苍柏祛痛胶囊的拆方药效学研究

吴晶，赵海燕，王兴刚，于博，贾忠*

(1.兰州市中医医院,甘肃 兰州 730050；2.兰州市肺科医院,甘肃 兰州 730046；3.兰州市第二人民医院,甘肃 兰州 730046)

中医理论中，痛风又名历节、白虎历节，属“痹病”范畴。素体阳盛、脏腑壅毒、积热是形成毒邪攻入血分、骨节的先决条件。积热日久，热郁为毒是发生本病的根本原因；湿热浊毒、流注周身及关节，若正虚邪恋、湿毒不去、循经窜络，附于骨节形成痰核，坚硬如石。故湿热浊毒是形成痛风石的主要原因。

苍柏祛痛胶囊组方来源于甘肃省名老中医贾奇峰的经典验方，由黄柏、苍术、川牛膝等组成。该验方已在临床用于治疗痛风多年，疗效显著。甘肃省中医药大学李成义教授认为苍柏祛痛胶囊正是宗上述病因病机，以中医原则立论立法成方。他认为全方是以“三妙丸”为基础方，通过总结临床经验加减而来，故本方是“君臣佐使”配伍皆全的验方。为进一步认识苍柏祛痛胶囊组方的科学性，本研究通过现代药理学研究手段比较各拆方的主要药效学，分析不同配伍组合间抗炎、镇痛、降酸的效果，用以佐证苍柏祛痛胶囊君臣佐使的配伍合理性。

1 实验材料

1.1 实验动物

清洁级昆明种小鼠，雌雄皆有,购自兰州大学实验动物中心，许可证号：SCXK(甘)2015-0002。SPF级Wistar大鼠，雄性，体质量(260±20)g,购自甘肃中医学院，许可证号：SCXK(甘)2011-0001。

1.2 受试药物和主要试剂

苍柏祛痛胶囊(由兰州市肺科医院生产，批号20150907)、冰醋酸(天津市瑞金特化学品有限公司，批号20130522)、二甲苯(天津富宇精细化工有限公司，批号141017)、角叉菜胶(Sigma, 批号：142k14144)，氧嗪酸钾(Sigma，批号：201406)，尿酸(Uric acid，UA)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：C01506)。

按表1所列拆方药物组成，参照苍柏祛痛胶囊已有生产工艺，制备各拆方组方。其中君药组(80 mg/kg，相当于苍柏祛痛胶囊全方中的剂量；160 mg/kg，相当于全方中的2倍剂量)。

1.3 仪器

岛津紫外分光光度计(UV-2450)。

表1 苍柏祛痛胶囊组方配伍表

2 方法

2.1 镇痛作用研究

2.1.1 对热板致痛小鼠疼痛反应的影响

取雌性未孕、清洁级小鼠，体质量(20±2)g。适应性饲养5 d，给药前将小鼠逐个置于(55±0.2)℃的金属热板上，测定出现踢脚、舔后足、跳跃等疼痛反应的潜伏时间(痛阈值)，取两次痛阈均值，小于6 s或大于30 s者应剔除。取痛阈值合格小鼠，并按体质量随机分组。按表2剂量灌胃给药连续10 d，分别于末次给药后30 min、60 min、90 min，按前述方法测定痛阈值，同时与阴性对照组比较。如超过60 s仍无反应，则按60 s计[1]。

2.1.2 对醋酸引起的小鼠扭体反应的影响

取清洁级小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g。适应性饲养5 d，按表3剂量灌胃给药10 d，末次给药30 min后，给予0.6%的冰醋酸生理盐水(i.p.)，0.2 mL/只，计数注射冰醋酸后15 min内小鼠扭体次数(标准：以腹部内凹，躯体与后腿伸张，臀部高起)，以总计数作为镇痛指标。

