黄缘闭壳龟的人工孵化试验

黄 勇 贺胜利 郭良鑫 毕冠兰 卢 静

1.河南省信阳市水产技术推广站，河南信阳 464031；2.河南省信阳市水产科学研究所，河南信阳 464031

黄缘闭壳龟（Cuora flavomarginata），别名黄缘盒龟，俗称夹板龟、断板龟、金头龟、黄板龟等，主要分布于我国的大别山山区、皖南山区、台湾岛及日本琉球群岛等地，为珍稀濒危动物。由于生态环境的破坏和人类的大量捕捉，其野生资源非常贫乏，因此开展人工孵化是解决黄缘闭壳龟群体恢复和数量增加的有效措施。

1 材料与方法

1.1 人工孵化设备设施和准备

孵化房间面积为28 m2，具有良好的保湿保温效果，内装有空调、排气扇、自动检测温湿度的设备。孵化箱为规格50 cm×50 cm×40 cm的底部及箱壁有通气孔的泡沫箱若干个，孵化基质为直径0.4～0.6 cm的膨化蛭石。房间内另配有温度计、湿度计、淋水器、水桶等生产工具。

在产卵期开始前半个月，将孵化房间彻底清扫并采取全室喷洒二氧化氯的方式进行杀菌消毒，孵化箱用高锰酸钾进行浸泡后曝晒，将孵化基质进行曝晒消毒，最大限度营造无菌环境。

1.2 人工孵化龟卵的来源

亲龟来自2006年信阳本地山区的野生个体，人工饲养至今。龟体质健壮、体型饱满、无病无伤、活泼好动，全部达到性成熟。龟龄为20～30龄，产卵12年以上，其中雌龟68只，平均重量为925 g/只；雄龟26只，平均重量为650 g/只。雄龟与雌龟在每年4月下旬至7月中旬分开饲养，待雌龟结束产卵后合并在一起饲养，雌雄亲龟均自然交配，自然产卵。雌龟从2018年5月14日至7月19日所产龟卵为本次试验材料。

1.3 黄缘闭壳龟亲龟的饲养与管理

于2018年4月28日的晴天上午，将亲龟从越冬池内移到消过毒的饲养池内，雌雄亲龟分开饲养。龟池均建在环境安静、背风向阳的地方，池长12 m，池宽5 m，池高0.6 m，池壁光滑，由水泥和砖块建成，并附有防逃沿。池底平整，由泥土建成，呈缓坡状，坡度10°左右。池内植有乔木和灌木，有常青落叶植被，占池内总面积的2/3。龟池建有龟休息区、产卵场、饮水洗澡区、活动区等不同的功能区，整个养殖区域模拟仿生态的自然环境建设。投喂严格按照“四定”的要求，用浙江产的“海昌”牌金龟料、鲜虾、西红柿、胡萝卜、南瓜和珠海“康益达”牌龟鳖多蛋素等原料按照一定比例配比而成的饵料（1%～3%的日饵率），于每天15:00～17:00放入投饲盘内投喂，1 h左右吃完为宜。每天对饮水洗澡区进行清理，并及时注入新水，保证水质符合渔业养殖用水标准。每天早、中、晚对龟池巡视，观察龟的摄食、交配、产卵等活动，保持良好的生态环境，防止敌害生物的入侵、龟的逃逸，检查龟体有无病伤，及时发现疾病并准确诊断对症下药，认真做好生产日志记录。亲龟从2018年4月28日移出室外饲养至2018年11月15日进入越冬房冬眠，全年室外生产管理共计185 d。

1.4 龟卵的收集及人工孵化

黄缘闭壳龟的最适产卵气温是25～33℃，信阳地区为5月中旬至7月中旬，其中6月为产卵高峰期。在产卵开始前，先将产卵场中25 cm厚的细沙彻底翻动一遍，然后喷洒适量的水，使沙层的含水量保持在7%左右。黄缘闭壳龟通常在傍晚产卵，管理人员应每天傍晚时观察雌龟的产卵情况，确定产卵位置。第2天清晨，在产卵场找到产卵窝后，轻轻扒开卵窝上的沙土，将龟卵小心取出轻放在盛卵器中，放置龟卵时要避免龟卵的滚动、撞击、挤压、阳光直射等。采卵结束后，整理好产卵场，做好产卵记录。黄缘闭壳龟亲龟从5月14日产卵开始至7月19日结束，共产卵89窝，收集龟卵232枚。

孵化前，在每个泡沫箱内装入4 kg蛭石，并按照每千克蛭石淋入0.7 kg纯净水的比例调配好。当龟开始产卵时，每天09:00左右将收集到的龟卵放入孵化箱后，在箱体上用记号笔标注产卵日期、产卵池号、窝数、卵编号等。为了便于观察龟卵的发育情况，2018年采用了半裸露孵化法进行孵化。人工操作时，将受精卵的动物极向上，没有显现受精的卵可随意平放，轻轻覆上基质，使龟卵面的中央部分约1/6裸露在空气中，然后盖上箱盖。在整个孵化过程中，孵化箱不采取任何加温加湿措施，使龟卵在房间中正常孵化直至破壳出苗。

