红果小檗果乙醇提取物对四氯化碳致急性肝损伤小鼠的保护作用

买买提·司马义， 阿依努尔·吐鲁洪， 热孜宛古丽·约麦尔， 木克热木·克派吐拉

(新疆医科大学第一附属医院1静脉药物配置中心， 乌鲁木齐 830054； 2昌吉分院药剂科， 新疆 昌吉 831100；3新疆维吾尔自治区人民医院临床医学研究中心， 乌鲁木齐 830001； 4新疆吐鲁番市维吾尔医医院科研科， 新疆 吐鲁番 838000)

红果小檗果(Berberisheteropoda)为小檗科(Berberidaceae)小檗属(BerberisL)多年生带刺落叶灌木植物红果小檗的成熟果实,其中主要含有胡萝卜素酸、苹果酸、果糖、葡萄糖、小檗碱、绿原酸、抗坏血酸及色素等化学成分[1]，具有清热燥湿、泻火解毒、滋补肝肾及止泻等功效[2-3]。小檗属植物作为药食兼用的植物，在临床上多用于抗炎抗菌、免疫调节、抗肿瘤、血糖血脂调节、抗氧化、抗腹泻和抑制小肠推进功能亢进的治疗[4-9]。有研究表明红果小檗果提取物对慢性肝损伤大鼠肝脏有保护作用[10-11]，关于红果小檗果乙醇提取物对急性肝损伤保护作用的研究尚未见报道。本研究采用四氯化碳(CCl4)致急性化学性肝损伤小鼠模型，探讨红果小檗果乙醇提取物对小鼠肝损伤的保护作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器MP6001型电子天平(上海恒平科学仪器有限公司)，TGL-16G型离心机(金坛市华峰仪器有限公司)，SHB-III型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)，AUTOLAB全自动生化分析仪(意大利)，Coda-KM-00025-00型酶标仪(法国Bio Rad公司)，Microm EC350型组织包埋机，Microm HM340E型切片机，Microm STPl20型旋转式组织处理机(德国Thermo公司)。

1.2 试药四氯化碳(天津市福晨化学试剂厂，批号141205)，丙氨酸氨基转移酶试剂盒(GPT)(中生北控生物科技股份有限公司，批号150491)，天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒(GOT)(中生北控生物科技股份有限公司，批号150311)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物制品有限公司，批号201504)，生理盐水(新疆华世丹药业股份有限公司，批号150124)。

1.3 实验动物昆明种小鼠72只，雌雄各半，体质量(240±20)g，清洁级，由新疆医科大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(新)2013-0001。

1.4 药材红果小檗果药材2017年3月购买于新疆吐鲁番市维吾尔医医院草药房，经新疆医科大学药学院生药学教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为小檗科(Beberidaceae)小檗属(BeberiL.)红果小檗(Beberisheteropoda)的果实。

1.5 红果小檗果乙醇提取物的制备称取2.0 kg红果小檗果干燥后粉碎，置于圆底烧杯中按药液比1∶3(g∶mL) 加入95%乙醇溶液，回流提取3次，每次2 h，合并滤液，减压蒸馏浓缩，将浸膏冷冻干燥，所得固体粉末，备用。

1.6 动物的造模、给药、分组及指标测定取昆明种小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组：模型组(生理盐水10 mL/kg体质量)，阳性对照组(联苯双酯5 mg/kg体质量)，红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组(0.375、 0.75、1.50 g/kg体质量)，另取12只小鼠作为正常对照组 (生理盐水10 mL/kg体质量)，各组小鼠每天灌胃1次，连续7 d，末次给药后2 h，除正常对照组外其它各组小鼠腹腔注射 0.1%四氯化碳花生油溶液(10 mL/kg体质量)，16 h后眼球取血，3 000 r/min离心10 min分离血清，采用全自动生化仪测定各组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氯酶(AST)的含量。脱颈处死各组小鼠，取肝脏0.5 g用4℃生理盐水冲洗，加入4.5 mL 冰生理盐水搅拌制成浓度为10 %的肝组织匀浆，3 000 r/min离心15 min，取上清液，采用全自动酶标仪按试剂盒说明操作测定小鼠肝组织中GSH-Px、SOD和MDA含量。

