莫沙必利用于小鼠试验最佳剂量筛选

陈汇鑫 ,侯权书 ,梁文斌 ,吕元龙 ,唐建华

(1.重庆市梁平区畜牧渔业发展中心,重庆荣昌405200 ;2.西南大学动物科学学院,重庆荣昌 402460)

莫沙必利是一种高效选择性5-HT4受体激动剂,目前研究显示,该药物促胃肠动力作用明显且安全性较高[1],在小鼠胃肠道动力比较试验中常作为阳性对照组使用,然而目前在各个试验中的使用剂量不尽相同,而常见的使用剂量有20 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、1.875 mg/kg·bw,本次试验旨在通过常用促胃肠道动力药物试验方法来筛选莫沙必利的最佳使用剂量,为对比研究其他促胃肠动力药物作用大小及今后研发新型促胃肠动力药物后探究其作用大小提供一个可参考的莫沙必利使用剂量。

1 试验材料

1.1 药品 枸橼酸莫沙必利(新络纳,成都康弘药业集团股份有限公司,国药准字H20031110,规格:5 mg×20 片);复方地芬诺酯片(常州康普药业有限公司,国药准字H32022716,规格:2.5 mg 盐酸地芬诺酯/片);阿拉伯树脂粉(成都市科龙化工试剂厂);活性炭粉末(成都市科龙化工试剂厂)。

1.2 动物 清洁级昆明系小鼠(由西南大学动物科学学院实验动物中心提供),体重18～25 g,雌雄各半。

1.3 试剂配制 所有试剂现配现用。枸橼酸莫沙必利混悬液:枸橼酸莫沙必利片碾碎后精密称量,置于容量瓶中,用水稀释后超声10 min,待溶液冷却后用柠檬酸调pH 值至3.0～4.5,配制为相当于2 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw、20 mg/kg·bw 对小鼠进行灌胃,灌胃体积为20 mL/kg·bw;复方地芬诺酯混悬液:复方地芬诺酯片置于容量瓶中,用水稀释后超声10 min,配制为相当于20 mg/kg·bw 对小鼠进行灌胃,灌胃体积为20 mL/kg·bw;活性炭混悬液:将100 g 阿拉伯树脂粉溶于400 mL 蒸馏水,配制25%的透明溶液,添加活性炭25 g 后边搅拌边煮沸3 次,室温后定容到500 mL,4 ℃冷藏,临用前混匀,相当于30 mg/kg·bw 对小鼠进行灌胃。

2 试验分组及方法

2.1 分组

2.1.1 小鼠粪便试验 60 只小鼠随机分为6 组,模型空白组(I),药物空白组(II),试验组分为2 mg/kg·bw 莫沙必利组(III),5 mg/kg·bw 莫沙必利组(IV),10 mg/kg·bw 莫沙必利组(V),20 mg/kg·bw 莫沙必利组(VI)。

2.1.2 小肠推进试验 60 只小鼠随机分为6 组,空白组(A),阳性对照组(B),试验组分为2 mg/kg·bw莫沙必利组(C),5 mg/kg·bw 莫沙必利组(D),10 mg/kg·bw莫沙必利组(E),20 mg/kg·bw 莫沙必利组(F)。

