枳实芍药散对C-IBS大鼠VIP的调节作用

辛 丹 季旭明 张亚楠 王 媛 王世军 滕佳林

肠易激综合征(irritable bowel syndrome, IBS)是临床常见肠道功能紊乱性疾病，其主要特征为腹部疼痛伴随大便性状和排便次数改变[1,2]。其中，便秘型肠易激综合征(C-IBC)较为常见[3]。现代研究表明C-IBS的病因涉及胃肠紊乱及内脏感觉异常等。血管活性肠肽(VIP)是一种重要的肽类神经递质，广泛分布于胃肠道和神经系统。杜丽娟等[4]研究发现VIP在结肠中含量最高，它能够调节肠动力，参与肠道动力紊乱的反应，对胃肠道平滑肌有松弛作用，从而抑制胃肠蠕动，导致便秘的发生，与C-IBS的病理形成过程有关[5～7]。枳实芍药散由枳实、白芍两味药物组成，始载于《金匮要略》，是治疗腹痛腹满的经方，其组方精简，主治血瘀气滞之腹满胀痛，符合中医对IBS的治则。因此，本研究拟观察枳实芍药散对C-IBS大鼠的作用及对VIP表达的影响，从而探讨枳实芍药散治疗C-IBS的可能机制。

材料与方法

1.动物:成年雄性Wistar大鼠60只，SPF级，体质量为200±20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物使用许可证号：SCXK(京)20160006。确保实验室的温度保持在22～25℃，将大鼠适应性喂养1周后开始实验。

2.仪器和主要试剂:高速粉碎机(永康市速锋工贸有限公司、YB-1000A型)，移液器(Finnpipette)，电热恒温培养箱(武汉一恒苏净科学仪器有限公司，37℃)，洗板机(Tianshi，988洗板机)，酶标仪(Rayto，RT-6100)，离心机(微量高速离心机，TG16W)，冷冻离心机(TGL16M台式高速冷冻离心机)，VIP ELISA试剂盒(上海创祥生物科技有限公司)，枳实、芍药购自济南市中鲁医院，匹维溴铵片购自北京万生药业有限责任公司。

3.药物制备:枳实、白芍用打成粉末，参照《金匮要略》枳实芍药散的原方药物比例，结合《中华人民共和国药典》(2015年，第1部)及临床实际用药情况，用时按给药剂量新鲜配制成0.164g/ml的混悬液，并将匹维溴铵配制成13.5mg/ml混悬液。

4.分组及造模:将60只SPF级的Wistar大鼠随机分为空白组和实验组，空白组10只，实验组50只。空白组大鼠给予26～28℃生理盐水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天；实验组大鼠给予0～4℃冰生理盐水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天[8]。造模结束后，在空白组和实验组当中各随机选取6只大鼠，检测其粪便含水量，据此评价造模是否成功。

5.给药：实验组大鼠随机分为模型对照组、匹维溴铵组、枳实芍药散高剂量组、枳实芍药散中剂量组和枳实芍药散低剂量组，每组10只。空白组和模型对照组均按照10ml/(kg·d)给予26～28℃生理盐水灌胃；匹维溴铵组大鼠按照0.0135g/(kg·d)给予匹维溴铵混悬液治疗；枳实芍药散组大鼠高剂量组用药量为3.28g/(kg·d)、中剂量组用药量为1.64g/(kg·d)、低剂量组用药量为0.82g/(kg·d)。

6.小肠推进率:大鼠取材前禁食不禁水12h，各组大鼠均给予墨汁1ml灌胃，用20%乌拉坦6ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，30min之后，剖开下腹分离肠系膜，取出上至幽门下至回盲部的肠道，置于托盘上将小肠轻轻的拉直，测量上至幽门下至回盲部全长(小肠总长度)和墨汁前沿距幽门的距离(墨汁推进长度)，计算出小肠的推进率。小肠推进率(%)=墨汁推进的长度/小肠的总长度×100%。

7.ELISA检测VIP的表达:给药结束后，按照6ml/kg的比例腹腔注射20%乌拉坦以麻醉大鼠，打开腹腔，用一次性真空负压管腹主动脉采血，静置30min后，以3000r/min离心分离血清，ELISA检测各组大鼠血清中VIP含量的变化。

结 果

1.模型评价:与空白组(49.57%±11.78%)比较，模型对照组粪便含水量(31.33%±12.13%)明显降低，且差异有统计学意义(P<0.05)，说明造模成功，结果见图1。