1.7 肝脏组织病理学观察取小鼠肝脏，用10 %甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，HE染色，光学显微镜下观察肝脏病理组织改变情况，电子显微镜下以10个视野点为标准观察每个组织切片并统计病变所占视野面积的次数。

2 结果

2.1 红果小檗果乙醇提取物对急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响与正常对照组比较 ，模型组小鼠血清ALT、AST含量均升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组小鼠比较，红果小檗果乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠血清ALT、AST含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

2.2 红果小檗果乙醇提取物对急性肝损伤小鼠肝组织SOD、GSH-P及MDAx含量的影响与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织SOD、GSH-PX含量降低,MDA含量升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较，阳性对照组、红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠肝组织SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量降低，差异有统计学意义(P<0.05),见表2。

表1 红果小檗果乙醇提取物对急性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响

注：与正常对照组比较，△P<0.01； 与模型组比较，*P<0.01。

表2 红果小檗果乙醇取物对急性肝损伤小鼠肝组织SOD，GSH-Px及MDA含量的影响

注：与正常对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01； 与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 红果小檗果乙醇提取物对急性肝损伤小鼠肝组织病理学改变的影响正常组小鼠肝小叶结构正常，肝细胞无坏死、变性和炎性浸润等现象；模型组肉眼可见小鼠肝脏肿大、充血、质地脆弱、肝小叶界限模糊、肝索排列紊乱，肝细胞变性，大量炎性细胞浸润，说明 CCl4致小鼠急性肝损伤造模成功。与模型组比较，红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠肝小叶结构恢复正常，肝细胞形态正常，炎性细胞浸润减少，见图1。

正常对照组

模型组

阳性对照组

红果小檗乙醇提取物低剂量组

红果小檗乙醇提取物中剂量组

红果小檗乙醇提取物高剂量组

图1 各组小鼠肝组织病理切片图(HE×200)

3 讨论

ALT和AST是参与氨基酸代谢的2种转氨酶，主要富集于肝脏中，当肝细胞受到损伤或坏死时， ALT和 AST会外泄至血清中，使血清中转氨酶含量升高，血清中转氨酶含量的高低是检测肝细胞是否损伤的重要指标。药物的保肝作用与其抗氧化能力和清除自由基能力有关，SOD和GSH-Px是机体中2种重要的抗氧化酶，可通过清除代谢产生的氧自由基减轻细胞氧化损伤，SOD和GSH-Px活性的高低可直接反映机体清除氧自由基能力的大小[12]。MDA是一种脂质过氧化产物，可与生物大分子结合形成加醛复合物，进一步破坏细胞膜的结构和功能，MDA含量的高低，可以反映机体组织或细胞受自由基攻击和损伤的严重程度，因此通过检测肝脏中GSH-Px、SOD和MDA的含量，可以确定肝组织脂质过氧化和受自由基损伤的程度[13-16]。本研究发现，与正常对照组小鼠比较，模型组小鼠血清SOD、GSH-PX含量降低，MDA升高，表明CCl4致急性肝损伤的机制与其所致机体抗氧化酶活性降低和脂质过氧化作用等有关；与模型组小鼠比较，红果小檗乙醇提取物低、中、高剂量组小鼠血清SOD、GSH-PX含量升高，MDA含量降低，表明小檗果乙醇提取物通过升高肝脏中GSH-Px和SOD含量，提高机体抗氧化和清除氧自由基的能力，来抑制脂质过氧化链式反应的启动，使MDA在体内的积累减少，减轻CCl4对小鼠肝脏造成的急性损伤。综上所述，红果小檗果乙醇提取物能够减少肝细胞中ALT、AST的渗出，减轻CCl4所致的小鼠急性肝损伤，对急性肝损伤具有一定的保护作用。