不同能量冲击波对大鼠慢性前列腺炎的影响

黄穗翔?罗月葵?魏星?吴秋韵?汤达承

【摘要】目的 研究不同能量體外冲击波对慢性非细菌性前列腺炎（CAP）的作用。方法 选取健康SD大鼠24只，随机分成对照组、模型组、低能量密度组（低剂量组）、中能量密度组（中剂量组），每组各6只，另取10只SD大鼠制备前列腺蛋白乳化混悬液，予模型组、低剂量组、中剂量组多点注射大鼠前列腺蛋白乳化混悬液以诱导CAP动物模型，45 d造模成功后，低剂量组及中剂量组分别给予1.5 bar 10 Hz 1000次或3.5 bar 10 Hz 1000次冲击波治疗，每周1次，连续4周。然后安乐处死大鼠，迅速取前列腺组织，称量前列腺湿重，计算前列腺指数，检测前列腺白细胞数量和卵磷脂小体密度变化;苏木素-伊红（HE）染色观察腺体、导管区和间质的病理变化;ELISA法检测血清、前列腺组织中的神经生长因子（NGF）、IL-1β和TNF-α蛋白表达，免疫组织化学染色（免疫组化）检测前列腺组织中IL-6蛋白表达。结果 与对照组比较，低、中剂量组及模型组大鼠的前列腺湿重、前列腺指数增加，白细胞增多，卵磷脂小体密度下降（P均< 0.05）。与模型组及低剂量组比较，中剂量组前列腺指数降低、白细胞减少、卵磷脂小体密度升高（P均< 0.05）。HE染色显示低剂量组及中剂量组未见前列腺增生，炎症细胞聚集相对较少。低剂量组和中剂量组血清和前列腺组织中的炎症相关因子NGF、IL-1β和TNF-α水平均低于模型组（P均< 0.05）。中剂量组大鼠血清中TNF-α、NGF和前列腺组织中NGF水平均低于低剂量组（P均< 0.05）。免疫组化显示，IL-6在对照组中呈阴性表达、在模型组中呈阳性表达、在低剂量组和中剂量组中呈弱阳性表达。结论 低、中能量密度冲击波可能通过调节前列腺指数、减少白细胞、增加卵磷脂小体密度以及降低腺体、导管和间质炎症细胞聚集，降低血清、前列腺组织中炎症因子NGF、IL-1β和TNF-α表达，减轻CAP大鼠模型前列腺炎症反应，中能量密度冲击波对CAP大鼠模型的治疗效果优于低能量密度冲击波。

【关键词】慢性非细菌性前列腺炎;体外冲击波;大鼠;神经生长因子;白介素-1β;

肿瘤坏死因子-α

Effect of extracorporeal shock wave with different energy on chronic abacterial prostatitis in rats Huang Suixiang， Luo Yuekui， Wei Xing， Wu Qiuyun， Tang Dacheng. Department of Pain Management， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangzhou 510220， China

