3种测定输血器中邻苯二甲酸二乙酯溶出量方法比较

兰婉玲，刘兴兰，朱 茜，高小艳，游延军，张 磊

（四川省食品药品检验检测院，四川 成都 610097）

一次性使用输血器多采用聚氯乙烯（PVC）材料，PVC类产品在加工中均会加入一定量增塑剂，现临床使用的增塑剂多为邻苯二甲酸二乙酯（DEHP），部分增塑剂可能溶出并进入血液中[1]。现行一次性使用输血器标准GB8369-2005[2]中并未制订DEHP溶出量的检测方法，GB14232.1-2004[3](“传统型血袋”标准)中对血袋DEHP有测定方法和限度要求。YY/T 0927-2014[4]指南中提到，可采用气相色谱（GC）法、气相色谱-质谱联用（GC/MS）法、紫外-可见分光光度（UV）法检测DEHP的溶出量[5-9]。本研究中采用上述3种检测方法，对四川省评价性抽验的8家企业一次性使用输血器中增塑剂DEHP的溶出量进行测定，为增修输血器中DEHP的检测方法提供参考，并可推广到所有含DEHP增塑剂输液输血类产品中DEHP溶出量的测定。现报道如下。

1 材料

1.1 仪器

Carry 100型紫外分析仪（美国Varian公司）；GC-2010型气相色谱仪（日本Shimadzu公司）；Thermo Trace GC Ultra/Tsq Quantum Xls型气相色谱-质谱仪（美国Thermo Fisher公司）；一次性使用输血器（国内8家生产企业，42批次，详见表 1）。

表1 试验用输血器来源

1.2 试剂

DEHP对照品（德国Dr.Ehrenstorfer GmbH，批号为C16173000，含量为98.5% ）；甲醇、乙醇、正己烷为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 紫外-可见分光光度法

2.1.1 测定波长

经全波长扫描，确定测定波长为272 nm。

2.1.2 溶液制备

取DEHP对照品适量，精密称定，以无水乙醇制成对照品溶液。用质量浓度为0.937 3～0.937 8 g/mL的乙醇作为浸提液，取适量，分别加入3支输血器中（加至约总容量的90%），在37℃下浸泡1 h，取出，收集浸提液混合，摇匀，即得供试品溶液。以乙醇作为阴性对照溶液。

2.1.3 方法学考察

专属性考察：取2.1.2项下3种溶液各适量，按2.1.1项下条件进样测定，记录色谱图。详见图1。结果阴性对照溶液在与DEHP对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

线性关系考察：取DEHP对照品适量，精密称定，取无水乙醇制成质量浓度为 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列对照品溶液，精密量取10 μL，按2.1.1项下条件进样测定，记录吸光度。以DEHP 质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、吸光度（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y1=0.003 1X1-0.000 6，r=0.999 8(n=5)。结果表明，DEHP 质量浓度在11.92～119.20μg/mL范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验：取2.1.2项下对照品溶液适量，按2.1.1项下条件连续进样测定6次，记录吸光度。结果的RSD为2.90%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.1.2项下供试品溶液（批号为151011）适量，分别于室温下放置 0，10，20，24，48 h 时按2.1.1项下色谱条件进样测定，记录吸光度。结果的RSD为3.28%（n=5），表明供试品溶液室温放置48 h内基本稳定。

重复性试验：精密称取样品（批号为151011）适量，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，再按2.1.1项下条件进样测定，记录吸光度并计算含量。结果的RSD为4.68%（n=6），表明方法重复性良好。

2.2 GC法

2.2.1 色谱条件

色谱柱：HP-5 柱（30 m ×0.32 mm，0.25 μm）；程序升温：初始温度90℃，以20℃ /min的速率升温至200℃、保持1 min，以20℃ /min的速率升温至240℃、保持2min，以20℃/min的速率升温至270℃，保持2min；进样口温度：250℃；检测器温度：280℃；进样量：1.0μL。

2.2.2 溶液制备

取DEHP对照品适量，精密称定，置50 mL容量瓶中，加正己烷定容，即得质量浓度为595.925 μg/mL的对照品溶液。以正己烷作为阴性对照溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性考察：取2.2.2项下对照品溶液、阴性对照溶液和2.1.2项下供试品溶液各适量，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图。详见图2。结果阴性对照溶液在与DEHP对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

图1 紫外-可见分光光谱图

图2 气相色谱图

线性关系考察：取DEHP对照品适量，精密称定，加正己烷制成质量浓度为 119.200，59.590，35.760，23.837，11.920 μg/mL的系列对照品溶液，精密量取1 μL，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以DEHP 质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y2=1 097.5X2-3 127.1，r=0.999 6(n=5)。结果表明，DEHP 质量浓度在11.920～119.200 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取2.2.2项下对照品溶液适量，按2.2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果的RSD为1.73%（n=6），表明仪器精密度良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为151011）适量，共6份，分别加入低、中、高质量浓度的DEHP对照品溶液，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，再按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算回收率。结果见表2。

