少腹逐瘀丸质控方法研究

史利瑶　李建晨　田蜜

摘要：为了解决现行《中华人民共和国药典》中关于少腹逐瘀丸的鉴别存在项目单一、不同剂型之间质控标准不统一等问题，通过对处方中主要药效成分进行定性和定量研究，建立了一种更为全面的少腹逐瘀丸质控方法。采用薄层色谱法定性鉴别处方中的蒲黄、延胡索、肉桂3味药材，通过高效液相色谱法测定芍药苷的含量。结果表明：在薄层色谱图中观察到蒲黄、延胡索、肉桂药材的特征斑点，芍药苷进样量在0.128～1.28 μg范围内线性关系良好，精密度、稳定性、重复性试验的RSD值均小于2.0%，平均回收率为92.10%，RSD值为1.40%（n=9），芍药苷含量的建议值不低于1.20 mg/g。所建立的方法准确可靠，可行性高，重复性良好，可以作为完善少腹逐瘀丸质量标准的参考依据。

关键词：色谱分析;薄层色谱法;高效液相色谱法;少腹逐瘀丸;质量控制

中图分类号：O175.8文献标志码：A

SHI Liyao， LI Jianchen， TIAN Mi.Study on quality control methods of Shaofu Zhuyu pills[J].Journal of Hebei University of Science and Technology，2019，40（3）：208-214.Study on quality control methods of Shaofu Zhuyu pills

SHI Liyao， LI Jianchen， TIAN Mi

（School of Chemical and Pharmaceutical Engineering， Hebei University of Science and Technology， Shijiazhuang， Hebei 050018， China）

Abstract：In order to solve the problems in the identification of Shaofu Zhuyu pills in the current pharmacopoeia of the People's Republic of China， such as single items and inconsistent quality control standards among different dasage forms， a more comprehensive quality control method for Shaofu Zhuyu pills was established by qualitative and quantitative research on the main pharmacodynamic components in the prescription. Three medicinal herbs including Pollen typhae， Corydalis Rhizoma and Cinnamon in the prescription are identified by TLC， and the content of Paeoniflorin in Shaofu Zhuyu pills is determined by HPLC. Characteristic spots of Pollen typhae， Corydalis Rhizoma and Cinnamon are observed in the thin-layer chromatogram. The linearity of Paeoniflorin is investigated and the results show a good linear relationship in the range of 0.128～1.28 μg. The RSDs of precision， the stability test and the reproducibility are all no more than 2.0%， the average recovery if of 92.10%， and the RSD is of 1.40%（n=9）. It is suggested that the content limit of Paeoniflorin should not be less than 1.20 mg/g. The established method is accurate and reliable with high feasibility and good repeatability， and can provide the basis for the total quality control of Shaofu Zhuyu pills.

Keywords：chromatographic analysis; thin layer chromatography （TLC）; high performance liquid chromatography （HPLC）; Shaofu Zhuyu pills; quality control

少腹逐瘀丸，为治疗气滞血瘀的典型处方[1]，其组方严谨、治疗效果良好，经科研人员改良后可得到颗粒、胶囊等不同剂型。少腹逐瘀丸曾被收载于《吉林省药品标准》1977年版，1990年其被收录于《中华人民共和国药典》（以下简称《药典》）中，经逐年改版收录至2015年版《药典》中。但现行《药典》对少腹逐瘀丸仅有关于部分药味的显微鉴别及芍药苷的薄层鉴别方法，存在鉴别项目单一、不同剂型之间质控标准不统一等问题，且市场上所售药品的质量参差不齊。可见，针对少腹逐瘀丸需要建立更全面的质控方法和质量标准[2-10]。

河北科技大学学报2019年第3期史利瑶，等：少腹逐瘀丸质控方法研究少腹逐瘀丸处方包含10味药材，每味药材所含的有效成分对应不同的药效基础。方中辅药蒲黄、延胡索有化瘀止痛、通利血脉的作用;佐药肉桂有扩张血管、促进血液循环的作用;主药赤芍的主要活性成分为芍药苷，有养血调经、活血散瘀之功效。笔者通过对处方中主要药效成分进行定性和定量研究，制定蒲黄、延胡索和肉桂的薄层鉴别及有效成分芍药苷含量的测定方法[11-16]，以期建立更为全面的质量控制标准。