Corresponding author， Huang Suixiang， E-mail： 13609789599@139.com

【Abstract】Objective To evaluate the effect of extracorporeal shock wave （ESW） with different energy on chronic abacterial prostatitis （CAP）.  Methods Twenty-four healthy SD rats were randomly divided into the control group （n = 6）， model group （n = 6）， low-dose group （n = 6） and medium-dose group （n = 6）. In the model， low-dose and medium-dose groups， CAP rat models were established by injection of the prostate protein emulsion suspension from another 10 SD rats into the prostate. At 45 d after model establishment， 1000 times of 1.5 bar 10 Hz and 3.5 bar 10 Hz ESW were delivered once weekly for 4 consecutive weeks in the low- and medium-dose groups. All rats were euthanasized， the prostate tissues were rapidly collected and weighted. The prostate index was calculated. The changes of the white cell count and the density of lecithin corpuscle were detected. The pathological changes of the glands， duct area and stroma were observed by H.E. staining. The expression levels of nerve growth factor （NGF）， IL-1β and tumor necrosis factor （TNF）-α protein were quantitatively detected by ELISA. The expression of IL-6 protein was detected by immunohistochemistry.  Results Compared with those in the control group，wet prostate weight， prostate index and white cell count were significantly increased， whereas the density of lecithin corpuscle was remarkably decreased in the model， low- and medium-dose groups （all P < 0.05）. Compared with those in the model and low-dose groups， the prostate index and white cell count were significantly decreased， whereas the density of lecithin corpuscle was considerably increased in the medium-dose group （all P < 0.05）. H.E. staining demonstrated no prostate hyperplasia and relatively slight inflammatory cell aggregation in the low- and medium-dose groups. The expression levels of NGF， IL-1β and TNF-α in the serum and prostate tissues in the low- and medium-dose groups were significantly down-regulated than those in the model group （all P < 0.05）. The expression levels of TNF-α and NGF in the serum samples and NGF in the prostate tissues in the middle-dose group were significantly lower than those in the low-dose group （all P < 0.05）. Immunohistochemistry showed that IL-6 was negatively expressed in the control group， positively expressed in the model group， and weakly positively expressed in the low- and medium-dose groups.  Conclusions ESW with low and medium energy and density can mitigate the inflammatory reaction of prostate in CAP rat models by regulating the prostate index， reducing the white blood cells， increasing the density of lecithin corpuscle， decreasing the aggregation of inflammatory cells in glands， ducts and stroma， and down-regulating the expression levels of NGF， IL-1β and TNF-α in the serum and prostate tissues. The therapeutic effect of medium-energy ESW is better than that of low-energy ESW in the CAP rat models.

【Key words】Chronic abacterial prostatitis;Extracorporeal shock wave;Rat;Nerve growth factor;

Interleukin-1β;Tumor necrosis factor-α

慢性非细菌性前列腺炎（CAP）是50岁以下成年男性常见的泌尿系统疾病，是50岁以上男性的第3位泌尿系统常见病[1]。CAP的病因和发病机制非常复杂，任何单一机制均不能对其众多复杂的临床表现作出满意的解释[2]。目前，临床上对于CAP仍以药物治疗为主，虽然能在一定程度上改善患者症状，但是长期用药容易增加并发症发生率，影响患者治疗耐受性及预后。冲击波治疗作为一种新型治疗手段，具有周期短、频谱广等特点，已经广泛用于泌尿系结石、痉挛性疾病的治疗，而近年其在慢性骨盆疼痛综合征（CPPS）中的治疗作用也备受关注[3]。冲击波治疗在CAP患者中的作用研究较少[4]。本研究采用随机对照方式，探讨不同能量体外冲击波对CAP大鼠的前列腺组织及相关细胞因子表达的作用与影响，现报告如下。

材料与方法

一、实验动物

健康雄性SD大鼠（8周龄，200 g）34只，购于广州中医药大学实验动物中心，合格证号：SCXK（粤）2013-0034，实验期间自由饮食（消毒自来水，普通大鼠饲料），自然采光。

二、主要试剂及仪器

主要试剂包括：完全弗氏佐剂（FAC），含0.5% Triton X-100（内皮细胞裂解液）的生理盐水（自配），Trizol RNA 抽提剂（美国Invitrogen 公司），大鼠IL-1β ELISA试剂盒、大鼠TNF-α ELISA试剂盒、大鼠神经生长因子（NGF）ELISA试剂盒（武汉纯度生物科技有限公司），即用型兔UItraSensitive SP超敏试剂盒（迈新生物技术有限公司），IL-6（武汉赛维尔生物科技有限公司）。主要仪器包括：电动匀浆器（上海净信），实时定量PCR扩增仪（Roche 公司），冲击波治疗仪（BTL-5000SWT），酶标仪（ThermoFisher），漩涡混合器（其林贝尔仪器制造有限公司），纯水机（厦门锐思捷水纯化技术有限公司），冰箱（青岛海尔股份有限公司），脱水机、石蜡包埋机（武汉俊杰电子有限公司），切片机（上海莱卡仪器有限公司）。

