HSP70-2基因多态性与急性胰腺炎的相关性分析

杨彩芳，闫乐，梁浩卫

(1．新密市中医院消化内科，河南 新密452370；2．河南中医药大学第一附属医院，河南 郑州 450000)

流行病学研究显示，急性胰腺炎的发病率可达（334～566）/10000 人[1]，特别是在具有暴饮暴食或过度饮酒的人群中，急性胰腺炎的发病率可持续性上升。不同的因素均可以促进急性胰腺炎的发生，包括胆道因素、饮食习惯或感染等均可以增加急性胰腺炎的发病风险。炎症因子的表达变化可能通过影响胰腺导管上皮细胞膜完整性，提高胰腺内分泌酶的持续性异常外分泌的风险，导致胰腺间质成分的分解代谢，促进胰腺炎的发生发展[2，3]。 热休克蛋白（heat shock protein，HSP）是重要的炎症因子，能够促进胰腺腺体细胞的损伤，促进导管管壁的狭窄，增加胰腺内分泌酶释放入胰腺间质成分的风险，导致自身性消化过程的发生[4]。HSP基因多态性的改变，能够通过影响炎症反应过程，加剧胰酶分泌障碍，影响导管上皮的狭窄程度等，参与急性胰腺炎的发病过程中。本研究选取2016年3月至2017年7月在河南省新密市中医院治疗的急性胰腺炎患者91例，探讨了相关指标的表达及其与患者病情严重程度的关系。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取2016年3月至2017年7月在河南省新密市中医院治疗的急性胰腺炎患者91例，其中轻型胰腺炎患者47例（轻型组），重型胰腺炎44例（重型组），采用性别、年龄配对选取健康志愿者100例作为对照组，各组受试者性别、年龄比较差异无统计学意义（P＞0．05），见表 1。 纳入标准：①诊断符合中华医学会消化病学分会胰腺疾病学组制定的标准[3]；②发病至入院时间＜72h；③患者及家属知情同意并签署同意书。排除标准：①合并有高血压、糖尿病、慢性阻塞性肺疾病等慢性基础性疾病；②妊娠期或哺乳期妇女。

1．2 检测方法 基因多态性检测：采集患者的外周血，采用EDYTA抗凝，采用经典的苯酚-氯仿法提取DNA，加入SYBR Green 1染料、上游引物、下游引物、dNTP，使得总体积达 20μl，上机，反应条件为：93℃ 2min、93℃ 1min、55℃ 2min， 共 40 个循环。

PCR产物扩增后进行基因多态性检测：参考multiplexkit试剂盒（南京凯基生物科技有限公司）使用说明，加入各位点对应延伸引物进行单碱基测序反应。并在ABI1310（Life Technologies，美国）进行电泳，结果用GENEMAPPER软件（Life Technologies，美国）进行分析。

1．3 观察指标 观察两组HSP70-2基因型和等位基因分布，同时比较不同预后患者性别、年龄、淀粉酶、C 反应蛋白（C reactive protein，CRP）、总胆固醇 （total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、CT 严重程度指数（CT severity index，CTSI）评分、急性生理与慢性健康评分Ⅱ（Acute physiological and chronic health score II，APACHEⅡ）。

1．4 统计学处理 统计分析采用SPSS 19．0软件，计量资料采用（x±s）表示，组间比较使用方差分析，两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用t检验；计数资料比较使用χ2检验；多因素分析采用Logistic回归分析；两组基因型情况采用Hardy-Weinberg平衡检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 HSP70-2基因多态性结果 HSP70-2基因PCR产物经PstⅠ酶切后凝胶电泳显示GG型（1139bp+936bp）、GA 型 （2075bp+1139bp+936bp）和 AA 型（2075bp）。

2．2 各组HSP70-2基因多态性比较 经Hardy-Weinberg平衡检验，轻型组、重型组和对照组受试者HSP70-2基因型分布符合遗传Hardy-Weinberg平衡。轻型组、重型组和对照组HSP70-2基因型和等位基因分布差异有统计学意义（P＜0．05），重型组基因型GG和等位基因G比例明显高于轻型组和对照组（P＜0．05）；轻型组基因型 GG 和等位基因 G比例明显高于对照组（P＜0．05），见表 2。

表2 各组HSP70-2基因型和等位基因分布[n（%）]

2．3 不同预后患者各指标比较 91例急性胰腺炎患者中，最终死亡16例（死亡组），存活75例（存活组）；死亡组和存活组性别、年龄和淀粉酶水平比较差异无统计学意义 （P＞0．05）； 死亡组 CRP、TC、TG、CTSI评分、APACHEⅡ评分和基因型 GG比例明显高于存活组（P＜0．05），见表 3。

