EGFR、VEGF和nm23在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

夏露花，宗 平，王新华，董占飞，崇 乐，秦永德

(新疆医科大学a.第一附属医院核医学科，乌鲁木齐 830054； b.附属肿瘤医院核医学科； c.附属肿瘤医院超声科，乌鲁木齐 830011)

肺癌是临床常见的恶性肿瘤之一，其病死率居各种恶性肿瘤之首，而非小细胞肺癌(NSCLC)在肺癌中占80%[1]。NSCLC包括鳞癌、腺癌和大细胞癌，其癌细胞生长分裂缓慢，扩散转移较晚：因此，尽管在当今发达的医疗科技下，仍有75%左右的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低[2]。付鹏等[3]采用康莱特注射液治疗53例中晚期NSCLC，经过3年随访发现，患者中位生存时间仅为(18.5±1.6)个月，生存率仅为39.6%(21/53)。POLANSKI等[4]研究表明，由于NSCLC早期诊断率较低，多数患者确诊时已进入晚期，其5年生存率仅为15%。李飞等[5]研究显示，由于大部分NSCLC扩散比较早，发现时已错失手术机会，5年生存率仅为12%～15%。但是，随着医学工作者对肿瘤分子生物学的研究，对肿瘤组织中多基因的异常表达以及癌基因的监测分析取得了较大的进展[6]。王利伟等[7]对70例舌癌患者研究发现，nm23-H1 mRNA在舌癌中低表达,且其表达水平与肿瘤侵袭、转移呈负相关,而与生存时间呈正相关,认为监测nm23-H1 mRNA的表达水平对术后辅助治疗有重要意义。而对于NSCLC的研究主要是表皮生长因子受体(EGFR)、血管内皮生长因子(VEGF)和肿瘤转移抑制基因——nm23等。为此，本研究收集180例NSCLC组织标本，采用免疫组织化学EnVision法对其进行检测，分析其表达情况与相关性。

1 资料与方法

1.1 病例资料

收集新疆医科大学第一附属医院和新疆医科大学附属肿瘤医院2016年1月至2018年9月间外科手术切除的NSCLC组织标本(研究组)180例，术前均接受放化疗及其他肿瘤治疗。其中男107例，女73例，年龄24～77岁，平均(52.36±7.52)岁。鳞癌69例，腺癌111例；高分化癌38例，中分化癌53例，低分化癌89例；有淋巴结转移131例，无淋巴结转移49例。按照国际抗癌联盟(UICC)[8]2009年肺癌分期标准进行分期，Ⅰ期37例，Ⅱ期45例，Ⅲ期73例，Ⅳ期25例。收集同期在新疆医科大学第一附属医院和新疆医科大学附属肿瘤医院门诊体检的健康体检者的正常肺组织标本(对照组)53例，排除患有严重心、肝、肾等器质性疾病和血液疾病、临床资料不完整及不愿意参与本研究的患者。其中男36例，女17例，年龄25～74岁，平均(50.65±7.87)岁。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 仪器与试剂

仪器：CUT 6062型全自动石蜡切片机、Slidetec HEAT型烤片机均购自德国LABSUN公司；102M型Motic显微镜、摄像装置均购自德国Motic公司；EPSON STYLUS PHOTO 915型医学图像分析系统购自北京航空软件有限公司；HH.CP-160型CO2培养箱购自常州恒隆仪器有限公司。

试剂：EGFR鼠抗人单克隆抗体、VEGF鼠抗人单克隆抗体和nm23鼠抗人单克隆抗体均购自北京奥维亚生物技术有限公司；免疫组织化学试剂盒、PBS缓冲液、nm23抗体稀释液、粘片剂POLY-LYSIN均购自福州迈新生物技术开发有限公司。

1.2.2 检测方法

将研究组及对照组的组织标本均经10%甲醛固定，制成石蜡标本。然后，采用全自动石蜡切片机连续切片4 μm，贴附于载片玻璃，烤片机烘干。冷却后，脱蜡，逐级脱水，抗原修复。使用PBS缓冲液冲洗，分别加入EGFR鼠抗人单克隆抗体、VEGF鼠抗人单克隆抗体和nm23鼠抗人单克隆抗体，放置37 ℃、5%CO2培养箱中培养。然后，行蒸馏水冲洗，苏木精-伊红(HE)染色，中性树胶封片，在显微镜下观察摄像，医学图像分析系统进行分析。采用免疫组织化学EnVision法检测2组EGFR、VEGF和nm23的表达水平，具体操作根据试剂盒说明书进行。用已知的NSCLC阳性片作为阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

