2018年河南省部分地区新城疫免疫状况调查

摘  要：采用血凝抑制试验方法对采自河南信阳、济源、焦作和周口4个地区的6438份血液样品检测新城疫抗体，采用荧光PCR方法对178份双拭子样品进行新城疫病毒检测。结果表明：4个地市新城疫抗体合格率远超过国家规定的70%合格率标准，不同规模鸡场新城疫抗体水平有差异，所有双拭子样品均未检到新城疫病毒存在。

关键词：新城疫;血凝抑制;荧光PCR;抗体水平;合格率

中图分类号：S858.312.4     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2019）04-0047-03

新城疫（Newcastie disease，ND）是由新城疫病毒引起的鸡和多种禽类的急性高度接触性传染病，主要引起禽类呼吸困难、下痢、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。ND传播迅速，发病率和死亡率均较高，是严重危害养禽业的重要疾病之一，给养殖场带来较大的经济损失， 是我国的一类动物疫病[1-3]。近年来，非典型新城疫多发，且较难防治，给鸡场生产带来较大损失。新城疫作为病毒性疾病，无特效药物治疗，主要是靠疫苗免疫，因此抗体水平的高低对该病的防控起到决定性作用。笔者组织人员对2018年河南省部分地区的新城疫免疫抗体情况开展调查，以期对该病的防控提供参考资料。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  样品来源  检测所用血液样品、拭子样品由当地疫控机构人员在各地免疫过新城疫疫苗的鸡场采集，血液样品采自鸡翅静脉，3000r/min，离心10min后装于1.5ml离心管中;取无菌棉拭子在鸡口腔和泄殖腔采集后装于含有PBS的离心管中，共采集178份;血清及拭子样品均冷冻保存备检。

1.1.2  检测试剂和设备耗材  新城疫血凝抑制试验抗原、阳性血清及阴性血清（青岛立见诊断技术发展中心）;新城疫病毒核酸测定试剂盒（荧光PCR法）（上海之江生物科技股份有限公司）;荧光PCR仪、核酸提取仪（西安天隆科技有限公司）;离心机（湖南湘仪离心机仪器有限公司）;移液器（德国eppendorf），一次性聚丙乙烯反应板等。

1.2  方法

1.2.1  新城疫抗体检测  采用血凝抑制试验（HI）方法进行，按照国家标准GB/16550-2008进行。

反应板中每孔加入0.025ml PBS;第1孔中加入0.025ml血清;在反应板上将血清做横向0.025ml的对倍稀释，至第10孔;在第1孔至第11孔中，每孔加入0.025ml的4HAU抗原，室温下（20～25℃）静置30min或2～8℃ 45～60min;每孔加入0.025ml 1%（V/V）的鸡红细胞悬液，轻晃混匀后，室温（20～25℃）静置20～40min或2～8℃ 45～60min，当对照孔红细胞呈显著纽扣状时判定结果。

结果判定：以完全抑制4HAU抗原的最高血清稀释倍数判为该血清的HI效价。当阳性血清的HI效价与已知效价误差不超过1个滴度，阴性血清效价不高于1：4时，试验方可成立。被检样品HI效价≤1：4判为阴性;等于1：8判为可疑（可疑样品应重检，重检效价≥1：8判为阳性，<1：8判为阴性）;≥1：16判为阳性。

1.2.2  新城疫病原学检测  采用新城疫病毒核酸测定试剂盒检测采集的双拭子样品中是否含有新城疫病毒，具体操作参照试剂盒说明书进行。

1.2.3  检测结果分析  根据ND抗体检测结果，分析不同地区、不同规模鸡场新城疫抗体水平;根据ND病原学检测结果分析各地是否有新城疫病毒感染。

2  检测结果与分析

2.1  不同地区鸡场新城疫抗体检测情况  从表1可以看出，4个地市共检测219个鸡场、样品6438份，合格率为91.64%，远超过国家规定的70%的合格率标准;4个地市抗体合格率均在80%以上，其中信阳地区最高为99.78%，最低的济源为83.53%。

