扬州市2015～2017年无偿献血者抗-HIV及HIV-RNA检测结果调查分析

黎金凤 虞莉 范恩勇

[摘要] 目的 了解扬州市2015年2月～2017年12月无偿献血者抗-HIV抗体及HIV-RNA检测情况。 方法 针对扬州市2015年2月～2017年12月121 617例无偿献血者标本先进行2遍ELISA法检测抗-HIV抗体，然后对ELISA法结果两侧阴性或单侧阴性的116 500例核酸标本再用PCR法检测HIV-RNA。抗-HIV抗体阳性送扬州CDC确证，HIV-RNA阳性送江苏省血液中心进一步确证。 结果 2015年2月～2017年12月抗-HIV抗体检出阳性57例，占0.05%，确证阳性13例，占0.01%;确证阳性均为ELISA法双试剂阳性标本，ELISA法单试剂阳性经确证均为阴性; HIV-RNA阳性检出 4例，占0.003%，确证阳性2例，占0.002%。 结论 采、供血机构相关部门在献血前征询招募时，应充分考虑人群HIV 感染分布特征，调整策略，相关部门应加强HIV相关知识的宣传普及工作，进一步确保血液安全。在血液病毒检测中，核酸检测与酶联免疫检测各具优势，两者互补，给予二者联合应用，提高血液病毒检测准确性。

[关键词] 无偿献血者;酶联免疫吸附试验;核酸检测;人类免疫缺陷病毒

[中图分类号] R193.3         [文献标识码] B          [文章编号] 1673-9701（2019）13-0123-04

[Abstract] Objective To understand the anti-HIV antibody and HIV-RNA detection of unpaid blood donors in Yangzhou City from February 2015 to December 2017. Methods Anti-HIV antibodies were detected by two-pass ELISA in 121， 617 unpaid blood donors from February 2015 to December 2017 in Yangzhou City. Then， the HIV-RNA of 116， 500 nucleic acid samples with both-sided negative or one-sided negative ELISA results were detected by PCR. The anti-HIV antibody positive samples were sent to Yangzhou CDC for confirmation， and the HIV-RNA positive samples were sent to the Jiangsu Provincial Blood Center for further confirmation. Results 57 cases of positive anti-HIV antibodies from February 2015 to December 2017 accounted for 0.05%. And 13 were positive， accounting for 0.01%. Confirmed positive specimens were ELISA double reagent positive specimens. Single reagent positive specimens by ELISA method were negative after confirmation. There were 4 cases of positive HIV-RNA， accounting for 0.003%， and 2 cases of confirmed positive， accounting for 0.002%. Conclusion Relevant departments of blood collection and blood supply institutions should fully consider the distribution characteristics of HIV infection in the population and adjust the strategy when consulting for recruitment before donating blood. Relevant departments should strengthen the promotion and popularization of HIV-related knowledge to further ensure blood safety. In the detection of blood virus， nucleic acid detection and enzyme-linked immunosorbent assay have their own advantages， and the two complement each other， and the two are combined to improve the accuracy of blood virus detection.

[Key words] Unpaid blood donors; Enzyme-linked immunosorbent assay; Nucleic acid detection; Human immunodeficiency virus

臨床输血目前是挽救人类生命的、其他医学技术不可替代的重要治疗手段，同时临床输血也是传播传染性疾病的主要途径之一，如乙肝、丙肝、艾滋、梅毒等输血传播性疾病，特别是艾滋相关的人类免疫缺陷病毒（Human immunodeficiency virus，HIV）的传播，更是引起采供机构和临床医院重点关注的焦点。HIV病毒进入人体后会破坏机体免疫系统，导致人体免疫功能异常， 抵抗力下降，最终引发一系列疾病[1]。随着临床用血量逐年增加，无偿献血人数也相应增加。据世界卫生组织（WHO）统计，经血液传播感染艾滋病的人数占全球HIV 感染者的5%～10%[2]。因此，向临床提供安全、优良的血液及血液制品是我们采、供血机构共同追求的目标[3]。近年来，随着检测技术的不断更新和发展，特别是试剂方法的改进和灵敏度的提高，血液质量和输血安全也得到了极大的改善。目前，实验室诊断方法主要有抗体诊断、抗原诊断和病毒载量试验[4]。为了解无偿献血者人群中HIV的感染情况，现将扬州市中心血站2015年2月～2017年12月121 617例无偿献血者标本抗-HIV抗体和HIV-RNA的检测情况进行回顾性调查分析，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

