雷氏养心活血汤加味对心力衰竭大鼠血压、Na+-K+-ATP酶、心钠素、血管紧张素Ⅱ水平的影响

心力衰竭(heart failure，HF)是高血压、冠心病等各种心脏疾病导致的心功能不全综合征。《中国心血管病报告2017(概要)》报道[1]，我国心血管病患病率及死亡率逐年在升高，患病人数约2.9亿，其中心力衰竭病人约450万人。心血管病导致的死亡率在我国居民疾病死亡构成中居首位，约占40%以上。今后10年患病人数仍将快速增长。

国医大师雷忠义教授从事心血管疾病研究60余年，根据现代心血管疾病的发病机制及特征，集痰浊、瘀血并见的临床实践，于20世纪70年代提出胸痹心痛痰瘀互结理论[2-4]，并形成理法方药等完善的理论体系。雷氏养心活血汤加味(Lei′s YXT)是雷忠义教授基于痰瘀互结理论在生脉饮的基础上，结合现代病人疾病演变特征加减组方，治疗各种心脏病引起的慢性心力衰竭证属气阴两虚、痰瘀互结者，功能益气养阴、活血化痰利水，在临床取得较好疗效。本实验立足于雷氏养心活血汤加味的临床功效，采用心力衰竭大鼠模型研究雷氏养心活血汤加味的初步药效及作用机制，以期初步阐明雷氏养心活血汤加味治疗心力衰竭可能的作用机制，为其防治慢性心力衰竭提供理论支持。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选用雄性SD大鼠60只，体重190～210 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，实验动物质量合格证号：0012084，许可证号：SCXK(陕)2012-003。

1.2 实验药物 雷氏养心活血汤加味每1 mL相当于1.78 g生药，由陕西省中医药研究院中药研究所提供；芪苈强心胶囊，石家庄以岭药业股份有限公司生产(国药准字 H61020015)；卡托普利，常州制药厂生产(批号：14032911)；注射用盐酸多柔比星(阿霉素)，由浙江海正辉瑞制药有限公司生产(国药准字H，批号：33021980)。

1.3 试剂与仪器 乌拉坦(氨基甲酸乙酯)，由中国曹杨第二试剂厂生产(沪Q/HG22-771-68)；0.9%氯化钠注射液，由西安京西双鹤药业有限公司生产(国药准字 H61020015)；肝素钠注射液，由上海第一生化药业有限公司生产(国药准字H31022051)；RM6240BD型多导生理信号采集系统，由成都仪器厂生产；MB1830型血细胞分析仪，由四川养生科技有限公司生产；AU580全自动生化分析仪，由四川养生科技有限公司生产。

1.4 实验方法 将60只雄性SD大鼠按体重随机分成空白对照组、阿霉素模型组、Lei′s YXT低剂量组(5 g/kg)、Lei′s YXT高剂量组(10 g/kg)、芪苈强心胶囊组(1.2 g/kg)、卡托普利组(12.5 mg/kg)，每组10只。除空白对照组外其余各组于1～6周以阿霉素4 mg/kg腹腔注射造模，每周1次，连续6周。Lei′s YXT低剂量组、Lei′s YXT高剂量组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组从实验第1天开始灌胃给药，每日1次，连续8周，每周称体重1次。

1.5 检测指标 实验结束时以10%乌拉坦1.0 g/kg腹腔注射麻醉，分离颈动脉，以充满肝素生理盐水的压力换能器(YPJ01型)插入颈总动脉，并连接多导生理信号采集系统，记录大鼠收缩压、舒张压、平均压、心率、脉压，计算代表心肌耗氧量的心肌张力时间指数。颈总动脉取血，Elisa试剂盒测定血清Na+-K+-ATP酶、心钠素(ANP)、血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)水平，全自动生化仪检测血清肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、血糖(GLU)、血脂[总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、三酰甘油(TG)]、电解质水平。解剖大鼠，分离出心、肝、脾、肺、肾，称重并根据处死时的体重计算脏器指数。

2 结 果

2.1 雷氏养心活血汤加味对体重的影响 采用单因素方差分析，给药后，阿霉素模型组体重变化不明显，Lei′s YXT高剂量组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组大鼠体重较给药前显著升高(P<0.05或P<0.01)。详见表1。