2.2  不同规模鸡场新城疫抗体检测情况  从表2可以看出，4个地市规模鸡场平均合格率为94.32%，高于散养户（82.04%）12个百分点;其中，规模场的抗体合格率中，信阳和焦作的最高，为为100%，济源最低为87.62%;散养户抗体合格率，信阳最高为99.16%，最低的济源仅为70.19%。

2.3  新城疫病毒检测情况  由图1和表3可以看出，采集的178份双拭子样品中未检出新城疫病毒。

3  讨论与分析

现阶段，新城疫不是国家强制免疫疫病，但由于该病的危害性较大，国家十分重视该病的防控工作，部分省市也将该病纳入强制免疫范围，由政府免費为养殖户提供疫苗，各级畜牧兽医部门检查评估时新城疫抗体水平也是必须检测的。从本次调查结果看，4个地市的新城疫抗体水平均在80%的以上，超过国家要求的70%的合格率标准，其中信阳、周口、焦作3个地市的抗体合格率均在90%以上，只有济源市的为83.53%。国内其他地区新城疫抗体水平调查情况：张登基调查2016～2017年甘肃金昌金川区的抗体水平为97.07%[4]、谢伟调查2015～2017年四川乐山的抗体合格率为89.15%[5]、苏琪调查西安市抗体合格率为93%[6]。从表2可以看出不同规模鸡场的抗体合格率有差异，从调查结果来看，规模场的抗体合格率高于散养户的抗体合格率，分析原因：一是规模场制定免疫程序合理，新城疫免疫次数较多，散养户免疫意识淡薄，免疫次数少或免疫剂量不足;二是规模场定期检测，根据检测的抗体水平开展补免补防，散养户较少进行检测。

做好新城疫的防控，要采取综合性的防控措施[7-8]：一是加强疫苗免疫。制定科学合理的免疫程序，雏鸡要在7日龄、21日龄滴鼻免疫，以后每隔2～3个月，加强免疫一次;二是实时检测鸡群新城疫抗体水平，如果抗体合格率低于70%或者抗体滴度低于5log时，尽快补免补防;三是做好饲养管理，提高鸡群的抵抗力。鸡舍及活动场地要定期清粪、消毒，消灭病原体;天气骤变或者有应激因素时，要给予鸡群电解质，提高其抗应激能力;四是定期给鸡群投喂保健性药物，特別是鸡群发生细菌性或者呼吸道疾病时，避免新城疫的发生。

参考文献：

[1]  Jia YQ， Wang XL， Wang XW， et al. Common microRNA-mRNA Interactions in Different Newcastle Disease Virus-Infected Chicken Embryonic Visceral Tissues[J].Int J Mol Sci. 2018;19（5）：1291.

[2]  陈溥言.兽医传染病学（第六版）[M].北京：中国农业出版社，2015：367-372.

[3]  李悦，刘思当.鸡新城疫的流行现状及防控[J].家禽科学，2018（05）：33-34.

[4]  张登基，李晓霞，贾宁.金昌市金川区2016年-2017年鸡新城疫的检测与分析[J].国外畜牧学（猪与禽），2018，38（12）：53-55.

[5]  谢伟，唐眉，赵国芝，等.2015-2017年四川乐山市家禽禽流感（H5）和新城疫免疫抗体检测与分析[J].养殖与饲料，2018（12）：14-16.

[6]  苏琪，李小丽.西安市鸡新城疫免疫抗体水平调查与分析[J].动物医学进展，2017，38（06）：102-106.

[7]  于瑞菊，张春平，刘玉山，等.山东省新城疫流行概况及综合预防[J].家禽科学，2012（09）：30-32.

[8]  费强.禽流感与新城疫的综合防控措施[J].家禽科学，2012（11）：30-32.

收稿日期：2019-03-17

作者简介：胡从胜（1975-），男，河南光山人，兽医师，大专，主要从事动物疾病诊断与检测。