透明质酸钠修护贴敷料的生物学评价

刁立琴 韩婷 高保栓 康莉 付钊 河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院 （河北 石家庄 050061）

内容提要： 目的：评价透明质酸钠修护贴敷料的生物安全性。方法：根据医疗器械生物学评价标准中的细胞毒性，皮肤刺激和迟发型超敏反应试验对三批不同厂家的透明质酸钠修护贴敷料进行安全性评价。结果：三批透明质酸钠修护贴敷料细胞毒性均为1级,均无皮肤刺激反应和迟发型超敏反应。结论：三批透明质酸钠修护贴敷料具有良好的生物安全性。

透明质酸钠（HA）是一种高分子粘多糖，广泛存在于人体皮肤和其他组织中，具有很好的保湿作用。由透明质酸钠加工制得的修护贴敷料，适用于面部激光，光子嫩肤等微创术后的皮肤护理，可以减少色素沉着、减轻瘢痕，促进皮肤损伤的修护。近年来，随着人们对美容养生的要求提高，临床需求增大。作为Ⅱ类医疗器械，根据GB/T的系列标准本文对3批不同厂家的透明质酸钠修护贴敷料进行了细胞毒性、皮肤刺激和超敏反应试验的生物学评价。

1.试验材料与方法

1.1 试验材料

小鼠成纤维细胞L-929（中国科学院上海生命科学院细胞资源中心）；1640培养基（北京Solarbio生物科技有限公司）；胎牛血清（Biological Industries Israel Beit Haemek Ltd）；DMSO（SIGMA-ALDRICH）；新西兰兔（中国食品药品检定研究院，动物编号：20170913NZWT)，体重2.2～2.7kg，普通级；DH豚鼠（中国食品药品检定研究院，动物编号：20170818DHS)，体重300～500g，SPF级；透明质酸钠修护贴敷料，选择不同厂家三批样品分为A、B、C组。

1.2 试验方法

1.2.1 细胞毒性试验（MTT法）

（1）供试液的制备：样品浸提液制备：取A、B、C三批样品，按6cm2/mL的比例加入含10%血清的1640培养基，37°C浸提24h，备用[1]；空白对照液：同批含10%血清的1640培养基；阴性对照液：高密度聚乙烯按0.2g/mL的比例加入含10%血清的1640培养基；阳性对照：5%DMSO的培养液；

（2）试验方法：按照GB/T14233.2-2005规定的MTT试验方法进行[2]，将1×104/mL细胞悬液接种于96孔板，每孔100μL。置5%CO2培养箱中37°C培养24h后，弃去原培养液。加入样品浸提液、空白对照液、阴性对照液和阳性对照液，每孔100μL置5%CO2培养箱中37°C培养72h，然后每孔加入20μL 5g/L的MTT溶液，培养4h后弃去孔内溶液，加入150μL DMSO，振荡10min后，在酶标仪570nm和630nm双波长下测定吸光度（OD值）。按下式计算细胞相对增殖率（RGR）：

注：RGR：相对增殖率，%；A：供试品组（阴性组、阳性组）吸光度；A0：空白对照组吸光度。

按表1进行分级判定。

1.2.2皮肤刺激试验

取体重为2.3kg～2.5kg新西兰兔9只，试验前4h在兔脊柱两侧除去10cm×15cm被毛，作为试验和对照部位，按照GB/T16886.10-2005动物皮肤刺激试验方法操作[3]，将样品（A、B、C）分别裁成2.5cm×2.5cm大小，直接贴敷于试验部位，对照品用0.9%氯化钠注射液的浸湿的无菌纱布块同法操作。封闭固定4h，除去敷贴片后1h、24h、48h、72h记录各接触部位皮肤红斑和水肿反应，按记分标准计算样品的原发性刺激指数（PⅡ）。

1.2.3 迟发型超敏反应试验

取体重为390g～410g豚鼠，于试验前4h剃除动物左上背被毛。每批样品取10只豚鼠作为试验组，另取5只豚鼠作为对照组。按GB/T16886.10-2005中迟发型超敏反应封闭贴敷试验方法进行[3]，三批样品同法操作。

诱导：将样品剪取4cm2的小块共10份，分别贴敷于试验组10只动物的左上背无毛区，另取浸湿0.9%氯化钠注射液的无菌纱布4cm2的小块共5份，分别贴敷于阴性对照组5只豚鼠的左上背无毛区作阴性对照，用绷带包扎固定6h后去除。1周中连续3d重复此步骤，同法操作3周。

激发：最后一次诱导贴敷后14d，将样品剪取4cm2的小块共15份，分别贴在试验组和对照组豚鼠的右上背无毛区，用绷带包扎固定6h，进行激发。

观察：激发后24h剃去右上背毛，用温水清洗并擦干。脱毛后至少2h，按Magnusson和Kligman分级标准对试验部位评分，并在除去激发敷贴片后48h进行再次评分。

2.试验结果

2.1 细胞毒性试验

MTT结果显示，A样品的细胞增殖率（RGR）为：87%；B样品的细胞增殖率（RGR）为：89%；C样品的细胞增殖率（RGR）为：86%，三批样品的毒性反应均为1级，见表2。

表1. 细胞毒性试验反应分级

表2. 细胞毒性试验结果

2.2 皮肤刺激试验

9只动物在整个试验观察期内均没有发现皮肤出现红斑和水肿，结果表明A、B和C三批样品的原发性刺激指数（PⅡ）都为0，说明在本试验条件下，三批样品均未发现皮肤刺激反应。

表3. 迟发型超敏反应试验结果

2.3 迟发型超敏反应试验

动物在去除敷贴24h和48h，观察试验结果表明，样品组和对照组中豚鼠的反应等级均为0，表明A、B、C三批透明质酸钠修护贴敷料均未发现迟发型超敏反应，见表3。

3.讨论

人体随着年龄的增长，皮肤中HA的含量降低，从而导致皮肤水分减少，皮肤粗糙，失去弹性，出现皱纹，外源性HA可以有效补充皮肤内源性HA，从而能防止皮肤老化，起到美容养颜的作用[4,5]。透明质酸钠修护贴敷料通过贴敷，可以在皮肤表面形成以大分子聚合物透明质酸为主的保护膜，小分子的透明质酸能渗入真皮，改善中间代谢，促进皮肤营养吸收，起到良好的保湿和促进组织修复作用。本文根据GB/T医疗器械生物学评价的系列标准对透明质酸钠修护贴敷料进行了细胞毒性，迟发型超敏反应，皮肤刺激试验生物学评价，结果表明三批透明质酸钠修护贴敷料均具有良好的生物安全性。