鱼油中21种脂肪酸的检测

聂法慧

青岛菲优特检测有限公司 山东青岛 266000

深海鱼油富含不饱和脂肪酸，主要有效成分为欧米伽3不饱和脂肪酸。欧米伽3不饱和脂肪酸的主要成分为EPA（二十碳五稀酸）、DHA（二十二碳六稀酸）具有增强记忆、改善动脉硬化[1]、促进婴幼儿大脑发育等重要功效。因此，对其有效组分进行测定具有重要意义。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器与分析条件。岛津GC2010plus气相色谱仪。

色谱柱：SP-2560，100m×0.25mm×0.20μm；检测器：氢火焰离子化检测器（FID）。

载气：高纯氮气99.999%；色谱柱流量：1.67mL/min；进样口温度：250℃；检测器温度：260℃；温度程序：初始温度140℃保留5min，140-152℃升温速度2℃/min；152-175℃升温速度3℃/min；175-205℃，升温速度4℃/min；205-230℃,升温速度10℃/min，保留20min；230-240℃，升温速度5℃/min，保留5min；进样量：1μL；分流比：40：1。

1.2 试剂和溶液

实验用水为GB/T6682规定的一级用水。

（1）氢氧化钠：优级纯。

（2）甲醇：色谱纯。

（3）无水硫酸钠：分析纯。

（4）氯化钠：分析纯。

（5）三氟化硼-甲醇溶液：14%。

（6）异辛烷：色谱纯。

（7）0.5M氢氧化钠–甲醇溶液：2g氢氧化钠溶于100mL甲醇中。该溶液放置较长时间，可能会产生少量白色碳酸钠沉淀，不影响甲酯的制备。

（8）饱和氯化钠溶液：36g氯化钠溶于100mL水。

1.3 标准曲线

将32种脂肪酸甲酯混合标准品（上海安谱GLC-461）配成标准系列，浓度分别为3，10，50，100，150μg/mL，以30μg/mL二十三烷酸甲酯为内标，以脂肪酸甲酯与内标物浓度比为横坐标，响应峰面积比为纵坐标，作标准曲线[2]。

1.4 样品制备

样品前处理。准确称取样品0.02g于已准确加入0.9mg二十三烷酸甲酯的50mL玻璃离心管中，加入1.5mL氢氧化钠-甲醇溶液，盖紧盖子，涡旋混合，沸水浴5min，通风橱冷却，加2mL三氟化硼-甲醇溶液，盖紧盖子，涡旋混合，沸水浴30min，冷却，加5mL异辛烷，充氮气20s，盖紧盖子，涡旋混合。加5mL饱和氯化钠溶液，充氮气20s，盖紧盖子，涡旋混合，离心机2500r/min离心10min。取上清液加入盛有0.5g无水硫酸钠的带盖试管中，混匀，上清液稀释6倍过有机过滤器（0.22μm），气相色谱仪检测。

2 结果与讨论

2.1 定性与定量

（1）定性。由于脂肪酸属于同系物，出峰顺序与碳链长度有一定的关系，对照标准图谱，判断21种脂肪酸甲酯的出峰顺序，见图。

（2）定量。以二十三烷酸甲酯为内标，以脂肪酸甲酯与内标物浓度比为横坐标，响应峰面积比为纵坐标，作标准曲线。将处理好的待测液注入气相色谱仪中，以保留时间定性，以目标峰与内标峰面积比与标准曲线比较确定待测液中脂肪酸甲酯的浓度[3]。

样品中脂肪酸含量（%）计算如下式：

式中：

X——样品中脂肪酸的质量分数；

C——待测液中脂肪酸甲酯浓度，单位：μg/mL；

V——定容体积，单位：mL；

f——稀释倍数；

m——样品质量，单位：g；

FFAMEi-FAi——脂肪酸甲酯i转化成脂肪酸的系数。

2.2 标准曲线

在实验条件下，21种脂肪酸甲酯响应具有良好的线性关系，R2大于0.999。

2.3 方法的精密度和准确性

（1）方法精密度。选取两个鱼油作为样品，每个样品测定10次，分别计算21种脂肪酸含量，相对标准偏差在1.8%-4.8%之间，符合检测要求。

（2）方法准确度。在鱼油样品种做脂肪酸甲酯的添加回收，平行测定10次，平均回收率在97-105%之间。购买有证标准物质（FapasT14152）进行测定，结果都在允许误差范围内。该方法准确度符合检测要求[4]。

3 结语

通过测定结果可以看出，本方法能够对鱼油中的脂肪酸进行较好的分离定性和定量检测，具有较好的稳定性和准确性。能够较为准确的检测鱼油中脂肪酸的含量。