121 617例标本均来自扬州市中心血站2015年2月～2017年12月年无偿献血者，年龄均18～55周岁，所有献血者均符合《献血者健康检查要求》。

1.2 试剂与方法

1.2.1 试剂  酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂由北京科卫和厦门新创提供，核酸试剂由上海科华提供，试剂均在有效期内使用。

1.2.2 方法  抗-HIV抗体采用ELISA法进行2遍检测，2遍采用不同设备、不同厂家试剂、不同工作人员。ELISA法的实验原理：采用双抗原夹心法两步法原理检测人血清中或血浆样本中的抗-HIV抗体。在微孔板预包被基因重组HIV抗原。当待检样本中存在抗-HIV抗体时，将反应形成抗原抗体复合物，再与加入的酶标记基因工程HIV抗原反应，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗体-酶标记HIV抗原”的免疫复合物，加入底物后形成显色反应。实验步骤：（1）加入血清至试剂盒内微孔板37℃孵育60 min;（2）洗板去除剩余血清;（3）加酶再37℃孵育30 min;（4）洗板去除剩余酶;（5）加底物显色液37℃孵育30 min;（6）加终止液;（7）比色。最终比色由酶标仪自动完成。每批次实验均设置阴性、阳性对照，与标本同时检测，结果以s/cutoff（每孔吸光度A/cutoff，cutoff根据试剂说明书设置）表示，结果s/cutoff≥0.7为阳性，<0.7为阴性。两侧检测为阳性或其中一侧检测为阳性最终结果均为阳性，两侧检测均为阴性最终结果为阴性。所有实验均严格按操作规程和试剂说明书进行。

HIV-RNA的核酸检测采用聚合酶链反应（Polymerase  Chain  Reaction，PCR），采取8人份标本混合检测模式（8×180 μL=1.44 mL），将标本先进行混样，混样结束后，先加裂解液将DNA从细胞内裂解出来，再加磁珠吸附DNA，加洗涤液洗涤和洗脱液洗脱，最后提取DNA上清，移入扩增板加入扩增试剂，放入PCR全自动扩增仪扩增，PCR工作原理：在模板DNA、引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应。DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段互补序列结合，形成部分双链。在适宜的温度和环境下，DNA聚合酶将脱氧单核苷酸加到引物3-OH末端，并以此为起始点，沿模板5→3方向延伸，合成一条新的DNA互补链。PCR由变性——退火——延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性;②模板DNA与引物的低温退火（复性）;③引物的适温延伸。混检结果阳性次日再将8个标本拆分单检（1.44 mL），混检结果阴性最终结果为阴性。单检检测模式同混检，单检阳性者最终结果为阳性，单检阴性最终结果为阴性。所有实验均严格按操作规程和试剂说明书进行。

检测策略：2遍ELISA法抗体检测+1遍核酸检测;先进行2遍ELISA法检测抗-HIV抗体，然后对ELISA法两侧阴性或单侧阴性标本再进行PCR法检测HIV-RNA。对ELISA法抗-HIV抗体阳性者送扬州市CDC进一步确证。核酸检测HIV-RNA阳性者送江苏省血液中心进一步确证。

1.3 仪器与设备

STAR 8-CH全自动加样系统（瑞士HAMETLON公司），FAME 24/20全自动酶免分析系统（瑞士HAME TLON公司），ABI7500全自动扩增仪（美国ABI公司），ESCOⅡ型生物安全柜（新加坡ESCO公司），漩涡混合仪，手掌型离心机等。