2.2 抗炎作用研究

2.2.1 对二甲苯引起的小鼠耳肿胀的影响

取清洁级小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g。适应性饲养5 d，按表4剂量灌胃给药，连续10 d。末次给药后，用微量进样器于小鼠右耳均匀涂布二甲苯，每只0.02 mL致炎。间隔2 h后，颈椎脱臼法处死小鼠，沿耳廓基线剪下双耳，用直径6 mm的打孔器在双耳同一部位打下耳片，电子天平称重。双侧耳片质量差(mg)记为肿胀度。

2.2.2 对角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀的影响

选取雄性Wistar大鼠。给药前以玻璃容器法测定大鼠右后足的正常足跖体积，之后按表5剂量灌胃给药，连续10 d。末次给药前，在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜胶生理盐水溶液皮下注射，0.1 mL/只。测量记录给药后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h的足跖体积。通过足趾体积前后差异，计算肿胀率(%)。

2.3 降尿酸作用研究

小鼠高尿酸血症：选取雄性小鼠，体质量(30±2)g，适应性喂养5 d后，按体质量随机分为16组。造模时，对照组腹腔注射生理盐水，模型组、苍柏祛痛胶囊和各拆方组腹腔注射氧嗪酸钾(300 mg/kg)，1次/d，连续7 d。每天造模30 min后，各组动物按表6剂量灌胃给药。末次给药后，摘眼球取血，离心3 500 r/min×10 min，取血清测定SUA(μmol/L)[2]。

3 结果

3.1 对小鼠热板所致疼痛阈值的影响

由表2的试验结果可以看出，与对照组相比，君药相当于处方中用量时，需到1.5 h后才能对物理性即热板所致疼痛起到镇痛作用(P<0.05)，而当君药高于处方用量2倍时，在1 h后就可起到显著的镇痛作用(P<0.01)。臣药在1 h后才能起到镇痛作用(P<0.05)，而佐药、使药在不与君药配伍时，镇痛作用不明显。君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使和苍柏祛痛胶囊全方具有显著的镇痛作用(P<0.05，P<0.01)。

组别剂量(mg/kg)疼痛阈值 (s)00.5 h1 h1.5 h对照—16.75±3.9718.80±4.7719.30±3.5018.30±5.08苍柏祛痛胶囊80017.95±3.9322.70±6.34*28.20±6.81**29.10±3.31**君药8017.30±4.1220.87±5.1120.45±3.7422.40±5.82*君药16016.57±3.8520.42±6.9425.70±4.15**22.72±4.80**臣药80018.63±3.0919.90±4.8222.40±6.59*20.40±6.17佐药80016.87±2.9518.71±5.1719.19±4.2220.31±3.03佐药180016.08±4.0517.50±6.1416.40±5.1217.95±6.01佐药280016.70±3.1418.00±3.9119.25±3.8920.13±4.26使药80015.66±4.7117.10±5.0220.74±4.7519.86±5.20君+臣80016.19±4.0718.16±5.4225.74±6.04**20.58±7.79君+佐80017.84±5.7322.87±5.51*20.45±5.0620.87±6.18君+使80014.55±4.2120.04±4.2019.20±4.4522.48±6.00*君+臣+佐80016.85±3.5724.16±4.01**25.31±5.13**27.40±4.07**君+臣+使80015.09±4.1622.33±5.29*21.70±6.55*18.28±5.39君+佐+使80018.11±3.2520.73±6.1020.00±4.3919.70±6.17

注：与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

3.2 对小鼠醋酸所致疼痛阈值的影响

由表3的试验结果可以看出，与对照组相比，君药相当于处方中用量和处方用量2倍时，均能起到显著镇痛作用(P<0.01)。臣药、佐药2单用也有镇痛作用(P<0.05)，而佐药、佐药1和使药在不与君药配伍时，镇痛作用不明显。君+臣、君+佐、君+使、君+臣+佐、君+臣+使、君+使+佐和苍柏祛痛胶囊全方具有显著的镇痛作用(P<0.05，P<0.01)。

