沙棘果油对酒精引起小鼠骨髓细胞微核率和肝脏损伤的影响

王 波

(西安文理学院 生物与环境工程学院基因工程实验室，陕西 西安 710065)

沙棘(Hippophaerhamnoides) 是胡颓子科沙棘属，是一种落叶性灌木沙棘极耐干旱，在我国西北部大量种植。近年来，沙棘作为一种药食同源植物，沙棘产品开发受到广泛关注。沙棘油是沙棘中最有价值的组分之一，目前对沙棘油对调节血脂[1]、促进微循环[2]、抗炎、调节免疫[3]以及抗癌[4]等方面的报道。《柳叶刀》杂志最新研究发现，酒精已经成为全球第七大导致早死及致残因素,并导致肝损伤[5]。随着酒精摄入量增加，出现健康问题的风险显著升高。金艳花等人发现，酒精依赖患者平均微核细胞率明显高于正常人[6],提示酒精对遗传物质有损伤作用。虽然很多学者沙棘油的药理作用、营养保健作用做了大量的研究，但沙棘果油能对遗传物质损伤是否有改善未见相关报道。微核试验是目前公认的判断遗传物质损伤的遗传学指标[7]。研究以沙棘果油为研究对象，探讨沙棘果油对酒精引起的遗传物质损伤是否有改善作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物

健康成年昆明小鼠100只，雌雄兼用，体重20～25 g之间，由西安文理学院动物中心提供。小鼠随机分为5组，对照组，饮酒组和沙棘果油组(饮酒+沙棘果油组)，每组20只，雌雄各半，体重在20～25 g左右。小鼠在实验期间自由取食和饮水，饲养温度在20～25℃，湿度维持在40%～60%。光照按照12 L∶12D的光周期控制，动物的饲养按照西安文理学院动物伦理委员会的要求进行饲养。

1.2 材料

沙棘果油(国食健字G20120054)，购于山西五台山沙棘制品有限公司。白酒(50%)，陕西省太白酒业有限责任公司。超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)测定试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买。酶标仪(BioTek ELX800)，离心机(湖南湘仪实验室仪器开发有限够公司，H1650-W)。

1.3 实验方法

饮酒模型组和沙棘果油不同剂量组小鼠每天上午9点按照0.2 mL·10 g-1灌胃白酒，沙棘果油不同剂量组在每天下午3点分别灌服低中高三个剂量组(5 mL·kg-1·bw-1，10 mL·kg-1·bw-1和20 mL·kg-1·bw-1沙棘果油，n=10)。对照组在上下午分别灌服等量的蒸馏水(n=10)，模型组在下午灌服等量蒸馏水，连续灌胃14 d。

1.4 指标检测

1.4.1 微核率制备与计数 末次灌服沙棘果油24 h后，将小鼠颈椎脱臼处死，按常规制备方法[7],吸取小牛血清1 mL反复冲洗两头剪开的股骨头，获取小鼠骨髓细胞，甲醇固定后，Giemsa染液中染色10～15 min，最后用蒸馏水冲洗，制备晾干。在低倍显微镜下观察骨髓涂片并观察细胞分散状况，在油镜下观察骨髓嗜多染红细胞(PCE)，对微核数进行统计，计算微核率，微核率(0/00)=含微核的细胞数/嗜多染红细胞×1 000 ‰，并观察、统计嗜多染红细胞与成熟红细胞(NCE)的比例，计算PCE/NCE的比值。

1.4.2 肝组织获取及生化指标检测 每只小鼠取0.2 g肝组织，在低温条件下迅速剪碎，加9倍体积的预冷的生理盐水匀浆后离心取上清液，按照试剂盒的说明利用酶标仪检测SOD、GSH和MDA的含量。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 沙棘果油对酒精损伤后微核率的影响

由表1发现，沙棘果油对不同性别小鼠骨髓微核率没有影响。与对照组相比，模型组(饮酒)组微核率显著升高，沙棘果油低、中剂量浓度组的微核率显著高(P< 0.01)；而高剂量沙棘果油组的微核率也升高(P< 0.05)但不显著。与模型组相比，只有高剂量组的微核率显著降低(P<0.01)。不同剂量沙棘果油对微核异常增加呈剂量依赖性降低。提示，高剂量沙棘果油对酒精损伤造成的微核率有所降低。各组之间PCE/NCE无显著差异，提示沙棘果油对小鼠骨髓细胞增殖无不良影响。

表1 沙棘果油对小鼠骨髓细胞微核发生率的影响(x±s，n=10)

注: 与空白对照组比较，△P< 0.05，△△P< 0.01; 与模型组比较，*P< 0.05，**P< 0.01。

2.2 沙棘果油对酒精损伤后鼠肝组织SOD、MDA和GSH水平的影响

沙棘果油对雌雄小鼠的肝组织中的各项指标没有显著性差异(P> 0.01)。小鼠模型组(饮酒)的SOD、GSH显著低于对照组(P< 0.01)，而MDA水平显著低于对照组(P< 0.01)(见表2)。与模型组相比，沙棘果油高、中剂量的SOD和GSH均显著升高(P< 0.01)；而只有沙棘果油高剂量组的MDA显著低于模型组(P< 0.01)。

表2 沙棘果油对小鼠肝组织SOD、MDA和GSH的影响(x±s，n =10)

注: 与空白对照组比较，△P< 0.05，△△P< 0.01; 与模型组比较，*P< 0.05，**P< 0.01。

3 讨论

对连续饮酒的14 d的小鼠观察发现，酒精造成小鼠微核率增加，以及肝脏中的SOD、GSH水平降低和MDA水平的升高，进一步验证了酒精对机体会造成遗传物质的改变[6]以及氧化损伤[8]。实验发现，给予小鼠一段时间沙棘果油后，饮酒小鼠的微核率降低并且与沙棘果油剂量呈正相关，提示，沙棘果油可能能够饮酒造成的DNA损伤有一定的修复。研究发现SOD 是机体中最重要的抗氧化酶,在清除O2-中起关键作用；MDA 是脂质过氧化物的分解产物，它反映了脂质过氧化反应程度的强弱以及机体细胞受自由基攻击的程度；谷胱甘肽(GSH)是一种低分子清除剂[9]。沙棘果油提高了酒精损伤的肝脏SOD、GSH水平和减低了MDA水平。提示，沙棘果油可能是通过减少自由基的在肝脏的积累，通过快速清除多余的自由基等方式，降低了酒精对肝脏损伤，从而起到了保护肝脏的作用，验证了沙棘果油的抗氧化性[10]。但仍需在细胞水平对它的抗氧化性进一步的探讨。

综上所述，沙棘果油在一定剂量能够改善酒精对肝脏的损伤，防治遗传物质的改变。为沙棘果油的用途提供了新的理论依据。