1.4 观察指标

统计2015年2月～2017年12月121 617例无偿献血者标本抗-HIV 抗体ELISA法检测阳性率及送扬州市CDC确证阳性率，同时针对抗-HIV 抗体阳性标本不同试剂的检测结果，分析其确证结果情况。观测2015年2月～2017年12月116 500例无偿献血者标本的HIV-RNA核酸检测情况及阳性标本送省血液中心确证后的结果。分析ELISA法检测抗- HIV抗体阳性者送扬州CDC进一步确证后，其阳性者人群分布。

1.5 统计学分析

采用SPSS22.00统计学软件进行处理，计数资料以[n（%）]表示，2016年与2015年，2017年与2015年抗-HIV 抗体检测阳性率之间的比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA法抗-HIV抗体检测结果及WB确证结果

2015年2月～2017年12月121 617例无偿献血者标本抗-HIV 抗体ELISA法检测出57例阳性，送扬州市CDC用WB法确证出13例阳性，见表1。

2.2 抗-HIV抗体阳性结果组合与确证结果

57例ELISA 法抗-HIV抗体阳性送检者中，单试剂阳性40例，双试剂阳性17例，WB法确证结果，见表2。

2.3 抗-HIV抗体阳性结果不同试剂的S/CO值浓度分布与确证结果情况

兩种ELISA试剂抗-HIV抗体阳性结果S/CO值浓度分布与确证结果情况，见表3。

2.4 HIV-RNA核酸检测情况及阳性标本确证结果

2015年2月～2017年12月116 500例无偿献血者标本的HIV-RNA核酸检测情况及阳性标本送省血液中心确证后的结果分析见表4。

2.5 HIV-RNA确认阳性献血员的跟踪随访

两例HIV-RNA确认阳性献血员经后续进一步跟踪随访均为HIV感染窗口期。

2.6抗- HIV抗体确证阳性者人群分布情况

ELISA法检测抗- HIV抗体阳性者送扬州CDC进一步确证后，其阳性者人群分布情况见表5。

3 讨论

HIV感染的主要传播途径为母婴传播、血液传播和性传播。其中血液传播和性传播是两大主要传播途径。包括不安全性行为、MSM、静脉吸毒等，亦有经输血传播HIV的病例[5，6]。由于HIV是RNA病毒，较DNA病毒易变异、不稳定，且存在检测窗口期，血液检测阴性不能完全排除输血后HIV感染的可能，因此，了解HIV在无偿献血者人群中的分布对于进一步加强血液安全尤为重要。

从表1可以看出，本市2015～2017年ELISA共检测121 617例标本，抗-HIV初筛有反应性为57例（0.05%），确认阳性13例（0.01%），与2015年相比较，2016年和2017年阳性率差异均无统计学意义（P>0.05）。低于广西沿海地区0.04%的感染率[7]，低于北海市0.045%的感染率[8]，但高于徐州市0.005%的感染率[9]。

从表2、3可以看出，两种ELISA试剂初筛一侧阳性的标本确认结果均为阴性，两种ELISA试剂初筛均阳性确认结果阳性率为76.5%（13/17），两种ELISA试剂初筛结果S/CO≤10，确认结果均为阴性，S/CO>10的初筛标本，北京科卫的确认阳性率为81.3%（13/16），厦门新创的确认阳性率为81.3%（13/16）。随着初筛S/CO值的升高，其确认结果的阳性率也逐渐升高，但S/CO比值较低并不能判定为抗-HIV阴性，要进一步做后续追踪随访和确认实验[10]。

从表4可以看出，本市2015～2017年核酸共检测标本116500例，HIV-RNA初筛阳性4例（0.003%），确认阳性2例（0.002%）。两例HIV-RNA确认阳性献血员经后续跟踪随访为HIV窗口期感染。因此，核酸检测可检测出HIV弱阳性标本，提高HIV检出率，有力增强了输血安全性[11]。