1主要仪器与材料

1.1仪器

Waters e2695-2489高效液相色谱仪，紫外检测器，Empower工作站，色谱柱为Kromasil 100-5-C18（46 mm×150 mm，5 μm）;KQ-250B型超声清洗仪器，昆山市超声仪器有限公司提供;DK-98-ⅡA电热恒温水浴锅、FZ102微型植物粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司提供;ZF-2三用紫外线分析仪，上海市安亭电子仪器厂提供;XP-205十万分之一电子分析天平、AL204分析天平，梅特勒-托利公司提供。

1.2材料与试剂

硅胶60F254薄层板（德国MERCK公司提供），聚酰胺板（上海兴亚净化材料厂提供）。

桂皮醛对照品（批号为104-55-2，纯度≥98%（HPLC法）），北京普天同创生物科技有限公司提供;芍药苷对照品（批号为23180-57-6，纯度≥98%（HPLC法）），北京普天同创生物科技有限公司提供;延胡索乙素对照品（批号为0726-201708）、肉桂对照药材（批号为121363-201509）、延胡索对照药材（批号为116491-201506）、蒲黄对照药材（批号为121225-201506），均购于中国食品药品检定研究院;甲醇，色谱纯，德国MERCK公司提供;水，娃哈哈纯净水;其余试剂均为分析纯。

阴性对照，除去相应的对照药材外，其余几味药材按成药制法，由实验室自制。

少腹逐瘀丸：天津中新药业集团股份有限公司达仁堂制药厂提供，批号为7280021;颈复康药业集团赤峰丹龙药业有限公司提供，批号为1710024;乌兰浩特中蒙制药有限公司提供，批号为160723;呼伦贝尔松鹿制药有限公司提供，批号为171205;实验室自制，批号为201806。

2方法与结果

2.1薄层色谱鉴别

2.1.1蒲黄

供试品溶液：取本品约9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研匀，置于锥形瓶中。加80%（体积分数，下同）乙醇50 mL，超声处理30 min，过滤，蒸干滤液。将残渣用25 mL水溶解，用水饱和的正丁醇溶液振摇萃取2次，每次25 mL，图1蒲黄薄层色谱图

合并正丁醇液，蒸干，将残渣用2 mL乙醇溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液：取缺少蒲黄的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性溶液;另取蒲黄对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。

依照薄层色谱法进行试验。分别吸取上述3种溶液各1 μL，点于同一聚酰胺薄膜板上，在丙酮-水（二者体积比为2∶3）展开剂中，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置于紫外光（365 nm）下检视。供试品色谱与对照药材色谱相应的位置显示相同颜色的荧光斑点，阴性溶液无干扰。结果见图1。

2.1.2延胡索

供试品溶液：取本品约9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研匀，置于具塞锥形瓶中。加氨水10 mL润湿，密闭10 min，加入氯仿50 mL，加热回流30 min，过滤。加入20 mL水，与滤液混匀，用稀盐酸调节pH值至2～3，振摇，分离酸水层，用浓氨试液调节pH值至10～11，用氯仿萃取2次，每次15 mL。合并氯仿萃取液，蒸发至干，将残渣加2 mL甲醇溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液：取缺少延胡索的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性溶液。取延胡索对照药材0.3 g，同法制成对照药材溶液。另取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

依照薄层色谱法进行试验。分别吸取上述4种溶液各5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以浓氨饱和的正己烷-乙酸乙酯-甲醇（三者体积比为5∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，碘熏，直到斑点显色清晰，取出，挥尽板上吸附的碘。在供试品色谱与对照品色谱相应的位置显示相同颜色的斑点，阴性溶液无干扰。结果见图2。

2.1.3肉桂

供试品溶液：取本品9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研匀，置于锥形瓶中。加乙酸乙酯50 mL，加热回流1 h，过滤，蒸干滤液，将残渣加2 mL乙醇溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液：取缺少肉桂的阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取肉桂对照药材03 g，同法制成对照药材溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1 mL含1 μg的溶液，作为对照品溶液。

依照薄层色谱法进行试验。吸取上述4种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，在石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（三者体积比为16∶5∶0.2）展开剂中，展开，取出，晾干，二硝基苯肼乙醇试液显色。在供试品色谱与对照品色谱相应的位置显示相同颜色的斑点，阴性对照溶液无干扰。结果见图3。