表1 雷氏养心活血汤加味对体重的影响(±s) g

与阿霉素模型组同时间比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.2 雷氏养心活血汤加味对脏器指数的影响 与空白对照组比较，阿霉素模型组心脏指数显著降低(P<0.05)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT低剂量组、高剂量组心脏指数升高(P<0.01)，提示雷氏养心活血汤加味可显著对抗心脏指数的降低，可能有保护心脏作用。与空白对照组比较，阿霉素模型组肝脏指数升高(P<0.05)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT低剂量组、高剂量组肝脏指数差异无统计学意义，卡托普利组肝脏指数显著降低(P<0.01)，提示阿霉素可引起肝肿大，Lei′s YXT不能对抗，但卡托普利组可对抗肝肿大。与空白对照组比较，阿霉素模型组脾脏指数升高(P<0.01)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT高剂量组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组脾脏指数显著降低(P<0.01)。详见表2。

表2 雷氏养心活血汤加味对大鼠主要脏器指数的影响(±s) g/100 g

与阿霉素模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.3 雷氏养心活血汤加味对血压的影响 与空白对照组比较，阿霉素模型组大鼠收缩压、舒张压、平均压、脉压、心肌张力时间指数均显著降低(P<0.05或P<0.01)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT高剂量组收缩压、舒张压及平均压升高(P<0.05或P<0.01)，Lei′s YXT低剂量、芪苈强心胶囊和卡托普利对血压的作用不明显。详见表3。

表3 雷氏养心活血汤加味对大鼠血压的影响(±s)

与阿霉素模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.4 雷氏养心活血汤加味对Na+-K+-ATP酶、ANP、AngⅡ水平的影响 与空白对照组比较，阿霉素模型组血清AngⅡ、ANP、Na+-K+-ATP酶水平显著升高(P<0.01)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT高剂量组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组血清AngⅡ、ANP、Na+-K+-ATP酶水平显著降低(P<0.01)。详见图1。

与阿霉素模型组比较，*P<0.01图1 雷氏养心活血汤加味对大鼠血Na+-K+-ATP、ANP、AngⅡ水平的影响

2.5 雷氏养心活血汤对血糖、血脂的影响 与空白对照组比较，阿霉素模型组GLU、TC、HDL-C、LDL-C、TG水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT高剂量组、Lei′s YXT低剂量组及芪苈强心胶囊组GLU水平显著降低(P<0.01)，但对血脂代谢无显著影响。详见表4。

表4 雷氏养心活血汤加味对大鼠糖、脂代谢的影响(±s)

与阿霉素模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

2.6 雷氏养心活血汤对心肌酶及电解质的影响 与空白对照组比较，阿霉素模型组CK、LDH水平显著升高(P<0.01)，与阿霉素模型组比较，Lei′s YXT高剂量组、Lei′s YXT低剂量组、芪苈强心胶囊组、卡托普利组CK显著降低(P<0.01)，Lei′s YXT高剂量组、Lei′sYXT低剂量组LDH水平显著降低(P<0.05或P<0.01)。阿霉素注射对离子代谢无显著影响，说明采用Lei′s YXT、芪苈强心胶囊及卡托普利治疗后，亦对离子代谢无显著影响。详见表5。

表5 雷氏养心活血汤加味对大鼠心肌酶及电解质的影响(±s)

与阿霉素模型组比较，1)P<0.05，2)P<0.01

3 讨 论

心力衰竭是多种心血管疾病发展至后期阶段的共同结果，应属中医学“水气病”“心水”“水肿”“喘证”“心衰病”等证范畴。雷忠义教授认为，HF的基本病机是心阳气亏虚[5]，阳虚不能温化水饮，致水邪为患，水气上凌。而水邪既是一种病理性产物，又是一种致病因素，使心阳气进一步受到损伤。心阳气亏虚日久，由心而涉及脾、肾，故兼见心、脾、肾阳俱损。心阳气亏虚不足以推动血液运行，则血必有瘀。因此，血瘀是HF的另一个重要病理基础。血瘀的生成又可导致水液代谢障碍。气、血、水三者相互影响，不断变化而形成HF的病理基础。因此，HF为本虚标实之证，气虚阳虚为本，痰浊、血瘀、水停为标，病情发展到一定阶段，气虚导致阴虚，发展到终末期，阴伤及阳则致阴阳两虚。其治疗应以益气养阴、平衡阴阳为基本治则，并配合化痰、活血、利水之法。雷忠义教授运用雷氏养心活血汤治疗各种心脏病引起的慢性心力衰竭证属气阴两虚、痰瘀互结者，疗效显著，功能益气养阴、活血化痰。本方以西洋参益气养阴、安魂魄、定精神，麦冬养阴清心，丹参活血化瘀止痛、补心定志，陈皮可燥湿化痰、理气止痛，诸药合用益气养阴、活血化痰利水[6]。