图1 粪便含水量比较

2.枳实芍药散对小肠推进率的影响：各组大鼠小肠推进率结果差异有统计学意义。与空白组(78.16%±5.81%)比较，模型对照组(58.17%±3.42%)、匹维溴铵组(69.62%±3.92%)、枳实芍药散高剂量组(64.35%±2.10%)、枳实芍药散中剂量组(63.61%±4.27%)和枳实芍药散低剂量组(59.77%±4.92%)的小肠推进率降低，差异有统计学意义(P<0.01)；与模型对照组比较，枳实芍药散高剂量组和枳实芍药散中剂量组的小肠推进率升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，匹维溴铵组的小肠推进率显著升高，差异有统计学意义(P<0.01)。详见图2。

图2 各组大鼠小肠推进率比较与空白组比较，*P<0.01；与模型组比较，#P<0.01，##P<0.05

3.枳实芍药散对C-IBS大鼠血清VIP的影响：ELISA结果显示各组大鼠VIP相对表达量比较差异有统计学意义。与空白组(54.68±4.44pg/ml)比较，模型对照组(272.08±15.83pg/ml)、枳实芍药散高剂量组(113.39±7.60pg/ml)、枳实芍药散中剂量组(177.44±23.33pg/ml)和枳实芍药散低剂量组(209.67±20.02pg/ml)VIP的表达水平明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与空白组比较，匹维溴铵组(95.33±18.85pg/ml)VIP的表达水平升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与模型对照组比较，匹维溴铵组、枳实芍药散高剂量组、枳实芍药散中剂量组和枳实芍药散低剂量组VIP的表达水平下降，差异有统计学意义(P<0.01)，详见图3。

图3 各组大鼠血清中血管活性肠肽浓度比较与空白组比较，*P<0.01，**P<0.05；与模型组比较，#P<0.01

讨 论

IBS是多种因素相互交织、相互作用所导致的，目前尚无完善的治疗方法[9]。现代医学对C-IBS病因的研究涉及胃肠紊乱及肠道微生物菌群改变、内脏感觉异常和脑-肠轴活动异常、炎症和免疫成分的改变以及基因与遗传及精神心理因素等，以胃肠动力紊乱和内脏感觉异常最为常见[10～14]。古代中医书籍并没有C-IBS病名的详细记载，临床中根据其腹痛、腹部不适、大便困难等表现，将其归属为中医“便秘”的范畴[15]。本病主要发生在大肠，其常见的病机有胃肠气机郁滞，津亏血少等。

《金匮要略·妇人产后》曰：“产后腹痛，烦满不得卧，枳实芍药散主之”。枳实辛散苦降，为破气消积，化痰除痛之要药。白芍有益血敛阴、柔肝止痛和平抑肝阳的功效。枳实和白芍两药配伍，组成枳实芍药散。临床运用时没有局限于“产后腹痛”，凡气血郁滞、气机不畅者均能以此方为主化裁使用，符合中医对IBS腹痛腹满的中医治则。从发病症状和病因来看，本方的适应证与肠易激综合征很接近[16]。笔者实验结果发现，枳实芍药散高剂量组和枳实芍药散中剂量组均能升高C-IBS大鼠的小肠推进率，说明枳实芍药散可以改善C-IBS大鼠胃肠紊乱的症状。

VIP是调节胃肠蠕动的重要肠神经递质。VIP对胃肠道的作用具体表现在以下几个方面：①抑制胃肠运动，延长胃排空时间；②抑制肠道环形机收缩，使结肠处于较长时间的舒张状态；③对肠壁内神经丛的抗应激及稳定作用。在结肠动力障碍的患者中，VIP的舒张反应明显减弱，说明VIP可能通过神经机制直接对肠道肌条收缩产生影响。研究发现，C-IBS患者结肠粘膜VIP含量升高，使蠕动性收缩不易发生，从而导致便秘[17]。笔者的实验结果发现模型对照组中VIP表达量增高，给予枳实芍药散治疗后，其表达量下降，以枳实芍药散高剂量组下降最为明显，结果表明枳实芍药散可以下调C-IBS大鼠VIP表达水平。

综上所述，枳实芍药散对C-IBS具有较好的治疗效果，其机制可能与降低VIP的水平有关。因此采用枳实芍药散治疗具有一定的可行性，但其具体作用机制还有待于进一步研究。