鸡大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

徐秋凤

(河南省方城县动物卫生监督所,河南方城 473200)

大肠杆菌病是以侵害肠道为主的原发性传染病，由致病性大肠杆菌及其毒素引起，其中包括大肠杆菌输卵管炎、肠炎、关节炎、腹膜炎等各种疾病，对养鸡业危害极大。

2018年4月，方城县博望镇某鸡场鸡群出现精神萎靡不振、采食减少或不食、离群呆立或蹲伏不动、羽毛松乱、肛门周围羽毛粘有粪便、绿色或黄白色稀粪、并陆续出现死亡，对病死鸡进行剖检观察疑似为大肠杆菌病。但该鸡场对此病症治疗状况不佳。

因此，防止本病时应对分离到的大肠杆菌进行药物敏感性试验，在此基础上筛选出高效药物用以治疗，才能收到预期的效果。本次试验即对方城县博望镇范围内鸡大肠杆菌的致病群进行分离鉴定及药敏试验，起到对全县养殖场（户）鸡大肠杆菌病的提供有效帮助。

1 试验准备

1.1 选取材料

（1）样品的采集：通过对我县博望镇某鸡场送检的疑似大肠杆菌病的病料进行样品采集，死亡鸡只死亡时间不超过24h。

（2）试剂准备：麦康凯琼脂培养基及生化试剂均由市场采购。

（3）药片准备：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素等含药纸片。

（4）实验动物选用昆明系小白鼠雌雄各6只。

1.2 试验方法

1.2.1 病株的分离与培养 将提前采集的心血、肝、脾、等样品接种在麦康凯琼脂培养基上，于恒温箱内37℃培养18～24h，观察菌落生成情况，从培养基上挑取粉红色、表面光滑的单个菌落分别接种到营养琼脂斜面上，于恒温箱内37℃培养18～24h后，置冰箱备用。

1.2.2 染色镜检 将以上所得的菌株分别进行涂片，革兰氏染色后镜检，通过观察细菌形态和染色特征，选取符合大肠杆菌形态特征的菌株进行生化实验。

1.2.3 生化试验 用分离出的纯培养物进行吲哚试验、枸橼酸盐试验、MR试验、VR试验、糖发酵试验，根据观察变化记录结果。

1.2.4 毒力实验 选取通过镜检及生化反应的大肠杆菌特性的菌株接种营养琼脂平板，于恒温箱内37℃培养18h，将菌落制成菌悬液。选取小白鼠公母各3只，一组每只皮下注射0.2ml菌悬液，另一组注射相同剂量的无菌生理盐水。观察将1～2d内死亡的小鼠立即解剖，采取其心血接种于营养琼脂培养基上，于恒温箱内37℃培养18h，并对分离出的菌株进一步鉴定。

1.2.5 药敏试验 将0.1ml稀释好的菌液接种到平板上，让菌液均匀铺满平板，待干后，将5张药片贴于一个平板上，每药片间距3cm之上，全部贴好后置于37℃的恒温箱中培养18～24h，取出后观察实验结果测量每个药片的抑菌圈直径，做好记录，最后依据药物的判定标准，判定药物的敏感度及耐药性结果。

2 试验结果

2.1 分离培养情况

培养后可在培养基上发现边缘整齐、表面湿润光滑、呈粉红色的菌落；在普通琼脂培养基上出现了湿润光滑、整齐、圆形、隆起、灰白色的菌落，其菌落特征与大肠杆菌的特征相符。

2.2 染色镜检情况

通过革兰氏染色分离菌株显示阴性小杆菌，多单个存在，两端钝圆，菌株的染色镜检与大肠杆菌染色特性相吻合。

2.3 生化试验鉴定情况

分离出菌株的生化试验结果能发酵麦芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇，均能产酸产气，大多数菌株不发酵蔗糖，少数缓慢发酵，VP实验、枸橼酸盐试验均为阴性，MR试验、吲哚试验均为阳性，以上试验结果可以证明分离出的菌株为大肠杆菌。

2.4 毒力试验情况

用菌悬液体接种试验组的小白鼠，于接种后2小时出现精神萎靡，接着出现拉稀腹泻等临床症状，接种1天后开始1只死亡，2天内6只全部死亡，对死小白鼠进行解剖，均见其肝脏肿大，内脏淤血，在心、肝中分离出大肠杆菌，而对照组的6只小白鼠无明显变化，由此可见，从鸡内脏分离出的大肠杆菌均有较强的致病性。

2.5 药敏试验情况

用19种药物对分离出的菌株进行药敏试验，其结果如附表所示。

附表 分离菌株的药物敏感性实验结果 （mm）

结果表明，分离菌对庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨苄青霉素、复方新诺明、强力霉素7种药物具有耐药性，对多粘菌素E、阿奇霉素、头孢噻肟、罗红霉素、螺旋霉素、头孢拉啶6种药物较为敏感，其它药物中度敏感。

3 讨论

（1）通过对我县博望镇某鸡场发生的疑似大肠杆菌病样品的试验，从菌株特征、染色镜检、生化试验、毒力试验几个方面来看均和大肠杆菌特征相符，且有较强的致病性。

（2）药敏试验结果表明大肠杆菌分离菌株对多粘菌素E、阿奇霉素、头孢噻肟、罗红霉素、螺旋霉素、头孢拉啶6种药物较为敏感，对庆大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨苄青霉素、复方新诺明、强力霉素7种药物具有耐药性，对其它的药物中度敏感，这为预防和治疗该病提供了理论依据。

4 防治措施

（1）通过使用敏感药物多粘菌素E、阿奇霉素、头孢噻肟、罗红霉素、螺旋霉素、头孢拉啶进行鸡大肠杆菌治疗取得了理想的效果，在以后的用药中建议根据实际情况交替用药，以防耐药情况发生。

（2）利用分离出菌株培养后制成自家菌灭活苗，于7～15日龄、30日龄、120日龄各免疫一次，可取得良好的效果。

（3）加强消毒，采用戊二醛、聚维酮碘等消毒剂定期消毒。

（4）采用中草药预防抗生素治疗。平时采用黄连、黄芩、黄柏、红花、白头翁、板蓝根、大蒜等预防，以减少耐药性，发病时采用抗生素治疗。

（5）提高科学饲养管理能力，全方位提升管理水平，严格执行消毒制度，搞好环境卫生，按免疫程序科学防疫，加强鸡场群体的抗病能力，达到预防和减少疫病发生，增加养殖效益之目的。