三、方 法

1. SD大鼠前列腺蛋白乳化混悬液的制备

取10只健康雄性SD大鼠，断脊处死，局部皮肤消毒，下腹正中切口，用剪刀剪开大鼠腹部皮肤和肌肉，提起膀胱，暴露前列腺及精囊腺，剥离前列腺，剪除多余的脂肪组织，将精囊腺与前列腺分离，剪下的前列腺组织于生理盐水中洗净3 ～ 5遍待用。用眼科剪剪碎前列腺组织，分批加入预先高温灭菌的0.5% Triton X-100生理盐水溶液40 ml，用电动匀浆器制成匀浆。烧杯放置在冰块中，保持低温。把匀浆充分的前列腺组织用吸管吸入离心管中，天平配平后置入高速离心机中以4 ℃、12 000转/分离心30 min，用吸管吸去上层脂肪组织，取上清液，放入冷冻管-20℃保存备用。取余下的上清液0.2 ml，等比稀释后依次放入孔板，在酶标仪上读取光密度（OD）值。然后采用紫外法测定蛋白含量，蛋白含量（mg/ml）=（1.45×OD280-0.74×OD260） ×稀释倍数，测定上清液的蛋白含量（所计算标本为稀释250倍的溶液）。用生理盐水将紫外法测定蛋白浓度的原液稀释至40 mg/ml。用FAC按1∶1的比例加入稀释好的前列腺蛋白液中，将试管放置于冰块内保持低温，用乳化匀浆机进行乳化，当滴1滴至水面上长时间保持圆珠状而不散开时即可。

2. 动物分组及CAP模型制备

余24只SD大鼠随机分为对照组、模型组、低能量密度组（低剂量组）、中能量密度组（中剂量组），每组6只。除对照组外，其他3组大鼠采用下述方法造模：将实验大鼠采用水合氯醛麻醉，多点皮下注射大鼠前列腺蛋白乳化混悬液1.0 ml，剂量为15 mg/ml，30 d再注射1次。对照组大鼠在0、30 d皮下多点注射磷酸鹽缓冲液1.0 ml。45 d

后，出现特异性的形态学与分子生物学改变即模型制作成功。本实验中动物的饲养与处死均符合动物伦理学要求。

3. 冲击波治疗

造模成功后，对大鼠进行水合醛麻醉，将冲击波的第二焦斑定于大鼠的前列腺组织上，进行冲击波治疗。低剂量组予1.5 bar 10 Hz 1000次电击、中剂量组予3.5 bar 10 Hz 1000次电击，每周1 次，连续治疗4周。

4. 大鼠前列腺指数检测

冲击波治疗4周后，称量大鼠体质量，尾静脉取血，然后处死，迅速取出前列腺组织，并称量大鼠前列腺湿重，计算对照组、模型组、低剂量组、中剂量组的大鼠前列腺指数，前列腺指数=前列腺湿重（mg）/大鼠体质量（g）。

5. 大鼠白细胞数量和卵磷脂小体密度变化

取各组大鼠前列腺组织，收集前列腺按摩液1滴于显微镜下观察白细胞数目及卵磷脂小体密度的变化，观察并记录卵磷脂小体密度，评分标准为：满视野4分，3/4 视野3分，1/2视野2分，1/4视野1分。

6. 大鼠前列腺组织的病理学检查

采用苏木素-伊红（HE）染色：将大鼠前列腺组织经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、3 μm厚切片。水浴、烤片，37 ℃过夜静置。依次进行脱蜡、水化、HE染色和中性树胶封片，显微镜下观察腺体、导管区和间质的变化，并采集图片。每张切片分别在200倍及400 倍光镜下拍10个视野。

7. 血清、组织匀浆上清液中NGF、IL-1β、TNF-α水平的检测

治疗 4 周后，大鼠尾静脉取血，而后取前列腺组织，眼科剪剪碎，倒入匀浆器中，移液管加入生理盐水1 ml，进行匀浆（匀浆器下端浸入干冰中）。随后将组织匀浆在低温下以3000转/分离心10 min。采用双抗体夹心ELISA法检测各组大鼠血清、组织匀浆上清液中NGF、IL-1β、TNF-α水平，操作严格按照试剂盒说明书进行。

