切片预染在苏木素质量监测的应用体会

涂艳娟 曾冬钰

苏木素一伊红（Hematoxylin-Eosin，HE）染色技术、冰冻的切片是临床上常用的诊断方法，能实现肿瘤的诊断、鉴别，有助于指导临床诊疗[1-2]。因此，切片质量的好坏，能直接的关系到可否及时、准确对其肿瘤能够做出鉴别及其诊断，能够指导对其手术治疗的方法[3-4]。按目前状态，对冰冻的染色切片所存在的结构组织被破坏、裂隙冰晶比较多、其核分裂现像、染色差对比等的缺点，HE的染色属于最根本组织学病理的染色，其染细胞核的苏木素属于HE的过程染色中的主要，苏木素的染色成功与否，对细胞核着色深浅有及其重要的作用[5-6]。其染液方法的配制有不同种类，最普遍的属于Harris的苏木素和Gill的苏木素，其染色原理相同。因此，现采用随机对照研究，探讨切片预染在苏木素质量监测效果，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

2015年4月—2017年12月相对正常的宫颈管组织及肠粘膜组织、德国LeicaST5020+CV5030全自动染色封片一体机、切片机、烤片机。

1.2 试剂

改良的Gill苏木素、0.25%醇溶性伊红、二甲苯、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇及无水酒精、1%盐酸酒精、中性树胶、Harris苏木素液。

1.3 方法

1.3.1 将染色机常用染色程序及所需试剂输入染色机，并加入相应的试剂，待用。

1.3.2 上述两种组织，切片后捞在同一张载玻片上，在60℃～65℃的烤片机上烤20～30 min，这样的组织切片准备20张，每天染色机开机后放一张进行试染。

1.3.3 具体染色步骤如下。（1）二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、每次5 min。（2）水化：无水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、95%乙醇1 min、80%乙醇1 min、70%乙醇1 min、流水冲洗1 min。（3）染色：改良的Gill苏木素、Harris的苏木素液分别10 min、水洗2 min、1%盐酸酒精分化1 s、自来水返蓝10 min、伊红2 s。（4）脱水透明：70%乙醇1 min、85乙醇1 min、95乙醇1 min、无水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、二甲苯Ⅰ、Ⅱ、每次1 min。（5）中性树胶封固[7]。

2 结果

经过长期观察发现随着染色天数的增加，在不改变染色时间的前提下，染色机内的苏木素从更换后到连续使用15天左右，期间大概染色5 000张切片，苏木素染色力下降，镜下观察预染的组织切片其细胞浆内出现苏木素色素沉着，且随着苏木素的继续使用、胞浆内的色素越来越多，甚至难以分辨细胞之间的界限，看不清核的轮廓，染色结果如图1和图2。

图1 新苏木素染色结果

图2 使用15天后的苏木素

3 讨论

苏木素染色的好坏决定着细胞核的着色深浅，也决定了一张切片的质量。染色前我们可以通过以下几个方面对苏木素的质量进行初步的判断[8]。（1）扩散程度：取一滴苏木素液滴入一杯自来水中：沉在水底不散开呈红色为未成熟；在水中慢慢散开呈絮状，颜色由紫红色渐变为蓝色为成熟；很快散开呈深蓝色为过熟。（2）氧化膜：苏木素在使用过程中随时间的推移会在液体表面出现一层氧化膜，可以用纸张刮除继续使用，但是氧化膜出现的时间间隔会越来越短，意味着苏木素越来越成熟[9]。（3）pH：颜色随pH值变化：酸性—红色，中性—紫色。碱性—蓝色。细胞核的等电点pH为3.3～3.6，当染液的pH＞细胞核的等电点，细胞核带负电，易与带正电的碱性染料苏木素结合。

对于高血压较长症状的老年的患者，其全身动脉的系统病变，尤其小动脉的改变，及其显著，其舒张压极难进行降低，降压药剂量太大，其血压的下降太多，对组织的血液灌注及其不利，胰激的酶肽释放属于水解酶蛋白，广泛在哺乳类的组织动物中出现，其中含量最高属于胰腺[10]。在其体内，对其激肽原中所释放出的激肽的作用，可以扩张平滑肌血管、毛细血管，改善血液循环，它还能将纤溶酶原转变为纤溶酶，能进一步的把不溶性纤维的水解蛋白转成可溶性的小肽，对血栓进行溶解。

Harris苏木素液属于全氧化的苏木素，其苏木素的用量太大，被经过氧化后，转成有染色能力的苏木红比较多，在进行染色后，应对其进行乙醇盐酸的分化，从而退掉不应着色和过染的部分，是退行性的染色。GiU苏木素属于半氧化的苏木素，对其苏木素的用量比较小，被进行氧化所形成的苏木红比较少，由此在比较短的时间里，不会出现过染色情况，也就不会有乙醇盐酸的分化。Harris苏木素及其Gill苏木素进行配制的过程中，运用的媒染剂普遍属于硫酸铝和铝钾硫酸，在其中有主要作用的都属于铝离子。太多的媒染剂对让其溶液呈现胶状，并很快失效，不会对染色的能力进行增强，不会延长染色剂使用的时间。Gill苏木素其配制的过程中所运用的氧化剂属于碘酸钠，其苏木素所运用的氧化剂属于氧化汞。其苏木素只有将其转变成苏木红后，才会对其发挥出染料作用，在此过程里氧化属于关键部分，氧化的不充分对其染色的能力极差，过度的氧化会让染液的表面呈现出氧化膜，会引起切片的污染。Harris苏木素运用加温的氧化，虽然能够加速其形成苏木红，但极易有金属样氧化膜的出现，会浮在容器壁上及其液面上[11]。碘酸钠的氧化剂属于水溶性的氧化剂，在同苏木索的氧化中所出现均匀的反应，其氧化的还原作用属于持续性的增强，没有形成氧化膜，由此对于切片的污染同样也减少了，其费用相比运用氧化汞的成本低，没有毒性，还能对环境的污染进行减少。Harris的苏木素属于渐退性的染液的一种，在进行配制后的运用，所出现的着色力较强。GiU苏木素在最佳的染色力中，属于染色的中期，在对其掌握的染色时间会有所不同[12]。

全自动染色封片机以其操作量大、稳定性好、效率高等优点已被越来越多的病理科接受并使用，逐渐替代手工操作，但是一旦染色液出现问题，经常导致的也是成批的切片需要重新制片，我们在使用染色机前除了按上述方法对染色液的质量进行初步的判断外，还可以通过织预染的方式来进一步保障染色质量，特制的组织切片选取相对正常的肠粘膜及宫颈管组织，前者含杯状细胞分泌粘蛋白MUC2，后者含宫颈管腺体分泌粘蛋白MUC5AC，这两种粘蛋白都属于凝胶型粘蛋白，容易吸附杂质。后续长时间的染色观察发现当预染切片胞浆内出现苏木素色素沉着时，当天机染的其他组织染色质量也较差。因此我们便可以把出现色素沉着作为发现苏木素质量问题的依据，及时更换苏木素以确保后续工作的正常进行。预染不仅意味着对试剂是否有效的检测，同时也对染色机的程序是否正常运行进行了测试。每天将预染出来的切片交由医生镜下观察，确认无染色质量问题后即可进行日常工作的染色，通过组织切片的预染，我科的HE染色质量进一步得以提高。

综上所述，通过组织切片预染能够对苏木素的质量起着有效的监测作用，保障HE染色质量。