黄芩素在大鼠体内对氟苯尼考药动学的影响研究

李旭廷，李思聪，王红宁，李金良，王斌，杨锐

（1.四川大学生命科学学院，生物资源与生态环境教育部重点实验室，四川 成都 610064；2.四川省畜牧科学研究院，动物遗传育种四川省重点实验室，四川 成都 610066）

在当前畜牧生产中，用中兽药与化药联合防治畜禽疾病已经成为一种普遍现象。尽管中兽药有着天然、低毒、低残留等诸多优点，但有研究表明中兽药可以通过调节机体代谢酶和转运体等方式，改变联用药物的药效学或药动学特征，甚至产生不良反应[1]。因此，中兽药与化药联合使用可能产生的药物互作值得重视和研究。

黄芩是中兽医临床上最常用的药物之一，具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎的功能[2]。黄芩素是黄芩中的主要活性成分，研究显示：黄芩和黄芩素均能作用于药物代谢酶和转运蛋白的调控和表达[3-4]，对一些化学药物如诺氟沙星等的体内代谢产生影响，引起疗效改变[5]。氟苯尼考是兽医常用抗菌药，临床实践中经常与黄芩类中药如双黄连等联合应用来防治畜禽细菌性感染。黄芩及其有效成分黄芩素是否对氟苯尼考的药代动力学产生影响值得研究。本文开展了黄芩素对氟苯尼考在大鼠体内药动学的影响研究，探讨可能发生的药动学相互作用及其机制，为临床安全、合理、有效用药提供参考。

1 材料和方法

1.1 实验动物 12只SD大鼠，每只体重280±25 g。试验前按常规饲养1周，自由饮水和采食，饲料为不含任何抗生素的大鼠专用日粮。大鼠和饲料均由成都达硕实验动物有限公司提供，合格证号：SCXK（川）2013-24。

1.2 实验仪器 赛默飞UltiMate3000高效液相色谱仪；CQ250超声洗涤器；800B台式离心机；WH-3微型旋涡混合仪；MiniSpin plus高速离心机。

1.3 药品与试剂 黄芩素（含量为98.5%，中国药品生物制品检定所，批号：111595-201808）；氟苯尼考对照品（含量为99.1%，中国兽医药品监察所，编号：K0301703）；氯霉素标准品（中国药品生物制品检定所，批号：130555-201704）；氟苯尼考原料药（含量为98.9%，浙江康牧药业有限公司生产，批号：201710163）。

乙腈为色谱纯，乙酸乙酯等其余试剂均为分析纯，水为重蒸馏水。

1.4 分组及给药方法 将12只健康大鼠随机分为单用组和合用组，每组6只。合用组连续7d每天灌服一次黄芩素（50mg/kg），单用组连续7d给予相应体积的生理盐水。两组大鼠禁食12h，于第8d按25mg/kg剂量灌服氟苯尼考（氟苯尼考原粉溶于PEG400，配制成5%溶液），给药后0.083、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、10、12、24 h从眼眶静脉丛采血约0.2 mL，EDTA抗凝，4 000 r/min离心5min，分离血浆，于-20℃冰箱中保存待用。

1.5 样品处理 精确取血浆0.1mL于试管中，加入10 μL氯霉素内标液（500 μg/mL）和400 μL乙酸乙酯，涡动混合2 min，4 000 r/min离心10 min，吸取上层液于另一离心管中，然后再加入乙酸乙酯400 μL重复提取1次，合并两次提取液。在40℃水浴中氮气吹干，残渣加入100μL流动相溶解，涡动混合2min，12000r/min离心10min，将上清液转移至进样瓶，取20μL进样检测。

1.6 标准曲线绘制 取空白血浆80μL，加入20μL氟苯尼考系列标准溶液，配制成50、20、10、5.0、2.5、0.5、0.1、0.05 μg/mL 系列标准血浆样品，按“1.5”项下方法处理样品，以氟苯尼考与氯霉素峰面积的比值（S）对相应氟苯尼考浓度（C）作线性回归，求回归方程和相关系数。结果得出：氟苯尼考在质量浓度0.05～50μg/mL范围内线性关系良好，回归方程为S=0.0735C-0.0142，相关系数R2＝0.9997。标准曲线见图1。

