CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁组织中表达相关性与预后的影响

马秀丽　刘伟昌　冯园终　刘虎　陈庆明　赵玉梅

[摘要] 目的 探讨CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁组织中表达相关性与预后的影响因素。 方法 该研究于2016年7月—2017年7月共方便选取胃癌患者116例，根据术后患者的复发情况，将其分为术后复发组（52例）和术后未复发组（64例）。应用免疫组织化学SP法测定CD68和E-Cadherin在胃癌及癌旁组织中的表达。 结果 与未复发组相比，复发组胃癌组织的E-Cadherin及CD68阳性表达分别为61.5%、59.6%，显著增加，差异有统计学意义（χ2=9.63、8.12，P<0.05）。与未复发组相比，复发组的胃癌旁组织E-Cadherin及CD68阳性表达分别为65.4%、78.8%，显著增加，差异有统计学意义（χ2=9.89、12.12，P<0.05）。复发组胃癌组织中出现淋巴结转移、III～IV期、浸润深度≥5 cm与没有淋巴结转移、Ⅰ～Ⅱ期、浸润深度≤5 cm，E-Cadherin及CD68的表达显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 胃癌组织中肿瘤相关巨噬细胞浸润的机制及E-Cadherin的过表达可明显延长胃癌患者的生存率。

[关键词] CD68;E-Cadherin;胃癌;预后

[中图分类号] R735.2          [文献标识码] A          [文章编号] 1674-0742（2019）05（c）-0024-03

[Abstract] Objective To investigate the relationship between CD68 and E-Cadherin expression and prognosis in gastric cancer and adjacent tissues. Methods From July 2016 to July 2017， 116 patients with gastric cancer were convenient selected and enrolled. According to the recurrence of postoperative patients， they were divided into postoperative recurrence group （52 cases） and postoperative non-recurrence group （64 cases）. The expression of CD68 and E-Cadherin in gastric cancer and adjacent tissues was determined by SP immunohistochemistry. Results Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the recurrent gastric cancer tissues were 61.5% and 59.6%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.63， 8.12， P<0.05）. Compared with the non-recurrent group， the positive expressions of E-Cadherin and CD68 in the paracancerous tissues of the recurrent group were 65.4% and 78.8%， respectively， and the difference was statistically significant （χ2=9.89， 12.12， P<0.05）. Lymph node metastasis occurred in the recurrent gastric cancer， stage III-IV， invasive depth ≥5 cm and no lymph node metastasis， stage I-II， invasive depth less ≤5 cm， E-Cadherin and CD68 expression increased significantly， statistically significant （P<0.05）. Conclusion The mechanism of tumor-associated macrophage infiltration and the overexpression of E-Cadherin in gastric cancer can prolong the survival rate of gastric cancer patients.

[Key words] CD68; E-Cadherin; Gastric cancer; Prognosis

胃癌是當今世界范围内消化道最常见的恶性肿瘤之一，其预后较差，5年生存率较低[1]。影响胃癌预后的因素很多，但肿瘤细胞的浸润和转移是导致胃癌患者死亡率升高的主要因素[2]。E-Cadherin是一种细胞粘附蛋白，主要表达于上皮细胞连接部，参与调节细胞的分化，维持上皮结构，并与肿瘤侵袭和转移有关[3]。目前研究表明粘附分子参与了胃癌细胞的转移过程[4]。肿瘤组织内及其周围的巨噬细胞（TAM）参与肿瘤发展的多个环节，并在促进血管和淋巴管生成过程中起重要作用[5]。胃癌组织中高密度浸润的TAM能促进肿瘤的复发，而高密度浸润TAM是胃癌病人预后不良的重要因素。故该研究方便选取2016年7月—2017年7月该院收治的116例患者为研究对象，探讨胃癌的发生发展机制对于拓展胃癌治疗新思路和改善胃癌患者预后具有十分重要的意义。