8. 前列腺组织中IL-6蛋白表达强度检测

采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）染色：将大鼠前列腺组织经梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、3 μm厚切片，水浴、抗原修复，切片上划蜡滴加非免疫性动物血清，室温封闭 30 min。最后切片经一抗（IL-6）处理，4 ℃过夜，磷酸盐吐温缓冲液洗涤5次，每次3 min，以生物素标记的第二抗体室温下孵育40 min。SP溶液室温孵育15 min，二氨基联苯胺（DAB）-过氧化氢显色。每张切片分别在100及400 倍光镜下拍10个视野。IL-6阳性表達为细胞和（或）胞浆中见棕黄色的颗粒，分别对镜下阳性细胞比例和染色强度进行评分，阳性细胞比例0% ～ 5%为0分、5% ～ 25%为1分、26% ～ 50%为2分、51% ～ 75%为3分、75% ～ 100%为4分，染色强度无着色为0分、淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。阳性细胞比例和染色强度计分乘积为阳性等级，0分为阴性、1 ～ 4分为弱阳性、5 ～ 8分为阳性、9 ～ 12分为强阳性。

四、统计学处理

使用SPSS 22.0 分析数据。计量资料以表示，多组比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD-t检验。P < 0.05为差异有统计学意义。

结果

一、4组大鼠体质量、前列腺湿重及前列腺指数的比较

4组大鼠的体质量相近（P > 0.05）。与对照组比较，模型组、低剂量组和中剂量组前列腺湿重及前列腺指数均较高（P均< 0.05）。与模型组及低剂量组比较，中剂量组前列腺指数较低（P均< 0.05），见表1。

表1         4组大鼠体质量、前列腺湿重和前列腺

指数比较（）

组 别 n 体质量

（g） 前列腺湿重

（mg） 前列腺指数（mg/g）

对照组 6 382±19 1133±65 2.97±0.08

模型组 6 394±16 1369±48a 3.48±0.09a

低剂量组 6 395±27 1327±53a 3.36±0.10a

中剂量组 6 409±29 1274±89a 3.12±0.11abc

F值 1.324 14.706 33.403

P值 0.295 < 0.001 < 0.001

注：与对照组比较，aP < 0.05;与模型组比较，bP < 0.05;与低剂量组比较，cP < 0.05

二、4组大鼠前列腺液中白细胞数量和卵磷脂小体密度的变化

与对照组相比，模型组、低剂量组和中剂量组前列腺液中白细胞增多（P均< 0.05）。与模型组对比，中剂量组前列腺液中白细胞减少（P < 0.05）。与低剂量组相比，中剂量组前列腺液中白细胞减少（P < 0.05）。与对照组相比，模型组的卵磷脂小体密度下降（P < 0.05），低剂量组、中剂量组的卵磷脂小体密度有所升高（P均< 0.05），中剂量组的卵磷脂小体密度高于低剂量组（P < 0.05），见表2。

表2       4组大鼠前列腺液白细胞及卵磷脂小体密度

比较（）

组 别 n 白细胞（×106/L） 卵磷脂小体密度（分）

对照组 6 6.1±0.1 0.23±0.03

模型组 6 15.5±0.9a 0.10±0.04a

低剂量组 6 14.7±0.6a 0.58±0.10ab

中剂量组 6 12.0±0.7abc 0.93±0.12abc

F值 255.945 129.704

P值 < 0.001 < 0.001

注：与对照组比较，aP < 0.05;与模型组比较，bP < 0.05;与低剂量组比较，cP < 0.05

三、治疗后4组大鼠前列腺组织病理形态分析

取各组大鼠前列腺组织切片行HE染色，光镜下观察：对照组前列腺腺体分布疏散，管腔可见分泌物;模型组腺上皮细胞变性，前列腺增生，炎症细胞聚集;低剂量组间质稀疏，炎症细胞聚集;中剂量组管腔内可见炎症细胞聚集。与模型组相比，低剂量及中剂量组未见前列腺增生，炎症细胞聚集相对较少，见图1。

四、4组大鼠血清和前列腺组织中NGF、IL-1β和TNF-α水平比较

1. 4组大鼠血清NGF、IL-1β和TNF-α水平比较

与对照组相比，模型组大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平均升高（P均< 0.05），低剂量组大鼠血清中NGF、TNF-α水平均升高（P均< 0.05），中剂量组大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平与对照组比较差异均无统计学意义（P均> 0.05）。与模型组比较，低剂量组、中剂量组大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平均降低（P均< 0.05）。与低剂量组相比，中剂量组大鼠血清中NGF、TNF-α水平均降低（P均< 0.05），见表3。

