益胃煎剂对萎缩性胃炎小鼠Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

王鑫　郭秀兰　康晓庆　郭其贞　卢雪玲　孙述栋

【摘要】 目的：观察益胃煎剂对慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）小鼠胃黏膜病理组织学及凋亡行为的影响。方法：小白鼠60只随机分为正常对照组、CAG模型组（模型组）、益胃煎剂干预组（干预组）。水杨酸钠法复查萎缩性胃炎小鼠模型，观察胃黏膜病理形态学变化;应用免疫组织化学法观察胃黏膜细胞Bcl-2、Bax的表达情况。结果：对正常对照组、模型组、益胃煎剂干预组的慢性炎症程度进行比较，干预组与正常对照组无显著差异，而模型组慢性炎症程度高于正常对照组、干预组。干预组与正常对照组的Bcl-2 LI比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组的Bcl-2 LI明显高于正常对照组与干预组（P<0.01）。干预组与正常对照组的Bax LI比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组的Bax LI明显低于正常对照组与干预组（P<0.01）。干预组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组的Bcl-2/Bax比值明显高于正常对照组与干预组（P<0.01）。结论：益胃煎剂可以减轻CAG小鼠胃黏膜炎症程度，其机制可能与其能够下调Bcl-2表达，上调Bax表达，从而调节胃黏膜上皮细胞的凋亡行为有关。

【关键词】 益胃煎剂; 慢性萎缩性胃炎; 凋亡; 中药

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2019.13.076 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2019）13-0-03

慢性萎缩性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是消化系统的常见病、疑难病，属于中医胃脘痛、胃痞等范畴，CAG属于胃癌的前期疾病，尤其与肠型胃癌的发病率呈显著相关性，如果不加以控制，可能发展为胃癌[1-3]。西医治疗CAG没有明确的特效药。因此开展中医药对CAG的防治具有重要的临床意义。本实验旨在通过观察益胃煎剂对CAG小鼠胃黏膜病理组织学、凋亡行为的影响，初步探讨其防治CAG的机制。

1 资料与方法

1.1 一般资料

兔抗Bcl-2多克隆抗体，兔抗Bax单克隆抗体，即用型SABC试剂盒，PV-6001二步法免疫组化检测试剂盒，均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验动物 SPF级雄性健康小鼠60只，鼠龄5周，体重（20±2）g。购自山东大学医学院实验动物中心。

1.2.2 药物 益胃煎剂（太子参30 g，怀山药25 g，白术10 g，柴胡10 g，木香10 g，香附15 g，白芍12 g，黄芩10 g，鸡内金15 g，山楂15 g，麦芽15 g，神曲12 g，砂仁6 g，法半夏10 g，生甘草6 g）由医院中药房提供，药物浓煎后4 ℃冰箱保存。

1.2.3 造模方法 60只小鼠随机分为三组，每组20只，分别为正常对照组、CAG模型组（模型组）、益胃煎剂干预组（干预组）。正常对照组：正常进食饮水，每天上午定时给予生理盐水1 ml灌胃，1次/d，连续84 d。模型组：正常进食饮水，每天以2%的水杨酸钠溶液0.5 ml灌胃，灌胃前后1 h禁食禁水，连续56 d，造成胃黏膜慢性损伤;以后28 d结合饥饱失常（单日禁食、自由饮水，双日足量食水）。干预组：按上述方法造模56 d后，继续制模的同时给予益胃煎剂1 ml灌胃，1次/d，连续28 d。造模84 d后处死所有小鼠，胃黏膜标本常规固定包埋，进行HE染色，光镜下观察病理形态学变化;应用免疫组织化学法观察胃黏膜细胞Bcl-2、Bax的表达情况。

1.3 观察指标及评价标准

1.3.1 HE染色病理组织学观察 标准参照2002《中药新药临床研究指导原则》（试行）中胃黏膜慢性炎症病理组织学分度标准。

1.3.2 免疫组化染色结果判定 结果判定标准参考文献[4]内容，用阳性细胞标记指数（labeling index，LI）评价，即LI=阳性细胞/计数细胞×100%。每张切片于高倍镜（×400）下随机取连续有代表性的5个以上视野，计数不少于1 000个上皮细胞着色阳性细胞所占百分比。Bcl-2检测结果表示为Bcl-2 LI：胞浆染为棕黄色至棕褐色为阳性细胞，偶见于胞膜、胞核。Bax检测结果表示为BaxLI：胞浆染为棕黄色至棕褐色为阳性细胞，偶见于胞核。

1.4 统计学处理

计量资料的统计描述以（x±s）表示，使用SPSS 11.5软件包中的One-Way ANOVA进行统计推断，两两比较采用SNK法，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 光镜观察

（1）正常对照组胃黏膜上皮结构完整，腺上皮和腺管分界清楚。模型组胃黏膜明显萎缩变薄，腺体明显减少，多有不同程度的排列紊乱，个别还见有肠上皮化生。干预组胃黏膜厚度适中，腺体排列较规则，大小形态较一致，见图1～图3。（2）各组小鼠慢性炎症程度比较：模型组慢性炎症程度比正常对照组和干预组高，正常对照组与干预组慢性炎症程度比较无明显差异。

2.2 免疫组化染色结果

（1）Bcl-2：阳性反应物质呈棕黄色或棕褐色，主要位于胞浆内，偶可伴胞膜、胞核着色。正常对照组阳性细胞数较少，模型组阳性细胞数明显增多，干预组阳性细胞明显减少。正常对照组、模型组、干预组Bcl-2 LI分别为（6.10±0.42）、（9.12±1.95）、（7.04±1.49）%，干预组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组与正常对照组、干预组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。（2）Bax：阳性反应物质呈棕黄色或棕褐色，主要位于胞浆内，偶可伴胞膜、胞核着色。正常对照组阳性细胞数较多，模型组阳性细胞数明显减少，干预组阳性细胞较模型组明显增多。正常对照组、模型组、干预组Bax LI分别为（26.25±3.68）、（20.16±4.53）、（24.06±3.72）%，干预组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组与正常对照组、干预组比较差异均有统计学意义（P<0.01）。（3）Bcl-2/Bax：正常对照组、模型组、干预组Bcl-2/Bax比值分别为0.22±0.03、0.46±0.09、0.28±0.05，干預组与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05），而模型组高于正常对照组、干预组，差异均有统计学意义（P<0.01）。