从表5可以看出，确认阳性结果中：性别分布以男性为主占76.9%，年龄分布以18～45歲为主占84.6%，学历分布以低学历为主占76.9%，职业分布以以个体和公司职员为主占100%，婚姻状况以已婚为主占76.9%。献血情况以首次为主占61.5%。（1）HIV感染者主要是男性，占76.9%，远远高于女性感染者。一方面可能是男性的社交活动较多;另外，男男同性恋（MSM）是HIV高危人群，MSM人群HIV 感染率较高，是HIV流行的重要人群之一。（2）感染者中18～45岁人群较多占84.6%，这个年龄段的人群处于性活跃期，由于目前社会对性观念的改变，不同程度受到性开放、婚前性行为、性乱行为的影响，外加社会上的一些恶劣风气诸如卖淫、嫖娼的现象越来越严重。45～55岁仅占15.4%。（3）低学历占76.9%，这类感染人群的文化程度较低，防病治病意识比较淡泊，传统的说教宣传很可能难以引起这类人群的重视和理解、接受，未能收到较好效果，应寻求和探索更适合这类人群的宣传策略。研究生占15.4%，本科生占7.7%。（4）职业分布以个体和公司职员为主占100%，这类人群相对流动性较大。（5）婚姻状况以已婚为主占76.9%。已婚人群性传播机会较多，这是HIV重要传播途径。（6）献血情况以首次为主占61.5%。多次献血人群相对安全些。（7）人群户籍分布没有明显差异。从年龄、学历分布等可以看出HIV感染者已从高危人群向低危人群扩散。因此，采、供血机构应采取积极有效的措施，联合各大媒体开展对HIV的预防及传播途径等相关知识的宣传。从以上整个人群分布可以看出，我们采、供血机构在献血征询招募时，应充分考虑献血人群HIV感染分布特征，调整招募方案，进一步保证血液安全。

因此，采、供血机构应联合相关部门共同做好无偿献血宣传工作，让献血者能充分认识到高危行为的危害性，引导高危人群在献血前进行自我了解，排查，放弃献血，工作人员也应加强献血前的健康咨询工作，最大限度的排查高危献血者[12]。尽量将HIV感染者于献血前隔离，从源头上保障输血安全[13]。排查之余，为保证血液检测质量，提高检测试剂的特异性和灵敏度，应进一步缩短检测“窗口期”，约90%的血液漏检导致患者输血后感染是由 “窗口期”引起，“窗口期”已成为导致血液检测漏检并威胁患者生命安全的重要原因。目前抗-HIV检测试剂中，第3代试剂的“窗口期”平均约为22 d，第4 代试剂增加了P24 抗原检测，理论上“窗口期”平均缩短4～5 d，核酸试剂“窗口期”为7.4～9.1 d[7]，因此，无偿献血者标本的核酸检测非常有必要性，大大缩短了窗口期，提高了血液检测的安全性。以上我们重点阐述了试剂灵敏度的重要性，试剂的特异性也很重要，从表1可以看出，抗-HIV酶免有反应性，确认阴性为77.2%（44/57），为试剂的非特异性反应。因此应提高试剂的特异性，避免血源的浪费。同时，对这部分屏弊的假阳性献血员应根据相关流程归队召回，避免献血员的流失及对其造成的心理负担[14]。

综上所述，在献血者血液标本筛查检测时，应选择先进的实验方法和仪器设备，确保临床采、供血的进一步安全。在血液病毒检测中，核酸检测与酶联免疫检测各具优势，两者互补，给予二者联合应用，提高血液病毒检测准确性[15]。同时，工作人员应加强自身的保护，防止职业暴露。各采、供血机构应加强联网工作，防止HIV感染者到处恶意献血，加强屏蔽工作，从而进一步保障血液安全[16]。

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（收稿日期：2019-01-12）