表2 GC加样回收试验结果（n=9）

2.3 GC/MS法

2.3.1 试验条件

色谱柱：TR-5MS 柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；离子源温度：230℃；电子能量：70 eV；程序升温：初始温度150℃、保持1 min，再以20℃ /min的速率升温至280℃、保持7 min；进样口温度：280℃；进样体积：1 μL；测定方式：SIM 定量；定量离子：m/z149。

2.3.2 方法学考察

专属性试验：取2.2.2项下对照品溶液、阴性对照溶液和2.1.2项下供试品溶液各适量，按2.3.1项下试验条件进样测定，记录质谱图。详见图3。结果阴性对照溶液在与DEHP对照品溶液相同保留时间处无干扰峰，表明专属性良好。

线性关系考察：取DEHP对照品适量，精密称定，取正己烷制成质量浓度为 2.38，1.19，0.60，0.06，0.03μg/mL的系列对照品溶液，精密量取1μL，按2.3.1项下试验条件进样测定，记录离子信号强度。以DEHP质量浓度（X，μg/mL）为横坐标、离子信号强度（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y3=2×106X3+7 713.5，r=0.999 7(n=5)。结果表明，DEHP质量浓度在0.03～2.38 μg/mL范围内与离子信号强度线性关系良好。

图3 气相色谱-质谱图

精密度试验：取2.2.2项下对照品溶液适量，按2.3.1项下试验条件连续进样测定6次，记录离子信号强度。结果的RSD为3.07%（n=6），表明仪器精密度良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为151011）适量，共6份，分别加入一定质量浓度的DEHP对照品溶液，按2.1.2项下方法制备供试品溶液，再按2.3.1项下试验条件进样测定，记录离子信号强度并计算回收率。结果见表3。

2.4 样品测定

取42批样品各适量，分别按2.1.2项下方法制备供试品溶液，再按上述3种试验条件进样测定，平行测定3次，计算样品含量。结果见表4。

3 讨论

一次性使用输血器里DEHP的溶出量是与输血器PVC粒料中DEHP的加入量有关，不同企业的输血器产品配方不完全一样，由本研究结果可知，8家企业的DEHP增塑剂加入比例差异不大。

采用同一个对照品，3种不同测定方法测定同一供试品溶液，UV法测试的数据与GC和GC/MS法的结果差异较大。分析原因大致如下：邻苯二甲酸酯是一类增塑剂，其结构相似，DEHP及其他邻苯二甲酸酯类成分在272 nm[4]波长处均有吸收，测定结果为在272 nm波长处有紫外吸收的所有成分，故导致UV检测结果虚高。

表3 GC/MS加样回收试验结果（n=6）

表4 8家生产企业一次性使用输血器中DEHP溶出量试验结果

在GC和GC/MS法中，首先，两者对供试品的分离行为是一致的，MS采用了高速电子束撞击气态分子，把电离出来的离子加速导入质量分析器中，然后按碎片离子的质荷比大小顺序进行收集和记录，得MS图，可以定性和定量，可以分离与DEHP类似成分的其他邻苯二甲酸酯成分，增加了鉴定功能。只要GC优化色谱条件，样品中物质分离度好，GC与GC/MS的结果基本一致。气相色谱仪比气相色谱/质谱仪价格便宜很多，气相色谱仪的普及度要高于质谱，可在国家标准中规定采用GC/MS法用于鉴定存在邻苯二甲酸酯类的化合物，从检测限分析，建议测定常量采用GC法，测定迁移量微量采用GC/MS法。

据文献[10-16]报道，DEHP增塑剂具有生殖毒性、致癌和致畸性，对血液系统有影响，有肝脏毒性。所以在使用以DEHP为增塑剂的PVC产品时，往往需要控制DEHP加入量，以控制产品中DEHP的溶出量。紫外-可见分光光度法在安全性评价上可作为一个警示，具体精准分析还需采用GC法和GC/MS法的数据更准确。

临床目前使用的输液器、输血器及血袋产品大多为以DEHP为增塑剂的PVC材质的产品，现行有效的血袋标准（GB14232.1-2004标准方法）的测定方法为紫外-可见分光光度法，输血器（GB8369-2005）和输液器（GB8368-2005）在标准中并未设置DEHP的指标，本研究中仅以一次性使用输血器为例说明，结果3种方法下DEHP迁移量出现完全不同的结果，建议在输血器和输液器标准中以适宜的方法增加DEHP迁移量的指标控制，修订血袋中DEHP对应的方法和指标，真实地反映产品特性和产品风险，以免虚高的数据引起老百姓对使用产品的恐慌，造成不必要且不良的社会影响。