在上述肉桂药材的薄层鉴别条件下，4批样品定性鉴别差异较大，且样品2（赤峰丹龙药业）、样品6（中蒙制药）、样品7（松鹿制药）在与对照品色谱相应位置上无特征斑点。自制丸剂样品8与对照品在色谱相应的位置上显色相同。考虑到有效成分桂皮醛的挥发性、不同样品的存放时间及不同厂家所用肉桂药材的优劣等会影响鉴别结果，可将以上因素作为判断少腹逐瘀丸樣品质量优劣的参考依据。

2.2含量测定[17-20]

2.2.1色谱条件

Kromasil 100-5-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为甲醇-水（二者体积比为30∶70），检测波长为230 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为30 ℃，进样量为10 μL。

2.2.2溶液制备

对照品溶液：取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

供试品溶液：取本品1 g，剪碎，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，称定质量，超声处理30 min，冷却，恒重，摇匀，过滤，取续滤液即得。

阴性对照溶液：按处方比例称取其余9味药材（缺赤芍），根据成药的制法制成阴性样品，即得。

2.2.3专属性

精密吸取上述3种溶液及70%甲醇空白溶液，在“2.2.1”项条件下测定。在相对应的保留时间处，对照品溶液与供试品溶液均显示出芍药苷特征峰;而阴性对照溶液与70%甲醇空白溶液均无芍药苷色谱峰，表明在上述色谱条件下处方中其他味药材对芍药苷的含量测定不产生干扰。结果如图4—图7所示。

2.2.4线性关系

选取质量浓度为0.064 mg/mL的芍药苷对照品溶液，精密吸取2，5，10，15，20 μL，注入高效液相色谱仪。按“2.2.1”项条件进行测定，以横坐标为对照品进样量（x），纵坐标为峰面积积分值（y），绘制芍药苷标准曲线，经处理得到芍药苷线性回归方程为y=1 627x-29 638，（R2=0.999 8）。结果表明，芍药苷进样量范围为0.128～1.28 μg时，线性关系良好。详见表1。

2.2.5精密度

精密吸取质量浓度为0.064 mg/mL芍药苷对照品溶液各10 μL，重复进样6次，测定峰面积，得到RSD值为0.32%（n=6），表明精密度良好。结果见表2。

2.2.6稳定性

吸取同一供試品溶液（呼伦贝尔松鹿制药有限公司提供，批号为171205），分别在0，4，8，16，20，24 h时间段各进样10 μL，测定峰面积，得到RSD值为1.22%（n=6），表明供试品溶液稳定性良好。结果见表3。

2.2.7重复性

取同一供试品溶液（呼伦贝尔松鹿制药有限公司提供，批号为171205），分别称取6份，同法制备各供试品溶液，并在“2.2.1”项条件下进行测定。

芍药苷含量平均值为1.85 mg/g，RSD值为1.58%（n=6），表明重复性良好，结果见表4。

2.2.8加样回收率

取同一供试品溶液（呼伦贝尔松鹿制药有限公司提供，批号为171205），精密称取9份，加入甲醇溶解的芍药苷对照品，各浓度对照品加入量与所取供试品含量之比分别为0.8∶1，1∶1，1.2∶1共3个浓度，每个浓度平行做3份，加入对照品溶液后按照供试品溶液的制备方法进行制备，计算回收率。得到平均回收率为9210%，RSD值为1.40%（n=9），符合定量分析要求。结果见表5。

按照上述方法，依次制备各批次样品的供试品溶液，并按“2.2.1”项色谱条件分别测定4批样品的芍药苷含量，结果见表6。

3结论

1）通过对处方中主要药效成分进行定性和定量研究，以及对提取溶剂、时间和方法进行优化，建立了蒲黄、延胡索、肉桂3味药材的薄层鉴别方法以及芍药苷的含量测定限度。方法耐用性良好，重复性较强，可以作为完善少腹逐瘀丸质量标准的参考依据。

2）通过对含量测定中供试品的制备方法进行考察，确定了芍药苷的提取方法为70%甲醇超声提取30 min，以甲醇-水（二者体积比为30∶70）作为流动相，所得芍药苷色谱峰的峰型和分离度较好。方法学验证结果表明，空白、阴性溶液对芍药苷色谱峰无干扰。所建立的方法准确可靠，可行性高。通过对芍药苷含量进行限度的制定，建议少腹逐瘀丸中芍药苷的含量不得低于1.20 mg/g。

3）本研究仅适用于丸剂样品，对于经过提取制粒后的颗粒和胶囊制剂，还需再作进一步的研究。

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