表3        4组大鼠血清NGF、IL-1β和TNF-α

水平比较（）                           ng/L

组 别 n NGF IL-1β TNF-α

对照组 6 226±39 22.3±5.9 189±19

模型组 6 382±33a 38.1±1.8a 323±17a

低剂量组 6 297±30ab 27.4±1.7b 248±26ab

中剂量组 6 258±31b 26.3±5.4b 217±24bc

F值 24.129 15.687 41.743

P值 < 0.001 < 0.001 < 0.001

注：与对照组比较，aP < 0.05;与模型组比较，bP < 0.05;与低剂量组比较，cP < 0.05

2. 4組大鼠前列腺组织中NGF、IL-1β和TNF-α水平比较

与对照组相比，模型组大鼠前列腺组织中NGF、IL-1β和TNF-α水平均升高（P均< 0.05），低剂量组大鼠前列腺组织中NGF、IL-1β水平均升高（P均< 0.05），中剂量组大鼠前列腺组织中仅NGF水平升高（P < 0.05）。与模型组相比，低剂量组与中剂量组大鼠前列腺组织中NGF、IL-1β和TNF-α水平均下降（P均< 0.05）。中剂量组大鼠前列腺组织中NGF水平低于低剂量组（P < 0.05），见表4。

表4    4组大鼠前列腺组织中NGF、IL-1β和TNF-α

水平比较（）                        ng/L

组 别 n NGF IL-1β TNF-α

对照组 6 355±39 27.6±6.0 308±19

模型组 6 494±33a 43.3±1.8a 447±17a

低剂量组 6 422±30ab 34.9±1.7ab 359±26b

中剂量组 6 387±31abc 31.5±5.4b 332±24b

F值 18.706 15.901 45.993

P值 < 0.001 < 0.001 < 0.001

注：与对照组比较，aP < 0.05;与模型组比较，bP < 0.05;与低剂量组比较，cP < 0.05

五、4组大鼠前列腺组织中IL-6的表达情况

IL-6在前列腺组织胞浆、胞外中均有表达，在对照组中呈阴性表达，在模型组中呈阳性表达，在低剂量组和中剂量组中呈弱阳性表达，见图2。

讨论

前列腺炎是一种异质性综合征，约占到泌尿外科门诊量的25%，主要表现为盆腔疼痛和下尿路症状，严重影响男性的生活质量。1995年，前列腺炎被美国国立卫生研究院（NIH）统一分为4类：急性细菌性前列腺炎、慢性细菌性前列腺炎、CAP/CPPS、无症状的炎症性前列腺炎[5]。CAP病因复杂，现有药物疗效欠佳，因此寻找有效的治疗方法对临床医师仍然是一项挑战[6]。

随着临床与实验研究逐步深入，人们的焦点更多集中在免疫因素对CAP的作用上[7]。细胞因子的变化是免疫因素参与前列腺炎症调节机制中最重要的检测指标，其主要涉及调节性细胞因子、抗炎症细胞因子和促炎症细胞因子[8-9]。IL-1β、TNF-α属于促炎症细胞因子，是炎症反应中最早出现的细胞因子，通过增加趋化因子（IL-8、ENA-78）、环氧酶-2、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和细胞黏附因子的表达来促进全身炎症反应发展。邹如政等[10]报道，CAP模型小鼠的IL-1β、TNF-α水平高于正常对照组。NGF作为一种蛋白，可调节周围和中枢神经元的生长发育，维持神经元的存活。有研究表明，在自身免疫性前列腺炎小鼠模型中，NGF的表达与疼痛的严重程度呈正相关[11]。

