诺沃霉素A对茶轮斑病的防治效果

黄大野 万中义 朱志刚 姚经武 杨妮娜 曹春霞 张亚妮 刘晓艳 饶犇

摘要茶轮斑病是茶树的一种重要叶部病害，防治该病害通常使用化学杀菌剂。化学杀菌剂的频繁使用易使病菌产生抗药性并造成农药残留，因此，需要更为安全有效的防治方法。诺沃霉素A是由植生链霉菌HEBRC-20821分泌的一种新型32元环大环内酯类化合物。本研究探索了诺沃霉素A在离体条件下对拟盘多毛孢的抑菌活性及对感染茶轮斑病离体叶片的防治效果。诺沃霉素A在离体条件下对茶拟盘多毛孢的菌丝生长具有强烈抑制作用，抑制中浓度为2.11ug/mL。当用5ug/mL诺沃霉素A处理茵丝后，在显微镜下可见茶拟盘多毛孢茵丝形态发生异常。在离体叶片条件下，诺沃霉素A在75和150ug/mL浓度下对茶轮斑病防效分别为68.29%和100%。在2000和4000ug/mL浓度下诺沃霉素A对茶叶没有产生药害。诺沃霉素A有望成为防治茶轮斑病的一种新型药剂。

关键词茶轮斑病;大环内酯化合物;诺沃霉素A;防效

中图分类号：S435.711文献标识码：B DOI：10.16688/j.zwbh.2018340

茶树作为全球重要的经济作物，广泛种植于热带和亚热带地区，尤其是东亚和南亚等发展中国家。中国是茶树的原产地，是世界第一大产茶国，至2013年种植面积已达258万hm²，产量达192万t，分别占世界总量的47%和35%，在世界茶叶行业中占有重要地位。茶叶种植对我国农业经济发展和农村脱贫起到了重要作用。

由拟盘多毛孢Pestalotio psis spp.引起的茶轮斑病是茶树的一种重要叶部病害，在全世界茶叶种植区均有报道，在我国茶区也普遍发生，病原菌主要危害成叶和老叶。茶树为多叶植物，叶片的任何损伤都会影响茶叶的产量和质量。随着机械采摘在生产中的普遍应用，该病害的危害更为严重，因为机械采摘容易造成树势减弱并提供该病原菌侵染的位点。防治该病害主要依靠化学杀菌剂，在机械采摘后需要立即喷施药剂来控制病害发生。化学杀菌剂的频繁使用造成了轮斑病菌抗药性的产生。同时，化学杀菌剂的使用会造成农药残留，对食品安全和茶叶出口造成影响。基于上述原因，急需更为安全有效的杀菌剂和防治方法。

诺沃霉素A和B是由湖北省生物农药工程研究中心分离和鉴定的一种全新结构的32元环大环内酯类化合物（图1～2）。其生产菌为植生链霉菌Streptomyces phytohabitans，菌种代号为HBER&20821，大鼠急性经口、经皮和吸入试验表明未造成明显病理改变，毒性为微毒级。离体抑菌活性试验结果表明，诺沃霉素A和B对植物病原真菌抑菌效果相当。故本试验选取诺沃霉素A进行对茶轮斑病防治效果研究，以期为诺沃霉素在防治茶轮斑病中的应用和推广奠定基础。