2．4 多因素分析 将上述指标作为自变量，是否死亡作为因变量进行Logistic回归分析，结果显示CTSI评分、APACHEⅡ评分和HSP70-2基因型GG是急性胰腺炎患者死亡的影响因素 （OR=2．252、2．188 和 1．324，P＜0．05），见表 4。

3 讨论

急性胰腺炎的发生，能够导致患者多器官功能衰竭的发生，增加不良临床结局的发生风险。长期的临床随访研究显示，急性胰腺炎导致的患者多器官功能衰竭、弥散性血管内凝血、心脑血管疾病或肝肾功能衰竭的发生风险可显著上升[8]。一项包含了331例样本量的胰腺炎的发病结局的分析研究显示，临床上急性胰腺炎导致的急性肝功能衰竭的发生率可达15%以上，而病死率也可达5%以上[5]。临床上缺乏对于急性胰腺炎的早期诊断及临床预后评估指标，而本次研究通过对于炎症因子的多态性的研究，能够为临床上急性胰腺炎患者的临床预后评估提供重要的参考，并可以为揭示急性胰腺炎的发病机制提供一定的理论依据。

表3 死亡组和存活组各指标比较

表4 多因素分析

炎症因子的改变，不仅能够参与感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病的发生过程中，同时炎症因子的表达水平变化还能够通过诱导腺体细胞的内分泌功能的改变，加剧局部内分泌腺体组织的氧化应激损伤，促进组织间质成分的水肿，导致消化酶的排出困难[6，7]。炎症因子多态性的改变，能够影响炎症因子的生物学活性，导致胰腺间质成分的渗出性病变、出血、机化及组织间质成分的代偿性增生等病理过程，影响胰腺炎的发病过程[8，9]。HSP70-2基因多态性包括45kb的DNA序列，上游包含12个外显子及8个内含子。HSP多态性的改变，还能够影响下游白细胞介素（IL）-6或者IL-10等生物学因子的变化，促进单核细胞或中性粒细胞等对于胰腺组织的浸润，提高消化酶对于自身组织的侵蚀程度[10，11]。作为HSP多态性的重要成分，HSP70-2基因多态性已经被证实参与恶性肿瘤的发生过程，但在急性胰腺炎的发病过程中作用机制的分析研究不足。

在不同病情的急性胰腺炎患者中，基因型GG和等位基因G的表达具有显著的差异，其中患者的病情越重，其基因型GG和等位基因G的表达比例越高，提示HSP基因多态性可能显著影响了急性胰腺炎的发病过程，同时其能够影响患者的病情进展速度，导致多器官功能衰竭的发生，从机制上考虑，HSP70-2多态性中基因型GG和等位基因G的差异对于患者病情的影响，可能与下列几个方面的因素有关[12，13]：①HSP70-2基因的GG或G等位基因的表达差异，能够导致患者HSP上游转录基因活性的改变，导致HSP的炎症浸润的加剧，促进患者肝肾上皮组织细胞的炎症损伤，影响患者的临床治疗预后；②HSP70-2基因区域G等位基因多态性的改变，能够影响细胞膜上钙离子通道的开放，进而进一步加剧胰腺组织的缺血/再灌注损伤，导致胰腺导管的痉挛及狭窄。付林尧等[14]在探讨了83例样本量的急性胰腺炎患者的临床结局后发现，HSP高表达的患者中，胰腺炎治疗后的病死率可达4%以上，同时HSP多态性中等位基因型的差异，能够显著影响患者的胰腺消化酶的释放速度，增加导管阻力，提高消化酶突破导管后浸润胰腺间质成分的风险，这与本次研究的结论较为一致。在病死组胰腺炎患者中，甘油三酯(triglyceride，TG)、总胆固醇（total cholesterol，TC）、胰腺炎严重程度床边指数评分标准（CTSI)等指标显著上升，表明血脂代谢紊乱或胰腺炎相关危重症评分体系是影响急性胰腺炎患者临床预后的重要指标，而多态性的分析也可以发现，基因型GG比例显著上升，表明基因型的改变能够影响患者的临床预后，其原因主要考虑与HSP多态性的改变对于患者病情进展过程中胰腺组织中消化酶的分泌速度、急性肾功能衰竭的发生等的影响有关。最后，相关分析也可以发现，CTSI评分、APACHEⅡ评分和HSP70-2基因型GG是急性胰腺炎患者死亡的影响因素，进一步提示了HSP70-2基因多态性对于患者临床预后的影响[15]，这主要由于CTSI评分、APACHEⅡ评分能够反应患者的病情严重程度，评估胰腺组织病理性损害的程度；而HSP70-2基因多态性对于患者临床预后的影响，这主要考虑与HSP70-2基因多态性影响到胰腺组织的自身损伤、促进瀑布式炎症反应的激活等因素有关。

综上所述，HSP70-2基因型GG或者G等位基因的表达变化，能够影响急性胰腺炎的病情进展，并与患者的临床预后密切相关。