包葛颗粒剂对小鼠醒酒防醉及急性酒精性肝损伤保护作用的研究

吴 洁， 田亚丽， 伍宏宇， 张之

(新疆医科大学1药学院； 2临床医学16-4班, 乌鲁木齐 830011)

酒精性肝病(alcoholic 1iver disease，ALD)是由于过量酒精摄入导致的肝脏损害及其一系列病变,初期表现为酒精性脂肪肝，后期可发展为酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌[1]。西药治疗酒精性肝病以对症治疗为主，疗效甚微，不良反应较多[2]，而中药及中成药类解酒药一方面具有疏肝理气、健脾消食、降低转氨酶及加快乙醇代谢的功效，另一方面对酒精造成的肝细胞损伤还具有一定的修复作用，可有效减轻酒精代谢物对脏器的损害[3-4]。包葛颗粒剂由包尔胡特和葛根制成，包尔胡特(RhamnuscatharticaL.)为鼠李科鼠李属植物新疆鼠李的果实，主要生长于新疆伊犁地区[5]。本课题组前期有研究表明[6-7]，包尔胡特提取物对高脂血症大鼠具有降血脂作用，能够增强机体自由基清除能力和抗脂质过氧化能力，从而改善氧化应激反应对肝脏的损伤，保护肝细胞的结构和功能，发挥对急性酒精性肝损伤的治疗作用。葛根(Puerarialobata)为豆科葛属多年生的落叶藤本植物甘葛或野葛藤的干燥根，在我国大部地区均有生长，主产于河南、湖南、浙江、四川等地，具有一定的解酒护肝功效[8-10]。已有研究表明，葛根素可以预防大鼠急性酒精性肝损伤[11]，对肝脏具有保护作用[12]。本研究采用小鼠急性酒精性肝损伤模型，研究包葛颗粒剂对小鼠醉酒的预防作用和对急性酒精性肝损伤的保护作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物取雄性昆明种小鼠40 只，6～8周龄，清洁级，体质量(20±2)g，购买于新疆医科大学动物实验中心。饲养于温度22～25℃、湿度50%～80%环境，自由进食。

1.2 仪器CF-1型匀浆机(北京格瑞德曼仪器设备有限公司)，MULTIFUGE X3R型离心机(乌鲁木齐鹏程达商贸有限公司)，1510型酶标仪(赛默飞世尔上海仪器有限公司)。

1.3 试药包葛颗粒剂自制，水飞蓟宾胶囊(天津天士力圣特制药有限公司，批号：600709125)，丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，ALT，南京建成生物工程研究所，批号：20180630),天冬氨酸氨基转移酶(Aspartate aminotransferase，AST，南京建成生物工程研究所，批号：20180630)；红星二锅头白酒(北京红星二锅头股份有限公司，批号：02-2AQ8-75)。

1.4 分组和给药方法[13]将40只小鼠随机分为包葛颗粒剂低、高剂量组(2.4、4.8 g/kg体质量)，阳性对照组(水飞蓟宾47 mg/kg体质量)，酒精肝损伤模型组(蒸馏水 0.1 mL/10 g体质量)和空白对照组(蒸馏水 0.1 mL/10 g体质量)，每组8只。各组小鼠均灌胃相应药物，给药2 h后，除空白对照组灌胃蒸馏水，其他各组小鼠灌胃白酒(红星二锅头12 mL/kg体质量)，每天1次，连续7 d，制备急性酒精性肝损伤模型。

1.5 观察指标观察各实验组小鼠灌酒后从醉酒至醒酒的状况，分为醉酒潜伏期、醉酒期和醉酒睡眠期。醉酒潜伏期：从灌酒后小鼠出现爬行不稳至睡着的时间，小鼠翻正反射消失(以将小鼠背部朝下轻放在光滑的桌面上，保持背部向下的姿势30 s以上)，翻正反射消失为醉酒期开始，以翻正反射出现为醉酒期结束(醒酒时间)。醉酒期：翻正反射消失和翻正反射出现之间的时间。醉酒睡眠期：从小鼠睡着到睁眼醒来的时间。

1.6 指标测定

1.6.1 小鼠处理及肝指数计算 第7天禁食不禁水，称取体质量，给酒6 h后小鼠麻醉后颈椎脱臼处死，取肝脏，在生理盐水中进行洗涤并用滤纸吸干多余水分，称取肝重，计算肝指数/%=肝质量(g)/体质量(g)×100%。

1.6.2 肝功指标检测 取小鼠肝组织，制成10%肝匀浆，3 000 r/min离心10 min后，取上清液，按试剂盒说明书方法测定小鼠肝组织ALT、AST含量。

1.6.3 肝脏组织病理形态学观察 取小鼠肝脏用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋、切片，HE染色，光学显微镜下观察各组小鼠肝脏病理组织学变化并拍照。