在孵化过程中，不得随意翻动受精卵，否则会造成胚胎死亡。室内空气干燥时，及时向空气中喷洒水雾，使室内的湿度在孵化期内始终保持在75%～95%。每天早、晚各巡视1次，检查湿度、温度、空气流通性、受精卵发育、破壳出苗等情况，及时清除霉变、坏死及未受精的卵，防止蛇、鼠等敌害生物的危害，并做好孵化记录。

1.5 稚龟的收集

受精卵发育到第六胚胎期时，胎体各器官基本发育成形，对于外界刺激开始有反应，即将破壳时，稚龟用喙轻啄蛋壳，啄出小洞再逐渐扩大，经过1～2 d可破壳而出。破壳后，稚龟会迅速钻入蛭石中。第2天取出稚龟，放入20 g/m3的高锰酸钾溶液中浸泡10 min，随后将清洗过的稚龟，按照50只/m2的密度放入消过毒的稚龟饲养箱中进行饲养管理。对于少量卵黄囊吸收不彻底的稚龟，放入无菌器具中，1～3 d后卵黄囊可自行吸收干净。

2 结果与分析

黄缘闭壳龟个体雌龟68只，雄龟26只，产卵期为2018年5月14日至2018年7月18日，孵化从2018年5月14日开始到2018年9月28日结束。孵化期内，孵化室内空气平均湿度为83.6%，空气平均温度为29.1℃，龟卵孵化的有效积温为2 062～2 308（℃·d）。黄缘闭壳龟亲龟产卵及受精孵化情况见表1。

表1 黄缘闭壳龟亲龟产卵及受精孵化情况

3 讨论

3.1 亲龟产卵率分析

本次试验中，68只黄缘闭壳龟雌龟共产卵232枚，每只雌龟年平均产卵3.41枚，年产1～3次，每次1～4枚，说明其自身的产卵量并不是很大，这除了与自身的遗传产卵因子有决定性的关系外，还与亲龟的培育情况、生产管理等其他因子有关。因此，可以从以下几个方面来提高黄缘闭壳龟的产卵量：①养殖场应选在安静、向阳、避风、有良好的水源地、交通便利、用电方便的地方，养殖区域模拟野外仿生态的生存环境；②在人工养殖中，可在饲料配比中加入促进产卵和生长的添加剂，投喂鲜活蚯蚓、青虾、果蔬等，保证食物的多样、营养、均衡，满足其生理需求，提高卵子的数量及质量；③黄缘闭壳龟的卵泡在卵巢中发育不是同步的，卵的大小差别大，卵分1～3次产出。当冬眠结束后，可提升养殖环境的温度，保证其进食良好，快速恢复体质，使龟达到产卵状态，延长产卵期，增加龟产卵频次。

3.2 龟卵受精率分析

本次试验雌龟共产卵232枚，受精卵171枚，受精率为73.71%，受精率较低，有几个方面的原因：一是黄缘闭壳龟自身的背部隆起较高，雄龟在交配时不易和雌龟充分接触，身体常因失去平衡而从雌龟背上滑下，并且雄龟的射精与雌龟的排卵不同步；二是雄龟与雌龟的配比是1∶2.6，雄龟数量过少；三是这批亲龟人工饲养时间较长，已达10年以上，由于环境、饲料等生态因子不尽合理，造成了雄龟精子活力的下降，从而影响了龟卵受精率。综上，我们可采取以下措施来提高受精率：①合理搭配雄龟和雌龟的配比，调整雄雌比例为1∶1左右，提高交配率。同时，保证龟池内个体的稳定性，不要随意引进新龟。②加强雄龟的培育。营造良好的仿生态环境，合理投喂全价饲料，做好疾病的诊治和预防，保证雄龟拥有健壮的体质。③亲龟交配后，将雌龟、雄龟分开饲养，或将性成熟的雌龟与上一年性成熟的未交配的雄龟进行交配。

3.3 人工孵化率分析

本次试验受精卵共171枚，孵化出苗151只，孵化率为88.3%，仍有提高的空间。孵化过程中，出现了弱精蛋发育停止、炸裂蛋、提前破壳、不破壳和受精卵霉变等现象，对孵化率造成了一定的影响。发生这些现象有以下几个原因：一是雄龟的体质不够强壮，精子活力不强，致使卵子出现不受精或弱精现象；二是受精卵在室内自然孵化，较易受外界温度、湿度等因子变化的影响；三是工作人员的生产管理操作不够规范，造成受精卵的受伤、滚动、破损、细菌感染等情况的发生。因此，提高孵化率应从以下几个方面着手：①培育优质的亲龟。通过提供适宜的仿生态环境、营养全面的饲料供给、精细化的管理来保证动物生长生存的福利需求，增强亲龟体质。②龟卵的孵化过程中，温度和湿度是2个关键因素。室内可安装控温加热装置和湿度控制装置，根据龟卵胚胎发育期对温度、湿度的不同要求，人为地加以精准控制，使温度稳定在23～33℃，基质的含水量在60%～80%之间，空气的相对湿度在75%～95%之间，同时保持室内相对通风，这些措施有利于胚胎的正常发育。③做好孵化时的日常管理。每天早晚巡查1次，孵化过程中不要翻动受精卵，保持适宜的温度和湿度，及时清除霉变或坏死的卵，防止蛇、鼠、蚂蚁等敌害生物的危害，并做好日常孵化记录。