川西北地区人乳头瘤病毒感染与宫颈病变程度的相关性研究

胥明勇，吴泳桦

(绵阳市中心医院检验科，四川 绵阳 621000)

目前认为宫颈上皮内瘤变（CIN）及宫颈癌发生与人乳头状病毒 (Human Papillomaviruses，HPV)感染密切相关[1]。为了了解本地区女性感染HPV的年龄分布情况，以及宫颈病变与HPV感染之间的关系，我们使用HPV基因分型（PCR-反向点杂交法）检测技术，进行HPV分型检测研究，探讨本地区HPV亚型感染与年龄分布、宫颈病变程度的相关性。

1 材料与方法

1．1 标本来源 收集2015年7月至2016年8月来自我院门诊及住院女性患者3947例，年龄14～87岁，平均39．15岁，其中宫颈炎患者955例，宫颈上皮内瘤变140例（CINⅠ～Ⅲ），宫颈癌110例。

1．2 仪器与试剂 珠海黑马9600扩增仪 （广州珠海），YN-H16型杂交仪(深圳亚能)；HPV 基因分型试剂(深圳亚能）。

1．3 检测方法

1．3．1 HPV样本采集及保存 临床医生使用宫颈采集器采集脱落细胞，放入专用取样管中，贮存于2～8℃冰箱中保存备用。

1．3．2 HPV分型检测 由工作人员严格按HPV基因分型进行检测，在YN-H16型杂交仪中完成杂交。质控标准：阴性质控品只有内控位点显色，阳性质控品必须在相应的HPV基因型位点及内控位点显色；结果判读：根据显色信号的有无及位置判断HPV基因型。该试剂盒能检测23个亚型，其中包含有 18 种高危亚型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83，5 种 低危型：HPV6、11、42、43、81。

1．4 统计学方法 采用SPSS 19．0统计软件包进行统计学分析，计数资料以率表示，比较采用χ2检验，P＜0．05 为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 HPV总感染率及亚型分布情况 在3947例临床标本中21种亚型全部检出，共检出HPV阳性1140例，总阳性率为28．88%，其中感染高危型HPV为737例，阳性率为18．67%；感染低危型HPV为182例，阳性率为4．61%；感染混合型（高危型与低危型）HPV为221例，阳性率为5．60%，高危亚型HPV52、16、58检出率居前3位。

2．2 各年龄组HPV感染情况 HPV感染人群分布以≤40岁年龄组为主，≤20岁组感染率最高，阳性率为 85．29%，明显高于其它年龄组（P＜0．05），21岁后随着年龄的增加，其检出率呈下降趋势，但大于60岁检出率又有明显上升。见表1。

2．3 宫颈病变患者感染HPV结果 三种不同程度宫颈病变患者感染HPV阳性率相比较，P＜0．05，差异具有统计学意义；HPV高危型在三种不同程度宫颈病变患者感染HPV阳性率相比较，P＜0．05，差异有统计学意义。见表2。

表1 各年龄组HPV感染情况

表2 宫颈病变患者感染HPV结果[n（%）]

2.4 HPV亚型在宫颈病变中分布 在955例宫颈炎患者中，阳性率前4位的亚型为HPV16、52、58、51；在140例CIN患者中，阳性率前4位的亚型为HPV16、58、52、33；在 110 例宫颈癌患者中，阳性率前 4 位的亚型为 HPV16、52、53、39。通过对 HPV各亚型在三种不同程度宫颈病变阳性率中相比较，HPV16、58、56、33 差异有统计学意义，P＜0.05（χ2值分别为 31.477、13.138、7.74 和 13.179；P 值分别为 0.000、0.001、0.021和 0.001）， 其余亚型的差异无统计学意义(P＞0.05)。见表3。

3 讨论

目前已鉴定出HPV有200多个基因型，其中约50余型可以感染人生殖道[2]。根据发生宫颈癌的风险性将HPV基因型分成高危型和低危型[3]，特别是高危亚型持续感染，可以引起宫颈上皮内瘤病变甚至宫颈癌的发生[4]，故对HPV进行分型研究具有重要的临床价值。