IL-6主要由单核巨噬细胞、内皮细胞产生，能诱导激活T、B淋巴细胞的分化，促进中性粒细胞的溶酶体活性和吞噬功能。?utulovi?等[12]报道，CAP/CPPS患者前列腺按摩液中的IL-6水平高于对照组，且增加癫痫发作的易感性，也与疼痛的缓解相关。白细胞数及卵磷脂小体密度是前列腺炎的共同检测指标。其中前列腺液中的白细胞数目反映了腺体上皮受损的程度，而卵磷脂小体作为前列腺液的成分之一，能起到保护精子的作用。临床上，白细胞增多常与卵磷脂小体减少相对应。

本研究采用SD大鼠前列腺蛋白提纯液辅以免疫佐剂注射诱导自身免疫性前列腺炎，即CAP模型，模型制备方法已被广泛认可[13]。本研究显示，模型组大鼠的前列腺湿重及前列腺指数均高于对照组，同时白细胞多于对照组、卵磷脂小体密度低于对照组。进一步通过HE染色观察各组小鼠腺体、导管区和间质的病理变化，结果显示对照组前列腺腺体分布疏散，管腔可见分泌物，而模型组腺上皮细胞变性，前列腺增生，炎细胞聚集。血清和前列腺组织中IL-1β、TNF-α和NGF的表达中，模型组小鼠各细胞因子的水平均高于对照组，免疫组化也显示模型组IL-6蛋白表达为阳性，而对照组IL-6蛋白表达水平为阴性。以上这一系列检测均从不同角度说明诱导后的模型组出现不同程度的组织炎症指征，即自身免疫因素参与了CAP的发病过程，在这个过程中，前列腺体质量及指数受影响，细胞因子间的动态平衡受到破坏，HE检测腺体局部也出现炎症病变，充分表明CAP模型建模成功。

本研究的主要目的是研究不同能量的体外冲击波对CAP的作用。体外冲击波法作为一种较保守的治疗方法，其主要通过能量转换和传递，造成不同密度的组织之间产生机械应力效应、空化效应及神经阻滞效应;通过机械力效应加速病灶血管循环，促进组织再生;而通过神经镇痛效应可引起细胞周围自由基的改变，释放抑制疼痛的物质一氧化氮，从而缓解疼痛症状。近年体外冲击波逐渐转向慢性疼痛治疗领域，Mattheolabakis等[14]通过采用冲击波治疗，下调降钙素基因作用的坐骨神经元受体，从而抑制痛觉的产生，使大鼠步行距离明显改善。同时通过冲击波作用，也能调节炎症细胞的变化。Sukubo等[15]用低能量的冲击波干预巨噬细胞可抑制促炎症细胞因子的产生，同时促进抗炎物质的生成。近年来，低能量体外冲击波在ⅢB型CAP患者中得到应用，且效果理想。本研究探讨了2种不同能量（分别为低剂量、高剂量）冲击波对CAP大鼠的疗效。结果显示，低剂量组、中剂量组CAP大鼠体质量及前列腺湿重下降、白细胞减少、卵磷脂小体密度升高，中剂量组的前列腺指数有所下降，HE显示模型组腺上皮细胞变性、前列腺增生、炎症细胞聚集，低剂量组间质稀疏、炎细胞聚集，与模型组差异不大，中剂量组管腔内虽可见炎症细胞聚集，但相比模型组，未见前列腺增生，这在一定程度上说明炎症细胞聚集相对较少。另外，低剂量组、中剂量组血清和前列腺组织中IL-1β、TNF-α及NGF水平均低于模型组，中剂量组降低更明显。进一步免疫组化检测显示低剂量组和中剂量组IL-6蛋白减弱，但不明显，这一系列结果表明通过冲击波可减轻炎症反应，可能是其抑制炎症细胞的迁移、黏附，阻止其穿越血管内皮细胞，减轻炎症细胞对前列腺组织的浸润，最终减少炎症介质在前列腺组织的释放，减轻前列腺组织的炎症免疫损伤。本研究中，低剂量组和中剂量组与对照组相比，各指征仍部分存在差异，说明所用体外冲击波的强度在后续试验研究中还可进一步进行优化调整，以期达到更好的治疗效果。

综上所述，低能量密度及中能量密度冲击波可减轻CAP大鼠前列腺组织的炎症反应，且中能量密度冲击波效果更好，这为将来CAP的靶点治疗提供了一定的实验依据。有关冲击波对CAP的具体作用机制有待日后研究论证。

参 考 文 献

[1] Paulis G. Inflammatory mechanisms and oxidative stress in prostatitis： the possible role of antioxidant therapy. Res Rep Urol，2018，10：75-87.