表3 苍柏祛痛胶囊及各拆方对小鼠醋酸致痛阈值的影响

注：与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

3.3 对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响

由表4的试验结果可以看出，与对照组相比，君药相当于处方中用量和高于处方用量2倍时，均能显著抑制二甲苯引起的耳廓肿胀(P<0.01)。臣药、佐药和使药在不与君药配伍时，消肿作用不明显；使药在不 与君药、臣药同时配伍时，无消肿作用。君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使和苍柏祛痛胶囊全方具有显著的消肿作用(P<0.05，P<0.01)。

表4 苍柏祛痛胶囊及各拆方对二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀的影响

注：与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01

3.4 对角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀的影响

由表5的试验结果可以看出，与对照组相比，君药相当于处方中用量时，给药2 h后可抑制角叉菜胶引起的继发性足趾肿胀(P<0.05)；当君药为处方用量2倍时，给药1 h后有显著的消肿作用(P<0.01)。臣药给药2 h后有一定的消肿作用(P<0.05)。佐药和使药在不与君药配伍时，消肿作用不明显。君+臣、君+佐、君+使、君+臣+佐、君+臣+使和苍柏祛痛胶囊全方具有显著的消肿作用(P<0.05，P<0.01)。值得注意的是，含有君药和臣药同时配伍的组方，则在给药1 h后就有显著消肿作用。

组别剂量(g/kg)足趾关节肿胀度(%)0.5 h1 h2 h4 h6 h对照—17.8±4.2623.0±6.9837.0±7.9549.2±9.3731.4±9.25苍柏祛痛胶囊58012.7±5.60*17.2±6.7726.6±8.18**33.3±7.50**21.5±10.9*君药6018.4±5.1321.7±5.6930.1±6.41*35.4±5.22*28.3±8.24君药12016.3±4.3115.7±4.82**22.5±3.48**30.4±4.09*20.6±5.74*臣药58014.7±4.2720.5±6.1832.5±7.35*41.6±6.00*29.3±9.79佐药58019.1±3.5025.2±4.0239.3±6.0552.0±9.5440.7±8.25佐药158016.9±5.5222.2±3.7535.3±7.2148.3±8.2433.5±7.05佐药258018.3±6.1920.7±4.9636.0±5.2845.9±7.00*29.5±7.74使药58016.3±5.7720.3±4.8133.4±7.9444.2±8.7533.2±10.00君+臣58014.1±4.4516.3±7.15*23.5±8.34**28.6±7.87**18.1±8.38**君+佐58016.9±5.2019.3±6.27*27.1±8.59**36.8±7.09**25.7±6.94*君+使58020.0±7.2225.3±5.8133.8±6.54*40.6±7.60*28.9±8.64君+臣+佐58015.0±6.5317.4±4.34*22.6±6.55**31.7±10.8**18.0±8.14**君+臣+使58019.2±5.2416.2±5.78*22.3±7.00**24.4±8.47**17.9±6.01**君+佐+使58016.2±5.0220.3±6.5730.6±7.43**34.2±7.15**26.1±8.93*

注：与对照组比较，*P<0.05,**P<0.01

3.5 对氧嗪酸钾诱导小鼠高尿酸血症的影响

由表6的试验结果可以看出，与模型组相比，君药、臣药、佐药和使药在单独使用时，对SUA水平无影响。佐药2、君+佐、君+臣+佐、君+佐+使和苍柏祛痛胶囊全方可显著降低SUA水平(P<0.05，P<0.01)。值得注意的是，含有君药和佐药同时配伍的组方，可有效降低SUA水平。