基因芯片技术被认为宫颈癌筛查首选HPV分型检测方法，对于宫颈癌的预后评估具有重要的临床价值。通过该方法检测发现本地区HPV总阳性率为28.88%，高于三亚地区[5]，而低于浙江地区[6]、贵州地区[7]，其中感染高危型HPV的阳性率为18.67%，却高于景德镇地区[8]报道，这些差异也许与地域分布、环境有关，还与研究者选择的研究对象，选取的检测方法有关[9]。各亚型在本地区检出率前3位分别为HPV52、16、58，三亚地区检出率前3位分别为HPV16、6、58；浙江地区检出率前3位分别为HPV16、11、58；贵州地区检出率前3位分别为HPV16、52、58，显然感染的HPV亚型分布存在一定的地区差异性，这对于HPV疫苗的研发及使用，都具有一定的指导作用[10]。

表3 HPV亚型在宫颈病变中分布[n（%）]

HPV感染的年龄分布结果显示，HPV感染率与年龄有一定关系。本组资料中≤20岁组阳性率最高为85.29%，明显高于其它年龄组（P＜0.05），21岁后随着年龄的增加，其阳性率呈下降趋势，但大于60岁阳性率又有明显上升，表明年轻女性及老年女性是本地区HPV感染的主要高发人群。就这感染特点，年轻女性阳性率高也许与患者性生活开始早及生育年龄较小，因这一时期是处于宫颈鳞柱上皮转化期，易受HPV感染[11]，以及与该年龄段总样本量太少有关。而老年女性阳性率高可能是由于与机体绝经前后激素水平的改变有关，若宫颈遭到持续的HPV高危型感染，可能进一步引起宫颈恶变，又特别是绝经前感染了HPV高危型没有及时清除，在绝经后尤其易于发展成为宫颈癌[12]。据李岩[13]研究表明HPV高危型感染与女性阴道内环境的改变存在密切关系，这也许是引起本地区年轻女性及老年女性HPV感染率高的另一个诱因，应引起临床上高度重视。所以，年轻女性及老年女性成为本地区宫颈癌筛查的主要人群，对预防宫颈癌的发生和早期干预治疗具有重要意义。

从宫颈病变患者感染HPV结果可以看出，感染HPV高危型阳性率随宫颈病变程度的增加而增加，本研究结果与颜晓慧等[14]报道一致，从而说明了HPV高危型感染是引起发生CIN、宫颈癌的首要因素。在宫颈病变患者感染HPV亚型中，经分析阳性率前4位的亚型，HPV16、52为宫颈病变患者共同感染亚型，而HPV58只出现在宫颈炎、CIN中，HPV51只出现在宫颈炎中，HPV33只出现在CIN中，HPV53、39只有出现在宫颈癌中。由此可见， 本地区 HPV16、52、58、53、51、39 和 33 是常见的高危型，在宫颈癌筛查中应引起释重视。

通过对HPV各亚型阳性率在宫颈病变中相比较，HPV16、58、56和33型与宫颈病变程度相关。对宫颈癌患者进行Meta分析，发现HPV16为宫颈癌患者中最常见亚型[3]，这是因为HPV16在促癌物的作用下能引起人胚宫颈上皮细胞的恶性转化[15]。在本文研究中，HPV16在宫颈病变阳性率中位于首位，因此针对宫颈炎患者适时筛查、及时治疗，对于防止感染了HPV的宫颈炎患者向CIN、宫颈癌转化具有十分重要的临床意义。在国内外报道中，宫颈癌患者感染HPV的主要致病型中，HPV18仅次于HPV16，但在本文的研究中HPV18既不是常见的亚型，又不是主要的致病型，这可能是本地区HPV基因型分布特点。在宫颈病变中，虽然HPV52检测阳性率居于2、3位，但是与宫颈病变程度不相关，然而阳性率相对较低的HPV56、33型，却与宫颈病变程度相关，还有待进一步研究。本研究认为，在宫颈癌筛查中如发现HPV16、58、56和33型阳性的患者，要及时干预、治疗，以防止其发展为宫颈癌。

综上所述，女性感染HPV，特别是感染了HPV高危型，是引起CIN和宫颈癌发生的主要原因，所以，HPV基因分型检测对于本地区HPV感染的诊断以及流行病调查具有十分重要的临床意义。