1  资料与方法

1.1  一般资料

该研究方便选取胃癌患者116例，根据术后患者的复发情况，将其分为术后复发组（52例）和术后未复发组（64例）。入组标准：①年龄20～80岁，性别不限;②行胃癌根治术后，术式包括全胃切除术，胃大部切除术，R0（切缘阴性），切缘均未见癌组织浸润，进行淋巴结清扫D1-D0;③所有患者均未行术前新辅助放疗化疗，TNM分期为T1-T2N0期患者术后未进行辅助化疗或免疫治疗者，余分期者不限（参考2013年第2版NCCN胃癌治疗指南）;④随访3年以上（包括术后3年内死亡病例），资料完整者[6]。排除标准：①胃癌分期较晚者行姑息性手术者或已有周围脏器侵犯行联合脏器切除者;②TNM分期为T1-T2N0期患者术前、术后已行辅助放化疗或免疫治疗者;③随访不足3年;④资料不完整者[7]，所选病例均通过伦理委员会的批准，患者及家属均知情同意。

1.2  研究方法

1.2.1  组织芯片制备  收集武威市人民医院符合该研究的胃癌病例及相关组织蜡块，分别挑选出胃癌组织及其癌旁组织蜡块，将组织芯片设计成2组，一组为癌周围正常组织芯片组，另一组为癌组织芯片，副主任医师阅片标记靶点来制作组织芯片，将构建好的组织芯片蜡块，快速4 μm厚连续切片，并拷片，免疫组织化学染色步骤采用SP法，组织芯片切片经脱蜡、梯度精水化后进行抗原修复，具体为pH 6.0枸橼酸钠缓冲液抗原修复，微波炉加热。抗原修复盒内液体温度保持在95℃左右并持续20 min，试剂A阻断内源性过氧化物酶活性，试剂B封闭血清，一抗4℃过夜，试剂C信号放大，DAB染色及封片。所选抗体CD68和E-Cadherin均购自福州迈新生物技术公司，均为工作液。

1.2.2  结果判定  所有标本参照2010年WHO最新分类进行分型。免疫组化结果根据阳性细胞数目比例及着色强度判断，<5%为0 分，5%～25%为1 分，26%～50%为2分，>50%为3 分。未着色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。以二者得分相乘，0 分记为阴性（-），1～3 分为弱阳性（1+），4 分为中度阳性（2+），6分和9分为强阳性（3+）[8]。

1.2.3  观察指标  应用胃癌组织及其癌周正常组织制作组织芯片，进行免疫组织化学染色及其结果判读。主要观察指标：E-Cadherin及CD68的异常表达可以预测胃癌患者术后的复发率。次要观察指标：观察E-Cadherin及CD68对胃癌组织的浸润深度、淋巴转移数量和TNM分期的影响。

1.3  统计方法

应用SPSS 21.0统计学软件进行数据统计学分析。对计量资料进行单样本K-S正态性检验，正态分布数据以（x±s）表示，比较采用独立样本t检验;计数资料以“率”描述，比较采用χ2检验/Fisher分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  胃癌组织E-Cadherin及CD68的表达情况

与未复发组相比，复发组胃癌组织的E-Cadherin及CD68阳性表达显著增加（P<0.05）。见表1。

2.2  胃癌旁组织E-Cadherin及CD68的表达情况

与未复发组相比，复发组的胃癌旁组织E-Cadherin及CD68阳性表达显著增加（P<0.05）。见表2。

2.3  复发组胃癌组织E-Cadherin及CD68阳性表达

复发组胃癌组织中出现淋巴结转移与没有淋巴结转移，E-Cadherin及CD68的表达显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）。III～IV期与Ⅰ～Ⅱ期相比，胃癌组织E-Cadherin及CD68表达显著增加，有统计学意义（P<0.05）。与胃癌组织的浸润深度≤5 cm相比，浸润深度≥5 cm显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3  讨论