2.2 方法

2.2.1 小鼠粪便试验 60 只小鼠试验前16 h 禁食不禁水,均单笼饲喂,每天定时称量小鼠体重,试验组及药物空白组用复方地芬诺酯混悬液灌胃,空白组给予20 mL/kg·bw 的蒸馏水灌胃,30 min 后各组用活性炭混悬液灌胃,活性炭混悬液灌胃后正常饲喂。记录首粒黑便时间、6 h 排便数及重量。6 h粪便情况记录后用复方地芬诺酯混悬液及蒸馏水进行第2 次灌胃,灌胃后禁食不禁水,并于24 h 后记录排便量及重量。重复以上试验步骤,连续3 d。第4 天试验组灌服不同浓度的莫沙必利混悬液,药物空白组及模型空白组灌服蒸馏水,灌胃30 min 后试验组及药物空白组灌服地芬诺酯混悬液,模型空白组灌服蒸馏水,再间隔30 min 全组灌服活性炭混悬液,此后正常饲喂6 h,并记录首粒黑便时间,6 h排便量及重量,6 h粪便情况记录后进行第2 次灌胃,试验组灌服不同浓度莫沙必利,药物空白组及模型空白组灌服蒸馏水,灌胃30 min 后试验组及药物空白组用复方地芬诺酯混悬液灌胃,模型空白组灌服蒸馏水,灌胃后禁食不禁水,并于24 h 后记录排便量及重量。以上步骤重复2 d。

2.2.2 小肠推进试验 60 只小鼠试验前24 h 禁食不禁水,试验时空白组灌服蒸馏水,阳性对照组灌服20 mg/kg·bw 地芬诺酯混悬液,试验组灌服不同浓度的莫沙必利混悬液。灌胃30 min 后各组灌服活性炭混悬液,灌胃20 min 后剖检。记录小肠全长及墨汁推进长度,计算出墨汁推进率(墨汁推进率=推进长度/小肠全长×100%)。

3 统计学分析

本文所有数据均采用SPSS 公司开发的SPSS 20.0 统计分析软件进行分析处理,计量资料以()表示,采用单因素方差分析,显著水平F=0.05。

4 结果

4.1 粪便试验

4.1.1 建造便秘模型 结果见表1。

4.1.2 不同浓度莫沙必利灌胃 结果见表2。

表1 建造便秘模型小鼠粪便情况

表2 莫沙必利灌胃后小鼠粪便情况

3.3 小肠推进试验 结果见表3。

表3 小肠推进率

4 分析

从以上数据可以看出,2 mg/kg·bw、5 mg/kg·bw、10 mg/kg·bw 莫沙必利对小鼠肠道动力作用明显,均表现为促进作用,而地芬诺酯对肠道动力也有着明显的抑制作用。试验中,20 mg/kg·bw 莫沙必利组无论是粪便试验还是小肠推进试验都表现为对肠道作用不明显,其具体机制暂不明确。2 mg/kg·bw 及5 mg/kg·bw 莫沙必利在粪便试验中与模型空白组相比较,小鼠首粒黑便时间以及排便量均有影响,但其作用效果与10 mg/kg·bw 莫沙必利组相比却不明显,而且在小肠推进试验中与空白组差异均表现为不显著,故这两个剂量不适用于胃肠道动力比较试验。

小肠推进率试验中10 mg/kg·bw 莫沙必利组与空白组比较有显著差异(P<0.05);粪便试验中,10 mg/kg·bw 莫沙必利组与药物空白组相比各项指标差异均为极显著(P<0.01),而且与模型空白组相比较除首粒黑便时间表现出极显著外(P<0.01),其余指标均表现为不显著,说明莫沙必利对肠道动力功能作用良好,同时,此结果与其余剂量组相比都较有着明显优势。

综上所述,小鼠试验用莫沙必利剂量宜选用10 mg/kg·bw。

5 讨论

莫沙必利是日本Dainippon 公司开发的第4 代胃动力药,1998 年12 月在日本上市,该药物是一种高效选择性5-HT4 受体激动剂,通过对肠肌层5-HT4 受体的激活,加速神经末梢对乙酰胆碱的释放,从而促进胃肠道生理机能[2]。在疗效方面,莫沙必利的治疗作用明显优于其他几种促胃肠动力药物[3],且患者出现不良反应以及复发的概率也显著较低[4],其安全性得到广泛认可。

由于大众生活方式的转变,胃肠动力不足已经成为一类常见的消化道功能性疾病,然而由于机体调控方式的多样性,目前对于引起胃肠动力不足的机理还有待进一步研究。而此次试验也为今后机制的进一步研究打下基础。