Mindray BC6900网织红细胞参数参考区间的建立及与手工法检测的比较

周露露，陈燕，徐卫益

(1．浙江大学医学院附属第一医院检验科，浙江省临床体外诊断技术研究重点实验室，浙江 杭州310003；2．绍兴文理学院，浙江绍兴312000)

网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，是反映骨髓造血功能的重要指标，对贫血的诊断、鉴别诊断有一定临床意义，并且可作为早期评估骨髓造血功能和贫血性疾病治疗效果的指标[1，2]。随着自动化检测技术的不断发展，传统手工镜检因繁琐、耗时久、易受染色温度、时间、涂片厚薄、主观判断等因素影响，已逐渐被仪器法所替代[3]。有文献报道关于仪器法网织红细胞检测参考区间建立，但不同血液分析仪检测网织红细胞结果存在一定的差异[4]，因此需要实验室建立自己的参考区间；另外，文献报道不同品牌的仪器检测网织红细胞与手工法比较不尽相同，有文献表明Mindray BC6900检测网织红细胞结果与手工法有更好的相关性[5]，我们通过实验加以验证。

1 材料与方法

1．1 标本 仪器法参考区间建立的标本主要选取本院健康体检者390例的乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝的静脉血 1～2ml，其中男性 180 例，中位年龄49岁，女性210例，中位年龄46岁。实验对象纳入标准为内科、外科、心电图、肺部CT平扫、B超检查等体格检查无明显异常，血常规检测红细胞计数、白细胞计数、血小板计数及血红蛋白指标正常。方法学比较留取标本为73例临床患者的EDTA-K2抗凝静脉血1～2ml，其中男性40例，中位年龄46岁，女性33例，中位年龄49岁。

1．2 仪器与试剂

1．2．1 仪器法使用国产全自动血液分析仪Mindray BC6900及其原装配套试剂，每日运行3水平的室内质量控制；仪器进行定期校准和性能验证。

1．2．2 手工镜检法采用新亚甲蓝活体染色液，OLYMPUS CX31电子显微镜，采用Miller窥盘法进行手工法网织红细胞计数。

1．3 方法 仪器法采集静脉血1～2ml于EDTA-K2抗凝管中混匀，用Mindray BC6900全自动血液分析仪检测RET相关参数，参考区间的建立依据美国临床和实验室标准化协会C28-A3[6]文件推荐方法；手工法用新亚甲蓝活体染色液进行全血活体染色，依据SOP文件操作指南，染色25～30min，涂片、干燥、镜检。手工计数RET的百分比与血液分析仪测定结果进行比较分析。所有检测在标本采集后2h内完成。

1．4 统计学方法 数据采用SPSS 17．0软件进行统计分析。经正态性检验，网织红细胞相关参数为偏正态分布，男、女组间采用非参数秩和检验，用百分位数(P2．5，P97．5)来确定网织红细胞相关参数的参考区间；方法学比较采用逻辑回归分析，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果与分析

2．1 仪器法参考区间的建立 390例健康体检者Mindray BC6900全自动血液分析仪检测网织红细胞计数及其他相关参数。数据经统计分析显示，RET相关参数呈偏态分布，采用非参数秩和检验进行数据分析，结果如表1所示。RET%、IRF%、LFR%、MFR%检测结果男女间存在显著差异，而RET#、HFR%检测结果男女无差异。

表1 不同性别RET相关参数参考区间及比较

2．2 仪器Mindray BC6900全自动血液分析仪与手工镜检法的方法学比较 将仪器法检测网织红细胞参数（RET%）与手工染色镜检法的结果进行相关性统计学分析，结果如表2所示。相关性散点图见图1。手工染色镜检法 （X轴）与仪器Mindray BC6900（Y轴）检测结果通过线性回归分析，得出回归方程为 Y=0．911X+0．540。 两种方法比较，相关系数 r=0．965，相关性良好。

3 讨论

网织红细胞是介于晚幼红细胞与成熟红细胞之间的未完全成熟的红细胞，可反映骨髓红系的增生情况，对疾病的诊断、鉴别诊断、预后及疗效观察有着重要的辅助作用。随着血细胞分析仪自动化分析技术的不断发展，采用荧光染色和半导体激光技术测定原理来检测网织红细胞已在临床实验室普遍开展，其最大优点是检测效率高、重复性好、提供的参数多，解决了临床快速、准确、多参数获取网织红细胞检验报告的需求。截止目前临床使用的成人RET各参数参考区间并不完善，临床基础检验教科书（第5版）[7]、临床检验标准操作规程（第4版）[8]还是采用手工法参考区间。李小龙等[9]建立了温州地区成人网织红细胞相关参数的参考区间，但和金硕等[10]报道的结果存在较大差异，两者使用的检测仪器均为Sysmex XE-2100，主要表现在男女RET%和RET#的低限前者异常低，与临床不太符合，可能与选取的实验对象不同有关。本次实验得出的Mindray BC6900网织红细胞检测参考区间与金硕等报道的较为一致。因此，不同品牌、不同型号的血液分析仪检测网织红细胞参数的参考区间结果不一定存在较大差异，需要通过各实验室加以验证，当存在差异时，尤其是实验室有不同品牌仪器时应进行仪器间比对或建立各自的参考区间，以方便临床正确判断。

表2 仪器法与手工法检测网织红细胞结果比较

图1 仪器法与手工法检测网织红细胞结果比较散点图

经统计学分析，网织红细胞的各项参数 （除RET#）RET%、IRF%、LFR%、MFR%及 HFR%指标，男性参考区间均稍大于女性，这与男女之间不同生理因素有着重要关系，与男性红细胞数高于女性情况一致。同时在收集健康体检者血常规标本时，标本量较多，无法完全控制变量，导致在收集标本时很难从健康体检指标中判断出采血近期是否有体育锻炼、是否服用补品以及女性生理期情况等影响因素。这些影响因素对于网织红细胞各参数参考区间的建立有一定的影响。

方法学比较仪器法与手工法计数网织红细胞数据分析，73例样本中，仪器法结果均值高于手工法，标准差低于手工法，说明仪器法所检测网织红细胞的结果高于手工法的检测结果且有很好的重复性，原因主要为仪器法检测对点粒型网织红细胞敏感性优于手工法。两种方法相关性良好，P＜0．05，验证了相关文献关于比较不同型号全自动血液分析仪报道表明Mindray全自动血液分析仪与手工法相关性较好的分析[11，12]。

本实验关于参考区间的建立，将性别作为一个分组指标，从而建立男、女不同网织红细胞相关参数的参考区间。但由于标本数量的关系，本次实验未进行各年龄段的检测结果统计分析，参考金硕等文献报道RET参数RET%和RET#各年龄组之间无明显差异，因此本次实验没有将年龄作为分组指标。同时，仪器法检测都存在一定的影响因素，例如，嗜碱性点彩红细胞、疟原虫感染红细胞、H-J小体、Pappenheimer bodies(帕彭海默氏小体)等存在情况下，仪器法检测出的结果可能偏高，需要用手工法加以验证。

通过本次实验，Mindray BC6900仪器网织红细胞检测性能较好，与手工法具有良好的相关性，检测所使用的样本量很少，准确度高、检测效率高，能够广泛运用于临床。