2 结果

2.1 包葛颗粒剂对急性酒精性肝损伤小鼠醉酒指标的影响与酒精肝损伤模型组比较，包葛颗粒剂低、高剂量组小鼠醉酒潜伏期延长，醉酒期和醉酒睡眠期缩短,差异有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组小鼠醉酒睡眠期缩短，差异有统计学意义(P<0.05)，醉酒潜伏期延长，醉酒期缩短，差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性对照组比较，包葛颗粒剂低剂量组小鼠醉酒潜伏期延长，差异有统计学意义(P<0.05)，醉酒睡眠期和醉酒期缩短，差异无统计学意义(P>0.05)；包葛颗粒剂高剂量组小鼠醉酒潜伏期延长，醉酒睡眠期缩短，差异有统计学意义(P<0.05)，醉酒期缩短，差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 各组小鼠醉酒实验结果比较

注：与酒精肝损伤模型组比较，*P<0.05，**P<0.01； 与阳性对照组比较，△P<0.05，△△P< 0.01。

2.2 包葛颗粒剂对急性酒精性肝损伤小鼠体质量、肝重、肝指数的影响与空白对照组比较，酒精肝损伤模型组小鼠体质量降低，肝指数升高，差异有统计学意义(P<0.01)。与酒精肝损伤模型组比较，包葛颗粒剂低、高剂量组小鼠体质量升高，肝指数降低，差异有统计学意义(P<0.05)；阳性对照组小鼠肝指数降低，差异有统计学意义(P<0.01)，体质量差异无统计学意义(P>0.05)。与阳性对照组比较，包葛颗粒剂高剂量组肝指数下降，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 各组小鼠体质量、肝重、肝指数比较

注：与空白对照组比较，#P<0.05，##P<0.01； 与酒精肝损伤模型组比较，*P<0.05，**P<0.01； 与阳性对照组比较，△P<0.05。

2.3 包葛颗粒剂对急性酒精性肝损伤小鼠肝组织ALT、AST水平的影响与空白对照组比较，酒精肝损伤模型组小鼠ALT、AST含量升高，差异有统计学意义(P<0.01)；与酒精肝损伤模型组比较，包葛颗粒剂低、高剂量组ALT、AST含量降低，差异有统计学意义(P<0.01)；阳性对照组ALT、AST含量降低，差异有统计学意义(P<0.01)。与阳性对照组比较，包葛颗粒剂高剂量组ALT含量降低，AST含量降低，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 各组小鼠肝组织ALT、AST水平比较

注：与空白对照组比较，##P<0.01； 与酒精肝损伤模型组比较，**P<0.01； 与阳性对照组比较，△P<0.05，△△P<0.01。

2.4 包葛颗粒剂对急性酒精性肝损伤小鼠肝脏病理组织学的影响空白对照组小鼠肝细胞结构正常；酒精肝损伤模型组小鼠肝组织有明显变化：肝细胞结构紊乱，水肿，脂肪变性明显，胞质疏松不紧密，可见非常多大小不一的脂滴；包葛颗粒剂低剂量组肝组织结构轻度紊乱，有少量小脂滴，包葛颗粒剂高剂量组肝组织结构有一定紊乱，无脂滴出现；阳性对照组肝组织结构紊乱明显，有一定数量脂滴；与阳性对照组比较，包葛颗粒剂低、高剂量组肝组织结构和脂肪病变有一定程度减轻，见图1。

a空白对照组

b酒精肝损伤模型组

c阳性对照组

d 包葛颗粒剂低剂量组

e 包葛颗粒剂高剂量组

图1 各组小鼠肝组织病理形态显微图(× 200倍)

3 讨论

本实验结果表明，包葛颗粒剂预防给药对小鼠具有防醉作用，能够有效延长小鼠醉酒潜伏期时间，缩短醉酒期和睡眠期时间，随着包葛颗粒剂给药浓度的升高，其醒酒功能也相对提高。ALT和AST是存在于肝脏中重要的转氨酶，肝细胞无论损伤还是坏死，都会使这2种转氨酶的活性升高，因此是临床上显示肝脏受损的指标[14-15]。本实验发现酒精肝损伤模型组小鼠肝指数增大，肝组织ALT和AST水平升高，表明小鼠肝细胞严重损伤，而包葛颗粒剂低、高剂量对急性酒精性肝损伤小鼠的肝损伤均有一定改善作用，使ALT、AST水平趋向正常。病理结果显示，酒精肝损伤模型组小鼠肝细胞水肿，脂肪变性明显，包葛颗粒剂低、高剂量组肝细胞肿胀和脂肪变性较酒精肝损伤模型组明显改善。病理切片结果和各实验指标结果一致，表明包葛颗粒剂可以减轻肝细胞损伤，具有保护肝脏功能的作用。与阳性对照组飞蓟宾比较，包葛颗粒剂改善小鼠肝细胞损伤、防醉醒酒作用更优，但包葛颗粒剂对酒精性肝损伤的保护机制仍不清楚，对其药效机制有待进一步研究。