表6 苍柏祛痛胶囊及各拆方对高尿酸血症小鼠SUA水平的影响

注：与对照组比较，**P<0.01；与模型组#P<0.05，##P<0.01

4 讨论

中药复方是中医药辩证论治和理法方药在临床治疗中的具体体现。研究复方配伍规律,对于揭示中医理论，推动中医药的临床应用具有重要作用[3]。因此拆方研究的主要目的在于：(1)寻求发挥增效或减毒作用的最佳配伍；(2)确定组方中主要药物或活性物质；(3)确定组方中药物的最佳剂量配比；(4)精简方剂；(5)验证方剂合理性[4]。现代中药复方拆方研究主要是通过药理研究或是化学实验来验证组方的有效性，是建立在对组方中各中药药理作用的基础上。本研究将苍柏祛痛胶囊全方拆成君、臣、佐、使不同配伍组合，观察各拆方在镇痛、抗炎和降尿酸的作用。

镇痛实验1结果表明(见表2)，处方量佐药和使药在单独成方时镇痛作用均不明显。而在各拆方中君药、臣药单独成方时就有镇痛作用，而佐药和使药必须与君药和/或臣药配伍成方，才能有显著的镇痛作用。镇痛实验2结果表明(见表3)，君药、臣药、佐药2在单独成方时有着一定的镇痛作用。而在各拆方中含有君药的其他组方(君+佐、君+佐+使)以及含有君药和臣药同时配伍的其他组方(君+臣、君+臣+佐、君+臣+使)，均有明显的镇痛作用，这与文献报道相符[5-6]。提示君药可协同臣药、佐药和使药发挥全方的镇痛作用，此外君药+臣药的联合配伍也可协同佐药、使药发挥全方的镇痛作用。推测在镇痛方面的排位：君药﹥臣药﹥佐药和使药。

抗炎实验1结果表明(见表4)，处方量君药就有较好的消肿作用，而臣药、佐药和使药在单独成方时，则消肿作用不明显。在各拆方中，含君药的配伍组方(君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使)均具有显著的消肿作用。抗炎实验2结果表明(见表5)，处方量君药就有显著消肿作用，随着君药用量增大可缩短发挥消肿作用的时间。处方量的臣药给药2h后才显现消肿作用，在各拆方中，佐药和使药必须与君药配伍成方(君+佐、君+使)，才能有显著的镇痛作用。值得注意的是在各拆方中，含有君药和臣药同时配伍的组方(君+臣、君+臣+佐、君+臣+使)在给药1h后就能发挥显著消肿作用。提示君药、臣药均有抗炎消肿作用，且二者之间存在协同性，可增强抗炎作用。推测在抗炎消肿的排位：君药﹥臣药﹥佐药和使药。

降酸实验结果表明(见表6)，处方量的君药、臣药、佐药和使药在单独成方时，无明显的降低尿酸作用。当提高君药量到处方量的2倍时，君药才能显示出显著的降酸作用。值得注意的是在各拆方中，佐药2具有降尿酸作用，此外含有君药和佐药同时配伍的组方(君+佐、君+臣+佐、君+佐+使)有显著的降尿酸作用。提示君药+佐药的联合配伍也可协同臣药、使药发挥全方的降酸作用。推测在降尿酸作用的排位：君药﹥佐药﹥臣药和使药。

综合上述结论，苍柏袪痛胶囊所体现的镇痛、抗炎作用主要体现在君、臣配伍上。已有研究显示，君药中所含黄柏及其炮制品就有较好的抗痛风活性[7-8]。牛膝可引药下行[9]，因此含君药配伍的组方对于角叉菜胶诱导大鼠足趾肿胀具有较好的抗炎作用。

而苍柏袪痛胶囊所体现的降尿酸作用主要体现在君、佐配伍上，特别是佐药2即苦参+黄花菜这一组方。本研究中的结果显示苦参+黄花菜具有镇痛和降尿酸作用。关于苦参[10]，在当归拈痛丸的拆方研究中显示其与茵陈、知母等是当归拈痛丸降尿酸的有效药味。而关于黄花菜在治疗痛风中的应用尚未有报道，这为后续研究提供了依据和方向。而君+佐药的镇痛作用并不明显。

综上可见只有君药、臣药、佐药和使药的合理配伍，才能产生协调、互补作用，明确发挥苍柏祛痛胶囊全方药物的镇痛、抗炎和降尿酸药效。