图1 血浆药物浓度标准曲线

1.7 分析方法质量控制 以血浆样品低、中、高（0.1、2.5、20 μg/mL）3个浓度考察氟苯尼考的提取回收率和精密度，每个样品做5个重复，测得方法平均回收率分别为（81.5±3.8）%、（94.2±2.6）%和（87.6±2.7）%，测得日内RSD分别为5.1%、1.6%和2.3%，测得日间RSD分别为6.4%、2.1%和2.4%。按信噪比S/N＝3计算，最低检测限为0.02μg/mL。

1.8 色谱条件色谱柱：Agilen HC-C18（250mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-水（27∶73，V/V）；流速1.0 mL/min；检测波长223 nm；柱温40℃；进样量20μL。

1.9 数据分析处理 用DAS2.0软件以非房室模型分析方法计算药代动力学参数，所有数据以平均数±标准差（）表示；单用组和合用组组间采用SPSS 11.0统计软件对药动学参数进行t检验。

2 结果与分析

2.1 方法专属性 本色谱条件下，氟苯尼考保留时间约13.4 min，氯霉素（内标）保留时间约17.7 min。氟苯尼考与内标分离良好，样品处理过程中未引入干扰性杂质，内源性成分不干扰药物的分离测定（见图2）。本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中的氟苯尼考浓度，重现性好。

图2 血浆中氟苯尼考典型色谱图

2.2 药动学参数 单用组和合用组大鼠均按单剂量（25 mg/kg）给予氟苯尼考后，测定不同时间点的氟苯尼考血药浓度，其血药浓度-时间曲线如图3所示，具体药代动力学数据见表1。

图3 单用组和合用组大鼠体内的氟苯尼考血药浓度-时间曲线（x±s，n＝6）

表1 单用组和合用组大鼠体内的氟苯尼考药动学参数（x±s，n＝6）

联用黄芩素后，氟苯尼考药时曲线下面积 AUC0～24h（32.16±1.74 mg/L·h）极显著高于单用组的22.66±2.69 mg/L·h（P＜0.01），最大血液浓度 Cmax（8.68±0.98 mg/L）显著高于单用组的7.79±0.67 mg/L（P＜0.05），清除速率CLz（0.77±0.04L/h·kg）极显著低于单用组的1.11±0.13L/h·kg（P＜0.01），平均滞留时间MRT0～24h（3.06±0.18 h）显著高于单用组的2.60±0.18h（P＜0.01），组织分布容积 Vz（1.57±0.50 L/kg）显著低于单用组的2.21±0.66L/kg（P＜0.05），达峰时间Tmax两组间无显著差异（P＞0.05）。

3 讨论

中西药相互作用是指中药与西药合用或先后序贯使用时，所引起的药物作用与效应的变化。细胞色素P450酶系和P-糖蛋白介导的药物相互作用，是中西药联用发生药动学相互作用最主要的因素，也是最常见的原因[6]。周常等[7]研究表明，黄芩对异育银鲫肝微粒体CYP1A和CYP3A有抑制作用；田硕等[4]用特异性探针底物法测定大鼠肝微粒体CYP450酶系6种同工酶活性的变化，显示黄芩素对大鼠CYP2C9、CYP2E1和UGT有显著抑制作用。Gao等[3]采用非那西丁作为人肝微粒体CYP1A2的探针，发现黄芩苷和黄芩素能显著增加非那西丁的药时曲线下面积（AUC），抑制CYP1A2。刘娜等[8]研究表明，CYP1A酶是大鼠体内氟苯尼考的主要代谢酶，采用氟伏沙明抑制CYP1A后，氟苯尼考AUC上升了3倍。本次试验采用黄芩素（50mg/kg）连续7 d灌服大鼠后，氟苯尼考AUC0～24h增加了42.0%，Cmax增加了11.5%，提示黄芩素增加了氟苯尼考的吸收；MRT延迟17.7%，CLz值降低31.6%，提示黄芩素延缓了氟苯尼考的消除速率。从作用机制分析，引起氟苯尼考体内代谢动力学改变的原因，可能与长期使用黄芩素抑制了大鼠肝药酶CYP450和葡萄糖醛酸转移酶有关。

4 结论

黄芩素对氟苯尼考在大鼠体内的代谢有一定的影响，可以增加氟苯尼考口服生物利用度。从本次试验药动学角度分析，临床上将氟苯尼考与黄芩类中药合用可能存在改变氟苯尼考药代动力学的可能，兽医临床具体的药效学结果有待进一步确证。