用将逐步被挖掘出来，为日光性皮炎患者及其皮肤敏感脆弱的人群带来福音。