甲状腺恶性结节CT与结节内癌基因表达的相关性分析

刘俊 王伟

甲状腺癌占全身恶性肿瘤的1%，且近年发病率迅速上升、呈年轻化趋势。甲状腺癌病理分型不同最终治疗结局也存在较大差异，早期确诊甲状腺癌并明确其恶性程度对患者治疗方式选择、良好预后获得均有重要意义［1］。随着影像学技术的快速发展，CT成为评估甲状腺结节性质的重要手段，但关于CT纹理分析参数与甲状腺癌生物学行为内在联系的研究鲜见报道，尤其是癌基因表达在甲状腺癌增殖、侵袭等生物学行为中起重要作用。本资料研究甲状腺恶性结节CT与结节内癌基因表达的相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2014年12月至2018年2月于本院行甲状腺结节切除术治疗的甲状腺结节患者317例。入组标准：（1）术前接受CT纹理分析；（2）签署知情同意书。排除标准：（1）结节直径＜1.0cm者；（2）甲状腺结节无明显组织学结果。根据结节病灶病理结果分为恶性组287个、良性组122个。

1.2 CT扫描设备及检查方法 采用PHILIPS Billiance CT64 进行术前甲状腺结节纹理分析，患者取仰卧位，碘海醇100ml（恒瑞医药公司生产，浓度为0.3mgI/ml）注入肘正中静脉，注射速度2.5ml/s，单期延迟时间45s。扫描范围为颅低-主动脉弓，颈部增强CT扫描层厚、层间5mm，重建层厚1.25mm，其余部位扫描螺距0.984、视野300mm×300mm，扫描完成后传输原始数据至东芝Aquilion工作站，手动勾画结节轮廓并分析感兴趣区（ROI）内反映纹理特征的具体参数，包括熵值、偏度、峰态［2］。上述各个参数均分别测量3次并取平均值。

1.3 癌基因表达量检测试剂及方法 取冻存的甲状腺结节标本组织，复温后采用荧光定量PCR法扩增其中目的基因，步骤如下：（1）加入TRIZOL试剂（购自武汉纯度生物科技有限公司，货号CD-G102523m）裂解细胞，每1ml裂解液中加入0.2ml氯仿（购自厦门研科生物技术有限公司，货号EYK-ZAS-M-502-13），混匀后15～30℃条件下孵育2min，于4℃条件下高速离心（12000rpm、15min），留取无色水相上层置于无RNA酶的离心管中；（2）加入等体积异丙醇（购自北京智杰方远科技有限公司，货号0918-20L）并高速离心，移除上清液后清洗、干燥RNA沉淀；（3）加入无RNA酶的水40μl溶解RNA沉淀，获取RNA溶液并用紫外吸收法检测其浓度、纯度；（4）制备反应体系并采用逆转录试剂盒合成样品cDNA、冻存于-80℃待用；（5）制备β-actin阳性模板的标准梯度及反应体系，选择待测样品的待测基因进行实时定量PCR。本次研究中待测基因为原癌基因：RET、RAS、TRK、PAX8-PPARγ1；抑癌基因：DMBT1、DPC4、PTEN、TIP30。甲状腺良性结节中上述待测基因表达量设置为标准值100，计算甲状腺恶性结节中对应基因的相对表达量。

1.4 统计学方法 采用SPSS 21.0统计软件。计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，相关性分析采用Pearson检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组CT纹理分析参数值比较 见表1。

表1 两组CT纹理分析参数值比较（x±s）

2.2 两组甲状腺结节中原癌基因表达量比较 见表2。

表2 两组甲状腺结节中原癌基因表达量比较（x±s）

2.3 两组甲状腺结节中抑癌基因表达量比较 见表3。

表3 两组甲状腺结节中抑癌基因表达量比较（x±s）

2.4 甲状腺恶性结节熵值与原癌基因、抑癌基因表达量的相关性分析 经Pearson检验发现，甲状腺恶性结节的CT熵值与其中原癌基因表达量呈正相关，与抑癌基因表达量呈负相关（P＜0.05）。

3 讨论

CT纹理分析采用laplacian of Gaussian过滤技术，通过精细纹理来表现实体瘤的解剖结构，即使在较低分辨率的条件下仍能提供有辨识力的信息［3］。本资料结果显示，恶性组CT纹理分析参数中熵值高于良性组（P＜0.05）。但偏度、峰态水平差异无统计学意义（P＞0.05）。出现此种情况，原因在于熵值与目标结节间强度密切相关，恶性甲状腺结节硬度增加且可能存在钙化灶，故其熵值异常增高［4］。偏度、峰态主要反映目标结节的平均亮度，癌变结节早期亮度尚未发生明显改变，故导致偏度、峰态水平与良性结节者相似［5］。据此结果说明CT纹理分析参数中的熵值可敏感鉴别甲状腺良恶性结节。

在肿瘤发生、发展中癌基因起重要作用，RET为基因编码酪氨酸激酶家族，与受体上的酪氨酸磷酸化区域作用启动胞内信号通路、调节癌细胞的增殖、分化；RAS基因是关联酪氨酸激酶受体及多种信号传导通路的传感器，可持续促进细胞生长；TRK基因激活使其获得致癌性，可促进腺瘤向癌细胞的转化；PAX8-PPARγ1基因参与细胞周期调控［6］。本资料中恶性组甲状腺结节原癌基因RET、RAS、TRK、PAX8-PPARγ1 mRNA的表达量均高于良性组甲状腺结节（P＜0.05）。相关性分析发现甲状腺恶性结节CT纹理分析参数中熵值与上述原癌基因表达量呈正相关（P＜0.05），说明熵值可客观反映甲状腺恶性结节中原癌基因的异常高表达程度。

原癌基因与抑癌基因互生互存，生理状态下两者呈动态平衡。DMBT1基因参与人体免疫防御功能的建立；DPC4在恶性肿瘤中呈基因突变、功能丧失状态，导致下游基因Smad4活性丧失、基因转录失活；PTEN通过调控下游信号通路PI3K/AKT、FAK、ERK1/2等发挥抑癌作用；TIP30通过调节Tat蛋白转录促进肿瘤细胞凋亡、抑制转移。本资料中恶性组甲状腺结节抑癌基因DMBT1、DPC4、PTEN、TIP30 mRNA的表达量均低于良性组甲状腺结节（P＜0.05）。相关性分析发现甲状腺恶性结节CT纹理分析参数中熵值与抑癌基因表达量呈负相关（P＜0.05），说明抑癌基因表达量下降是细胞癌变的原因之一。

综上所述，CT纹理分析参数中的熵值可用于甲状腺良恶性结节的鉴别，且具体熵值与甲状腺癌细胞的恶性程度直接相关，为日后甲状腺癌早期诊断及病情评估的参考依据。