本实验研究证明，雷氏养心活血汤可降低心力衰竭大鼠的体重，对抗阿霉素引起心脏指数的降低；阿霉素引起收缩压、舒张压、平均压、脉压、心肌张力时间指数显著降低，雷氏养心活血汤可显著升高收缩压、舒张压、平均压。血管紧张素是肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)中最重要的一部分，可以引起血管收缩、血压上升[7-8]，与HF的发生存在着十分紧密的联系。Ang Ⅱ通过激活蛋白激酶C(PKC)，通过核转录因子κB(NF-κB)通路增加肿瘤坏死因子(TNF)表达，引起心肌细胞的重构效应[9-10]。Ang Ⅱ与G蛋白偶联受体结合后，激活细胞膜及内质网上的Ca2+通道，迅速增加细胞内Ca2+浓度，引起钙超载，进而造成心肌收缩力增强、传导加快和心率加快，这对HF非常危险[11-12]。Ang Ⅱ还可通过激活NF-κB信号通路造成冠状动脉血管内皮细胞重塑，加重心肌细胞缺血缺氧，NF-κB信号通路是调控细胞生存和凋亡的重要信号通路，可致心肌纤维化、心肌肥厚。Ang Ⅱ还可促进醛固酮的生成，增加Na+-K+-ATP酶活性，引起水钠潴留。本研究结果显示，Lei′s YXT可显著抑制Ang Ⅱ表达，降低Na+-K+-ATP活性，提示雷氏养心活血汤可能通过抑制Ang Ⅱ表达，改善心肌重构，减少水钠潴留，从而改善心力衰竭症状，但其具体机制需要更加深入的研究以进一步阐明。

CK是肌酸激酶能量传递系统的关键酶，调控三磷酸腺苷(ATP)和磷酸肌酸(PCr)之间的能量转换。CK和LDH异常升高反映心脏能量代谢、能量物质转运出现异常。血浆心钠素是反映心功能的重要指标，ANP具有利尿排钠作用，还参与心脏血管损伤修复过程，干预心肌细胞及血管壁生长，影响其僵硬度[13]。白延平等[14]报道，HF病人治疗1～5个月后，心功能改善的病人ANP含量均显著降低。在本研究中，阿霉素注射导致大鼠血清ANP水平显著升高，造成心功能损伤，灌服高剂量雷氏养心活血汤后，CK、LDH、ANP水平显著降低，提示雷氏养心活血汤的治疗作用与抑制CK、LDH、ANP表达，改善其引起的心功能异常相关。

Na+-K+-ATP酶是存在于细胞膜上的一种膜蛋白，能够逆电化学梯度跨膜转运Na+和K+。心肌细胞内的Na+-K+-ATP酶能为心肌细胞持续收缩和舒张提供动力，维持细胞内外的钠钾平衡[15]。本研究发现，高剂量雷氏养心活血汤可显著降低阿霉素引起的Na+-K+-ATP酶升高，调节心肌细胞的转运功能，修正钠钾平衡。另外，研究还发现雷氏养心活血汤对抗阿霉素引起的血糖显著升高，具有一定的降糖作用。

综上所述，雷氏养心活血汤对慢性心力衰竭病人临床治疗作用显著，本研究通过阿霉素所致的心力衰竭大鼠模型初步探讨了雷氏养心活血汤治疗慢性心力衰竭的功能及作用机制，发现雷氏养心活血汤主要通过调节Ang Ⅱ、ANP、Na+-K+-ATP、CK、LDH酶表达发挥对心肌的保护及心脏的改善作用，但其具体机制需要更加深入的研究以进一步阐明。