新疆紫草中总萘醌提取方法的比较

杨东方

（山西药科职业学院，山西太原030031）

紫草（Arnebia euchroma）为我国传统常用中药，始载于《神农本草经》[1]，列为中品，多用于湿疹、水火烫伤、麻疹不透等症[2]。临床上常用于治疗皮肤病、慢性肾炎、烧烫伤、静脉炎等[3]。《中国药典》2015 年版规定，紫草为新疆紫草（Arnebia euchroma（Royle）Johnst）或内蒙紫草（Arnebia. guttata Bunge）的干燥根[4]，其中，以新疆紫草质量较优[5]。研究表明，新疆紫草含有多种活性成分，主要包括萘醌类、生物碱、黄酮类、有机酸及多糖等[6-11]；具有广泛的抗病毒作用、抗氧化活性、免疫调节及抗肿瘤活性[12-14]；以紫草素为代表的萘醌类成分为其主要活性成分[15]。

目前，紫草中总萘醌类成分的提取方法有超临界CO2萃取法、超声提取法、溶剂浸提法、减压蒸馏法等。但是各种方法之间的提取效率、有效成分的稳定性等方面存在差异。

为了筛选新疆紫草中总萘醌类化合物较为理想的提取方法，本研究对回流提取法、渗漉提取法、超声提取法进行了比较研究。

1 材料和方法

1.1 仪器

UV-1800 紫外- 可见分光光度仪（日本岛津公司），AY120 电子分析天平（日本岛津公司），HH-S4数显恒温水浴锅（金坛市医疗器械厂），KQ-5200DE型超声波清洗器（昆山舒美超声仪器有限公司）；电热恒温干燥箱、旋转蒸发仪、恒温水浴锅（上海百典仪器有限公司）。

1.2 试剂与药品

供试新疆紫草购自山西省药材公司，并经鉴定为Arnebia euchroma（Royel）Johnst。左旋紫草素对照品购自中国药品生物制品检定所，其余所用试剂均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 新疆紫草粗粉制备 取新疆紫草药材于60 ℃烘箱中干燥至恒质量，粉碎后，过筛（2 mm）备用。

1.3.2 提取方法

1.3.2.1 回流提取法 称取粗粉50.00 g，60 ℃分别加8 倍和6 倍95%乙醇回流2 次，时间分别为2，1 h，合并提取液，回收乙醇至浸膏状，冷冻干燥，得干膏备用。

1.3.2.2 渗漉提取法 称取粗粉50.00 g，加8 倍量95%乙醇浸泡过夜，以1 mL/min 流速进行渗漉，回收乙醇至浸膏状，冷冻干燥，得干膏，备用。

1.3.2.3 超声提取法 称取粗粉50.00 g，分别加8 倍和6 倍95%乙醇超声2 次，每次30 min，合并提取液，回收乙醇至浸膏状，冷冻干燥，得干膏备用。

1.3.3 标准曲线制备 精密称取左旋紫草素对照品2.5 mg，置于50 mL 容量瓶中，无水乙醇溶解定容，即得质量浓度为0.05 mg/mL 的对照品溶液。

分别精密量取对照品液1，2，3，4，5 mL 置于10 mL 容量瓶中，无水乙醇定容。采用紫外- 可见分光光度法，在516 nm 处测定吸光度。

1.3.4 样品含量的测定 精密称量不同提取方法获得的干膏0.05 g，置50 mL 容量瓶中，无水乙醇定容，溶解过滤。量取滤液5 mL，置25 mL 容量瓶中，无水乙醇定容，摇匀，即得样品供试液。精密吸取上述样品供试液1 mL，在线性关系下测定吸光度，并计算出样品中总萘醌的含量。

1.3.5 精密度试验 选择总萘醌类得率最高的方法，同时制取5 份样品溶液，连续测定其吸光度，计算RSD，考量其精密度。

1.3.6 稳定性试验 选择总萘醌类得率最高的方法，精密量取样品溶液1 mL，每隔30 min 重复测定总萘醌含量，连续5 h，计算RSD，考察其不同时间点的稳定性。

2 结果与分析

2.1 标准曲线制备

以吸光度（A）为纵坐标，左旋紫草素对照品（C）质量浓度（mg/mL）为横坐标进行回归分析，得标准曲线方程为：A＝25.092 4C－0.004 1，r＝0.999 6，在5～25 mg/L 质量浓度范围内，二者的线性关系良好。

2.2 不同提取方法总浸膏得率及总萘醌含量比较

由表1 可知，在3 种方法中，总萘醌含量从大到小依次为超声提取法、回流提取法、渗漉提取法。

表1 不同提取方法总浸膏得率及总萘醌含量测定结果%

2.3 精密度试验分析

采用超声提取法提取5 份样品溶液，以吸光度计算，RSD 为2.61%，说明精密度良好。

2.4 稳定性试验分析

采用超声提取法，每隔30 min 连续5 h 重复测定总萘醌含量，其RSD 为1.86%，说明提取液在5 h内稳定性良好。

3 结论与讨论

紫草中总萘醌类成分脂溶性强，易溶于石油醚、氯仿等有机溶剂，可溶于乙醇，微溶于水[16]。在测试过程发现，回流提取法在提取过程中，有效成分损失较大。这与萘醌类成分不稳定，对光、热等敏感，其稳定性受温度影响较大有关[17]。

渗漉提取法的总浸膏得率最高，超声提取法的总萘醌含量最高。采用渗漉提取法，虽然总萘醌类成分不是最高，但总浸膏得率较高。综合比较，渗漉法作为紫草中总萘醌类成分初始提取方法，可以有效节约能源，且具有设备要求低、操作简便等优点，较适用于工业化量产。

相对于传统的提取方法，超声提取法获得的总萘醌类成分含量最高，研究表明，超声波法无需加热、加压，可以缩短提取时间，降低成本，提高生产效率，但对设备要求较高[18]。目前，虽然渗漉提取法在工业化中使用较为普遍，但由于超声提取法在减少有机溶剂使用、降低环境污染等方面的优势，决定其在未来工业化方面具有广阔的应用前景。因此，超声法提取紫草有效成分的工艺条件值得进一步研究。