2型糖尿病伴冠心病患者血清miR-126、CXCL12表达及与冠脉病变的关系

孟佩盈 赵 君 陈莎帅

冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease，CAD)是由于冠状动脉血管发生粥样硬化导致心肌缺血或坏死的一类心脏疾病，简称冠心病，其发病机制多样[1]。2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)是由于机体胰岛素受体功能异常产生胰岛素抵抗，导致高血糖的一类糖尿病，多发于中老年，常伴有高血脂、高血压、CAD等疾病[2]。研究表明，糖尿病患者机体长期处于高糖状态，血管屏障受到损伤，导致血管内皮细胞过度增殖，细胞间连接减弱，伸缩性降低，导致血管闭塞发生硬化，加剧糖尿病患者血管病变[3]。相关研究表明，多种miRNAs参与CAD疾病和T2DM疾病发生过程[4]。另有研究表明C-X-C基趋化因子12(C-X-C motif chemokine 12，CXCL12)在T2DM疾病及其并发症发生过程中具有重要作用[5]。然而CXCL12与T2DM合并CAD患者冠脉病变程度的关系尚不清楚。因此本研究纳入2016年4月～2018年4月笔者医院接收的CAD患者进行研究，旨在检测miR-26、CXCL12在T2DM伴CAD患者血清中表达情况，并进一步分析miR-126、CXCL12水平与患者冠脉病变严重程度的关系，探究miR-126、CXCL12水平与冠脉病变严重程度的关系，以期为早期干预和预后判断提供一定参考。

资料与方法

1.一般资料：选取2016年4月～2018年4月在笔者医院进行治疗的稳定型CAD患者103例，根据是否伴T2DM分为伴糖尿病组(CADDM组)49例、非伴糖尿病组(CAD组)54例。所有患者均经冠状动脉造影确定冠状动脉病变情况，采用Gensini评分标准评估冠脉病变程度[6]。CADDM组男性27例，女性22例；患者平均年龄62.54±7.93岁。CAD组男性31例，女性23例，平均年龄61.29±8.37岁。纳入标准：(1)稳定型CAD：以发作性胸骨后疼痛为特点，发作1～3个月内无改变，发作在每日及每周的次数大致一致，诱导发作的情绪和劳累程度无差别，发作时疼痛性质及发作部位每次无改变。(2)T2DM：参照中华医学会糖尿病学分会的中国T2DM防治指南(2013年)，75g OGTT后2h血糖值≥11.1 mmol/L和(或)FPG≥7.0 mmol/L，且排除1型糖尿病，即诊断为T2DM。排除标准：(1)合并心肌炎等其他心脏病。(2)不稳定型心绞痛，肾脏、肝脏功能异常。(3)合并局部出血性疾病，不能长期进行抗血小板治疗。(4)合并血液系统、恶性肿瘤、免疫系统、严重感染等疾病。另招募同期健康体检者50例为对照组，男性28例，女性22例，平均年龄60.29±7.64岁。3组性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经笔者医院伦理学委员会批准通过，且研究对象均签署知情同意书。

2.血清miR-126水平检测：所有研究对象均于入院24h内(对照组于体检当日)抽取静脉血4ml，离心收集血清，Trizol法提取组织中总RNA，试剂盒富集miRNAs。以反转录所得cDNA为模板对miR-126进行实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)扩增。每个样品设置3个复孔，重复3次。以U6作为内参基因，采用2-ΔΔCT，ΔΔCT=(CT目的基因-CT内参基因)研究组-(CT目的基因-CT内参基因)对照组计算miR-126相对表达量。

3.血清CXCL12水平检测：采用人CXCL12酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒(南京森贝伽生物公司)检测各研究对象血清中CXCL12蛋白水平。

结 果

1.3组受试者一般资料的比较：3组受试者年龄、性别、BMI、吸烟及高血压情况比较，差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较，CAD组和CADDM组患者TC、TG、LDL-C和HOMA-IR均显著升高，HDL-C水平显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)；与CAD组比较，CADDM组患者TC、TG、LDL-C和HOMA-IR均显著升高(P<0.05)，HDL-C水平显著降低(P<0.05),详见表1。

2.3组受试者血清miR-126、CXCL12水平的比较：与对照组比较，CAD组和CADDM组患者血清中miR-126显著降低、CXCL12水平明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)；与CAD组比较，CADDM组患者miR-126显著降低、CXCL12水平明显增高(P<0.05),详见表2。

3.CAD组和CADDM组患者Gensini评分的比较：与对照组比较，CAD组和CADDM组患者Gensini评分均显著增高(P<0.05)；与CAD组比较，CADDM组患者Gensini评分显著增高(P<0.05)，详见表3。

表1 3组受试者一般资料的比较

与对照组比较，*P<0.05；与CAD组比较，#P<0.05

表2 CADDM患者与对照组血清免疫球蛋白水平的比较结果

与对照组比较，*P<0.05；与CAD组比较，#P<0.05

表3 3组受试者Gensini评分的比较

与对照组比较，*P<0.05；与CAD组比较，#P<0.05

4.CADDM患者血清miR-126、CXCL12水平与Gensini评分相关性分析：Pearson分析表明，CADDM患者血清miR-126与Gensini评分呈负相关(r=-0.559，P<0.05)，CXCL12水平与Gensini评分呈正相关(r=0.658，P<0.05)，详见图1。