胃癌患者的癌组织及癌周围正常组织上皮细胞均有E-Cadherin的表达，在胃癌术后未复发组和复发组之中E-Cadherin的异常表达存在明显差异，并且在胃癌术后未复发和复发的患者中，对比不同的癌组织浸润深度、淋巴转移数量和TNM分期，随着浸润深度、淋巴结转移数量的增加以及胃癌的不断进展，E-Cadherin的异常表达的也呈逐渐增加趋势。同时发现胃癌患者TNM分期越晚其癌组织内浸润的巨噬细胞远远多于癌周围正常组织，这种对胃癌细胞丧失吞噬、杀伤功能的免疫细胞在肿瘤微环境中促进了胃癌组织的进展和转移，进而导致胃癌患者术后的复发率增高。

目前胃癌的发病率逐年提升，该研究通过对胃癌患者癌组织中及癌旁正常组织中E-Cadherin及CD68的异常表达来，对患者胃癌術后的复发率的影响及对胃癌的浸润深度、淋巴结转移数量和TNM分期的影响的研究对延长胃癌患者的生存率和减少复发率有重要意义，也将为胃癌患者的免疫治疗提供一个新的途径，由以上结果可知，与未复发组相比，复发组胃癌组织的E-Cadherin及CD68阳性表达分别为61.5%、59.6%，显著增加，差异有统计学意义（P<0.05）。与未复发组相比，复发组的胃癌旁组织E-Cadherin及CD68阳性表达分别为65.4%、78.8%，显著增加，差异有统计学意义（P<0.05），这与董海峰等人[9]在相关研究中得出有关胃癌组织以及胃癌旁组织的E-Cadherin及CD68阳性率的结果相近，具有临床意义。

该研究存在一定局限性，包括作为回顾性研究，样本量较小。因此，有待进一步扩大样本量，进一步加大对患者进行长期随访的工作。

综上所述，胃癌组织中肿瘤E-Cadherin的过表达可明显延长胃癌患者的生存率。

[参考文献]

[1]  Wu H， Cai Z， Lu G， et al. Impact of c-erbB-2 protein on 5-year survival rate of gastric cancer patients after surgery： a cohort study and meta-analysis[J].Tumori，2017，103（3）： 249-254.

[2]  Yao Y， Liu Z， Guo H， et al. Elevated TRIM23 expression predicts poor prognosis in Chinese gastric cancer[J].Pathol Res Pract，2018，214（12）： 2062-2068.

[3]  Wanga XZ， Gu JL， Gao M， et al. Peperomin E Induces Promoter Hypomethylation of Metastatic-Suppressor Genes and Attenuates Metastasis in Poorly Differentiated Gastric Cancer[J]. Cell Physiol Biochem，2018，50（6）： 2341-2364.

[4]  Zhao K， He J， Wang YF， et al. EZH2-mediated epigenetic suppression of EphB3 inhibits gastric cancer proliferation and metastasis by affecting E-cadherin and vimentin expression[J]. Gene，2018，686：118-124.

[5]  Wang HC， Chen CW， Yang CL， et al. Tumor-Associated Macrophages Promote Epigenetic Silencing of Gelsolin through DNA Methyltransferase 1 in Gastric Cancer Cells[J]. Cancer Immunol Res，2017，5（10）：885-897.

[6]  Liu H，Lin C，Shen Z， et al.Decreased expression of granul ocyte-macrophage colony-stimulating factor is associated with adverse clinical outcome in patients with gastric cancer undergoing gastrectomy[J].Oncol Lett，2017，14（4）：4701-4707.

[7]  Wang F， Li B， Wei Y， et al. Tumor-derived exosomes induce PD1+ macrophage population in human gastric cancer that promotes disease progression[J].Oncogenesis，2018，7（5）：41.

[8]  李軍，牟林军，孙玉宝.胃癌组织中 HIF-1α，CD68 及 Sema4D 蛋白的表达及临床[J].潍坊医学院学报，2016，38（6）：454-457.

[9]  董海峰，郑英斌，庞志刚.E-钙黏蛋白与波形蛋白在胃癌中的表达及意义[J].中华实用诊断与治疗杂志，2018，32（6）：580-582.

（收稿日期：2019-02-27）