1材料与方法

1.1材料

供试菌株：茶拟盘多毛孢Pestalotiopsis theae由湖北省生物农药工程研究中心分离和保存，为多菌灵敏感菌株。

供试药物：95%诺沃霉素A原药，制备方法同参考文献[9]，98%多菌灵原药，安徽广信农化股份有限公司。

1.2试验方法

1.2.1诺沃霉素A对茶拟盘多毛孢离体抑菌活性

将茶拟盘多毛孢P.theae从斜面活化后转入PDA平板28℃培养7d备用。将诺沃霉素A原药加入母液体积1%的N，N二甲基甲酰胺（DMF）溶解，随即加入无菌水配制成浓度为100ug/ml母液备用。多菌灵母液的配制方法和浓度同诺沃霉素A。采用菌丝生长速率法，诺沃霉素A在PDA中的浓度分别为5、2.5、1.25、0.625和0.3125ug/mL。多菌灵稀释至0.5、0.25、0.125、0.0625和0.03125ug/mL。每个梯度浓度3次重复，以加入含1%DMF无菌水作为对照。随后用4mm打孔器打取菌饼并接入PDA平板中央。28℃黑暗培养6d，用十字交叉法测量每个培养皿内菌落直径，用DPS软件求出诺沃霉素A和多菌靈对茶拟盘多毛孢菌丝生长的毒力回归方程、相关系数r和抑制中浓度ECso。

菌丝生长抑制率=（对照菌落直径-处理菌落直径）/对照菌落直径×100%。

分别从含5ug/mL诺沃霉素A平板和对照平板中挑取少许菌丝于载玻片，在40倍光学显微镜（OLYMPUS CX21，Tokyo，Japan）下观察处理和对照菌丝形态。

1.2.2诺沃霉素A对离体叶片上茶轮斑病防治效果

将茶拟盘多毛孢P.theae从保存的斜面活化，转移至PDA平板，28℃黑暗培养6d备用。采集大小一致成熟茶树叶片（‘中茶103），按照1.2.1的方法将诺沃霉素A配制成150ug/mL和75ug/mL，多菌灵配制成25ug/mL和12.5ug/mL。使用电动喷雾器将各处理药剂喷施于茶叶叶片背部至饱和，对照喷施清水。待药液晾干后采用针刺接种法接种茶拟盘多毛孢菌饼，随后28℃保湿培养。12d后统计各处理和对照病斑直径，并计算防效。试验设3个重复，每个重复15片茶叶叶片。

防效=（对照病斑直径-处理病斑直径）/对照病斑直径×100%。

1.2.3诺沃霉素A对茶叶安全性研究

按照1.2.1方法将诺沃霉素A配制成4000ug/mL和2000ug/mL水溶液，均匀喷施于茶叶叶片正面和背面，对照喷施清水，每处理20片叶，观察对照和处理茶叶叶片变化情况。

1.3数据分析

使用SAS 9.1.3进行差异显著性分析，在0.05水平下进行单因素差异显著性分析。

3讨论

茶叶作为我国重要的经济作物，在一部分地区经济发展和产业扶贫中起到关键作用。随着茶叶种植面积的扩大，机械采摘被广泛使用。研究表明雨水飞溅和机械采摘是茶轮斑病传播的两种主要途径，病原菌随着机械采摘伤口快速传播，危害成叶和老叶。随着病害的不断传播和发展，对树势造成了一定影响，从而影响茶叶的产量和品质。使用多菌灵和甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂在机械采摘后立即喷洒能有效防止茶轮斑病的传播和发展，但是杀菌剂的频繁使用也造成了病菌抗药性的产生，并且随机械采摘造成抗性菌株的传播，同时叶片和土壤的农药残留对茶叶的出口也会造成潜在威胁。

诺沃霉素A是一种新型的大环内酯类化合物，前期大鼠毒性试验研究表明其毒性为微毒级，并对多种植物病原真菌具有一定的抑菌活性，显示出良好的应用前景。本研究中，诺沃霉素A对茶轮斑病EG。为2.11ug/mL，离体叶片条件下150ug/mL防效达到100%，显示出良好的防控效果。同时其对菌丝造成扭曲、膨大和变形，表明诺沃霉素A可能通过影响菌丝形态来抑制病菌生长。本研究选取的茶拟盘多毛孢为多菌灵敏感菌株，诺沃霉素A对多菌灵及其他类型杀菌剂如甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的交互抗药性需要进一步研究，为其进一步的田问应用和推广奠定基础。同为大环内酯类化合物的纳他霉素由于不易产生抗药性，无致癌、致畸形、致突变和过敏性等优点，被广泛应用于食品防腐和水果保鲜，诺沃霉素在食品和水果方面的应用也值得进一步的研究。