分析EGFR、VEGF和nm23在非小细胞肺癌和正常肺组织中的表达情况[9]：细胞中出现棕黄色颗粒表示为阳性(+)，根据染色程度及阳性细胞数量进行阳性细胞评分：阳性细胞数<25%为1分，25%～50%为2分，51%～75%为3分，75%以上为4分，阴性为0分。细胞染色程度评分[10]：肿瘤细胞不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。评分标准：上述两项之和0分为(-)，1～2分为(+)，3～6分为()，7分及以上为()。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 EGFR、VEGF和nm23的表达

研究组EGFR、VEGF阳性表达率均高于对照组，nm23阳性表达率低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 对照组和研究组EGFR、VEGF、nm23表达率的比较

2.2 EGFR、VEGF和nm23表达与NSCLC临床病理特征的关系

不同性别、肿瘤分化程度的EGFR、VEGF、nm23阳性表达率比较差异无统计学意义(P<0.05)，不同的病理类型、肿瘤分期VEGF、nm23阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。鳞癌、肿瘤分期为Ⅰ—Ⅱ期EGFR阳性表达率均低于腺癌、肿瘤分期为Ⅲ—Ⅳ期，有淋巴结转移的EGFR、VEGF、nm23阳性表达率高于无淋巴结转移，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 EGFR、VEGF和nm23表达与NSCLC临床病理特征的关系

2.3 EGFR、VEGF和nm23的相关性

相关性分析结果显示，NSCLC组织中EGFR表达与VEGF表达、VEGF表达与nm23表达均无明显的相关性(r=-0.183，P>0.05；r=-0.137，P>0.05)，但EGFR表达与nm23表达呈负相关(r=-0.267，P<0.05)。

3 讨论

EGFR是上皮生长因子(EGF)细胞增殖和信号转导的受体。激活后，EGFR由单体转化为二聚体，从而促进肿瘤的发展和转移。有研究[11]显示，EGFR表达在许多恶性肿瘤组织中都较高，且这种高表达或许与患者的预后有着紧密关联。呼铁民等[12]对64例脑胶质瘤患者进行研究发现，EGFR在脑胶质瘤中阳性率较高,且与脑胶质瘤恶性程度具有相关性,可为临床诊疗及预后提供指导。本研究结果显示，不同性别和肿瘤分化程度的EGFR阳性表达率比较差异无统计学意义(P<0.05)，而EGFR阳性表达率：鳞癌、Ⅰ—Ⅱ期均低于腺癌、Ⅲ—Ⅳ期，有淋巴结转移高于无淋巴结转移(P<0.05)，这也进一步证实了EGFR在肿瘤的发展和转移中承担着重要的角色。

VEGF是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子，其可以通过与血管内皮上的相应受体结合来促进内皮细胞增殖，同时可增加血管通透性，使内皮细胞迁移，诱导肿瘤血管生成，维持肿瘤的继续生长，对肿瘤的生长、转移具有促进作用。有研究[13]表明，在正常的肺组织中VEGF阳性率在6.7%以下，而在肿瘤肺组织中则高达35%～65%。本研究结果显示，对照组VEGF阳性表达率为3.77%，研究组VEGF阳性表达率为40.56%，其与徐建平等[14]研究的结果基本一致。此外，有淋巴结转移VEGF阳性表达率高于无淋巴结转移(P<0.05)，这也进一步证实其能够促进肿瘤的生长和转移。

nm23是一种肿瘤转移抑制基因，对肿瘤的转移具有抑制作用，对保护人体健康具有重要作用[15]。李春成等[15]研究了在乳腺癌转移、预后中nm23基因的表达情况，发现在良性肿瘤中nm23呈高表达，且在淋巴结转移后，nm23表达减弱，并与其呈负相关。潘纯国等[16]研究了在乳腺癌转移、预后中nm23基因的表达情况，发现在良性肿瘤中nm23呈高表达，且在淋巴结转移后，nm23表达减弱，并与其呈负相关。进一步研究发现，nm23与NSCLC等多种肿瘤转移过程密切相关，且淋巴结转移的nm23阳性率明显高于无淋巴结转移，术后复发转移组的阳性率较低，生存>5年组的阳性率较高，提示nm23的表达与NSCLC的转移呈负相关，预后呈正相关。本研究结果显示，不同的性别、肿瘤分化程度、病理类型、肿瘤分期nm23阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)，这也提示针对nm23的表达还需要做进一步的研究。

综上所述，EGFR、VEGF和nm23在NSCLC中的表达与淋巴结转移存在一定的关联。此外，EGFR的表达还与病理类型、肿瘤分期具有关联，因此，对EGFR、VEGF和nm23进行免疫组织化学检测，有助于提高临床对肿瘤的病变程度的判断准确度，同时对患者治疗方案的制定也具有重要作用。