谷树叶不同提取物对高脂血症大鼠血脂及血管内皮细胞Bax和Bcl-2表达的影响

杨 娜 刘丰林

谷树叶是桑科植物构树Broussonetiapapyrifera(L.)Vent.的干燥成熟树叶，又称谷黄叶、酱黄叶、穀树叶等[1]，始载于《名医别录》，列为上品。全国大部分地区有分布，主产于河南、湖北、湖南、山西、甘肃等省[2]。谷树叶味甘，无毒，具有清热解毒、凉血止痒等功效[3]。现代药理学研究表明，谷树叶还具有抗真菌、抑制心房收缩和钙拮抗等作用[4, 5]。本研究在前期研究的基础上，从谷树叶不同提取物调节血脂水平方面来探究谷树叶不同提取物对高脂血症大鼠血脂的影响，以及其对血管内皮细胞Bax和Bcl-2的影响，为深入开发谷树叶的临床应用提供可靠的理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物雄性SD大鼠60只，体质量(200±20) g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号为SCXK(京)2014-0016。在温度为(23±2)℃、湿度为(50±10)%、12 h光照交替的环境中饲养。

1.2 试药与仪器谷树叶药材购自中国药材集团公司，谷树叶水提浸膏、水提醇沉浸膏和醇提浸膏均由本实验室自制；辛伐他汀(华润双鹤利民药业(济南)有限公司，批号151201)；胆固醇(TC)检测试剂盒、三酰甘油(TG)检测试剂盒、高密度脂蛋白(HDL-C)检测试剂盒和低密度脂蛋白(LDL-C)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。其他试剂为国产分析纯。

1.3 模型的建立、分组及给药大鼠正常水食适应性喂养7 d后，60只SD大鼠随机均分为6组，即正常对照组、模型对照组、辛伐他汀(10 mg/kg)组与谷树叶水提组、谷树叶水提醇沉组、谷树叶醇提组，每组10只。除正常组继续给予普通饲料喂养外，其余各组给予高脂饲料喂养，并且按每天0.5 ml/100 g体质量的剂量灌胃给予复合猪油。造模同时，各组分别给予相应药物灌胃，正常对照组和模型对照组给予同体积纯净水，1次/d，连续给药8周。

1.4 TC、TG、HDL-C和LDL-C含量测定分别于给药4周和给药8周后，各组大鼠禁食不禁水12 h，眼眦取血，4 ℃下3000 r/min 离心10 min，分离血清，分别检测大鼠TC、TG、HDL-C和LDL-C的含量[6]。

1.5 Bax、Bcl-2 蛋白表达水平检测采用Western blot 法。将剥取的主动脉约100 mg，提取蛋白，并测蛋白含量。经电泳、转膜、封闭、一抗孵育和二抗孵育，用BIO-RAD GC-800光密度扫描仪对胶片进行扫描并保存[7, 8]。

2 结果

2.1 谷树叶提取物对大鼠TC水平的影响与正常对照组比较，模型组大鼠TC升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，谷树叶各提取物组大鼠TC降低，差异有统计学意义(P<0.05)。谷树叶提取物对模型大鼠TC水平的影响见表1。

表1 谷树叶提取物对大鼠TC的影响 (例，

注：与正常对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

2.2 谷树叶提取物对大鼠TG水平的影响与正常对照组比较，模型组大鼠TG升高，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，谷树叶各提取物组大鼠TG呈现降低趋势，但是差异没有统计学意义。谷树叶提取物对模型大鼠TG水平的影响见表2。

表2 谷树叶提取物对大鼠TG的影响 (例，

注：与正常对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

2.3 谷树叶提取物对大鼠HDL-C和LDL-C水平的影响与正常对照组比较，模型组大鼠HDL-C降低，LDL-C水平升高；与模型组比较，谷树叶各提取物组大鼠HDL-C升高，LDL-C水平降低，差异有统计学意义(P<0.05)。谷树叶提取物对模型大鼠HDL-C和LDL-C水平的影响见表3。

表3 谷树叶提取物对大鼠HDL-C和LDL-C的影响 (例，

注：与正常对照组比较，1)P<0.05；与模型组比较，2)P<0.05

2.4 谷树叶提取物对大鼠主动脉Bax、Bcl-2 蛋白表达的影响与空白对照组比较，模型组大鼠的Bax蛋白表达显著上调、Bcl-2蛋白表达显著下调(P< 0.01)。与模型组比较，谷树叶各提取物组的Bax蛋白表达均显著下调、Bcl-2蛋白表达显著上调。见图1。

1.空白对照组；2.模型组；3.辛伐他汀组；4.谷树叶水提组；5.谷树叶水提醇沉组；6.谷树叶醇提组图1 Western blot 检测各组Bax、Bcl-2 的蛋白表达

3 讨论

随着现代医学对谷树叶研究的逐步深入，谷树叶越来越多的化学成分和药理活性被发现。谷树叶中的化学成分主要为香豆素和黄酮类化学成分，具有抗真菌、抗氧化、促进记忆和增强免疫等作用[5]。

高脂血症是指由于脂肪代谢或运转异常使血液中一种或几种脂质浓度超过正常范围，是一种脂质代谢紊乱性疾病。其发病机制复杂，主要分为原发性高脂血症和继发性高脂血症，容易诱发心脑血管疾病，为代谢综合征形成的重要因素之一，也是促进动脉粥样硬化和危及人类健康的冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)的主要危险因素之一[9, 10]。在我国，高脂血症目前已经成为危害公众健康的重要因素，并呈年轻化的趋势。但是，降血脂化学药长期服用毒副作用较大[11]。因此，寻找安全性好、毒性较低的降脂药物已经迫在眉睫，而中医药恰恰符合这种需求，因此研究开发新型降血脂中药制剂是目前的重要任务，且具有重要的意义和广阔的前景。

中药降脂一直是中药研究工作者研究的重点，通过实验筛选，我们发现谷树叶具有明显的降低血脂作用。本研究采用本实验室自制的不同谷树叶提取物(谷树叶水提物、谷树叶水提醇沉物和谷树叶物)探讨其对高脂血症大鼠血脂的影响。研究发现谷树叶3种提取物均可降低TC和LDL-C水平(P<0.05)，升高HDL-C水平(P<0.05)，但对TG的影响不具有显著性差异。其中，谷树叶水提醇沉组的降血脂作用最强。证明谷树叶具有一定的降低血脂的作用。

另外，通过研究发现谷树叶提取物能够通过调节凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达来对抗高脂模型大鼠所致的血管内皮细胞凋亡。Bax 与Bcl-2 调控细胞凋亡2种关键蛋白，二者调控细胞对凋亡的易感性，Bax表达增强则细胞死亡，Bcl-2作用与之相反。谷树叶提取物可以显著上调Bcl-2蛋白的表达，显著下调Bax蛋白表达，以此对抗高脂血症所致的血管内皮氧化损伤。本研究结果对于谷树叶降脂产品的研制开发具有指导意义。