[2] 赵亮，陈玉琴，程邵龙，肖明朝. 姜黄素对免疫性前列腺炎大鼠肿瘤坏死因子-α、核因子-κB、环氧合酶-2表达的影响.重庆医科大学学报，2016，41（9）：910-914.

[3] 张志超， 彭靖. 慢性前列腺炎/慢性盆腔疼痛综合征的新诊断/治疗模式——UPOINT系统. 中华男科学杂志，2013，19（7）：579-582.

[4] 葛劲超，朱进.体外冲击波治疗ⅢB型前列腺炎疗效的Meta分析.临床与病理杂志，2015，35（9）： 1662-1667.

[5] Gao J， Gao P， Hao Z， Zhou Z， Liu J， Li H， Xing J， Zhou Z， Deng C， Deng L， Wei Q， Zhang X， Zhou J， Fan S， Tai S， Yang C， Shi K， Huang Y， Ye Z， Liang C. Comparison of National Institutes of Health-Chronic Prostatitis Symptom Index with International Index of Erectile Function 5 in men with chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome： a large cross-sectional study in China. Biomed Res Int，2015，2015：560239.

[6] Khan FU， Ihsan AU， Khan HU， Jana R， Wazir J， Khongorzul P， Waqar M， Zhou X. Comprehensive overview of prostatitis. Biomed Pharmacother，2017，94：1064-1076.

[7] Górski A， Jończyk-Matysiak E， ?usiak-Szelachowska M， Mi?dzybrodzki R， Weber-D?browska B， Borysowski J， Letk-iewicz S， Bagińska N， Sfanos KS. Phage therapy in prostatitis： recent prospects. Front Microbiol，2018，9：1434.

[8] Hu Y， Niu X， Wang G， Huang J， Liu M， Peng B. Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome impairs erectile function through increased endothelial dysfunction， oxidative stress， apo-ptosis， and corporal fibrosis in a rat model. Andrology，2016，4（6）：1209-1216.

[9] Soric T， Selimovic M， Bakovic L， ?imurina T， Selthofer R， Dumic J. Clinical and biochemical influence of prostatic stones. Urol Int，2017，98（4）：449-455.

[10] 鄒如政，曹继刚，冯秋珍，孙江桥. 前列安丸对慢性非细菌性前列腺炎大鼠前列腺组织IL-1β、IL-10及TNF-α的影响. 中国中西医结合杂志，2015， 35（10）：1223-1227.

[11] 郑明星，刘孝东，范世成，余新龙， 朱波， 沈洁. NGF、ASIC3与实验性大鼠Ⅲ型前列腺炎骨盆疼痛的相关性研究.四川大学学报（医学版），2018，49（1）：39-43.

[12] ?utulovi? N， Gruba? ?， ?uvakov S， Jovanovi? ?， Pu?ka? N， Macut ?， Markovi? AR， Simi? T， Stanojlovi? O， Hrn?i? D. Chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome increases susc-eptibility to seizures in rats and alters brain levels of IL-1β and IL-6. Epilepsy Res，2019，153：19-27.

[13] 李天赋，李卫巍，吴秋月，张翠， 李娜， 商学军， 夏欣.自身免疫性前列腺炎大鼠模型的建立.中华男科学杂志，2014，20（ 5） ： 414-418.

[14] Mattheolabakis G， Mackenzie GG， Huang L， Ouyang N， Cheng KW， Rigas B. Topically applied phospho-sulindac hydrogel is efficacious and safe in the treatment of experimental arthritis in rats. Pharm Res，2013，30（6）：1471-1482.

[15] Sukubo NG， Tibalt E， Respizzi S， Locati M， d'Agostino MC. Effect of shock waves on macrophages： a possible role in tissue regeneration and remodeling. Int J Surg，2015，24（Pt B）：124-130.

（收稿日期：2019-09-05）

（本文编辑：林燕薇）