图1 Pearson相关性分析结果

5.CADDM患者血清miR-126、CXCL12水平对Gensini评分的影响：多元线性回归分析表明，Gensini评分与miR-126、CXCL12、TC、TG、HDL-C、LDL-C、HOMA-IR水平呈线性回归关系。回归系数显示，miR-126、CXCL12水平对Gensini评分影响较大(r=-0.587、r=0.561，P<0.05)，详见表4。

讨 论

近年来，随着生活水平的提高和饮食习惯的改变，心脑血管类疾病在我国发生率逐年增加，冠心病具有高致残率、高病死率等特征，严重威胁人类身体健康和生命安全，给家庭和社会造成沉重的精神和经济负担[7]。糖尿病尤其是2型糖尿病(T2DM)，能促进心血管发生炎性反应，导致心血管病变的发生，是冠心病的一种危症[8]。临床多以冠状动脉严重程度衡量CAD疾病严重程度，作为制定治疗方案和判断预后的主要参考，然而，动脉粥样硬化的机制尚不清楚。因此，寻找与冠状动脉病变程度相关的生物指标，探究其与冠状病变的关系，可为临床治疗和预后判断提供一定参考。

表4 多元线性回归分析结果

微小RNA(microRNA，miRNA)是真核生物中一种包含17～25个碱基的非编码RNA，其作用是靶向和诱导目标mRNA的降解或翻译抑制，从而在转录后水平引起基因沉默。miRNA参与了基因表达的体内转录后控制，对血管组织发育、粥样斑块的形成、免疫和炎性反应具有调节作用[9]。在心肌梗死和动脉粥样硬化的发生和发展过程中，各种miRNAs发挥着重要的调控作用。Zhao等[10]发现，miR-214在缺血性心脏病及心力衰竭患者血清中低表达，通过调节参与细胞增殖和凋亡的靶基因转录和表达，参与心脏病理变化。Elton等[11]发现，miR-155-5p在心血管疾病患者及病毒感染等患者血清中表达上调，与疾病的严重程度有关，推测可采用减弱miR-155-5p水平的方式进行治疗。以上研究表明，多种miRNAs参与心血管疾病发生过程，然而miR-126在糖尿病伴心血管疾病中作用研究相对较少。

miR-126是哺乳动物一种常见miRNA，一般情况在血管内皮细胞中特异性表达，维持血管稳定性。Wei等[12]研究发现，miR-126可通过调节内皮细胞凋亡过程，影响炎症所致血管内皮结构损伤，其表达下调可导致血管发生炎性反应，促进动脉粥样硬化病变，提示miR-126可能是评估动脉硬化的一种潜在血清标志物。Mondadori等[13]研究表明，层流剪切应力作用下人内皮细胞中miR-126表达上调，采用miR-126模拟物处理可促进间质细胞因子的表达，调节动脉粥样硬化相关基因表达，提示miR-126与动脉粥样硬化的发生相关。Pishavar等[14]进一步研究发现，miR-126在T2DM患者血清中低表达，可通过调节血管生成和血管完整性参与糖尿病疾病发生。以上报道提示，miR-126既与动脉粥样硬化类疾病发生有关，又可参与糖尿病疾病发生，但其在糖尿病伴心血管疾病发生中作用暂时未知。本研究发现，CADDM患者和CAD患者血清中miR-126表达量均显著低于健康受试者，且T2DM伴CAD患者降低更加显著，与Al-Kafaji等[15]在T2DM合并CAD患者中发现一致，提示miR-126下调可能参与2型糖尿病伴心血管疾病发生。进一步研究发现，血清miR-126水平与CADDM患者Gensini评分呈负相关，提示血清miR-126水平一定程度上可反应T2DM伴CAD患者冠状动脉病变的严重程度。

曾有研究者提出，炎性反应在心血管疾病和糖尿病的免疫学机制中具有重要作用[16]。C-X-C基趋化因子12(C-X-C motif chemokine 12，CXCL12)是趋化因子家族中的一种小细胞因子，表达于多种组织和细胞中，通常由TNF-α等促炎性刺激因子诱导表达，也被称为基质细胞来源因子1(stromal cell-derived factor 1，SDF1)[17，18]。Tavakolian等[19]对88例冠状动脉阻塞患者进行研究，结果显示冠状动脉阻塞患者血清中CXCL12水平显著身高，与冠状动脉闭塞的严重程度呈明显正相关。Zhang等[20]研究显示，缺血性脑卒中患者梗死区域中SDF1蛋白表达量明显高于临近正常组织和对照组，进一步研究显示，SDF1蛋白主要表达于神经元细胞和星状胶质细胞，提示SDF1蛋白表达上调可能与缺血性脑损伤有关。与Tavakolian等在冠状动脉阻塞患者中研究一致的是，本研究发现，与对照组比较，CAD组和CADDM组患者血清CXCL12水平均明显升高，其中CADDM患者升高更显著，且与CADDM患者Gensini评分呈正相关，提示血清CXCL12水平升高可能与T2DM伴CAD患者冠状动脉病变发生和严重程度有关。

综上所述，CAD患者血清中miR-126表达下调，CXCL2表达上调，合并T2DM患者下调或上调更显著，冠状动脉病变严重程度与miR-126水平呈负相关，与CXCL12水平呈正相关，推测检测CAD合并T2DM患者血清miR-126、CXCL12水平可为临床诊治和预后判断提供一定参考。