实时荧光定量PCR检测对结核的诊断价值

陈启斌

（云南省昭通市第一人民医院检验科 云南 昭通 657000）

在我国当前临床中，对结核病患者的早期临床诊断，所主要使用的方法以及病原菌的阳性诊断率存在较大不同。实时荧光定量检验诊断方法，整体操作相对较为简单，且具备较高的灵敏度[1]。由此本次研究回顾性分析本院80例结核病患者，探讨实时荧光定量PCR检测诊断结核病患者临床价值。现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析于2018年1月—12月期间本院收治的80例结核病患者作为本次研究对象，所有患者的年龄均为22～65岁，平均年龄为（45.29±3.24）岁，包括48例男性患者和32例女性患者，所有患者的病程均为0.3个月～8个月，平均病程为（3.5±0.8）个月。所有纳入本次研究的患者均符合结核病的临床诊断标准，且排除存在心脏、肝肾系统类重要器官病症的患者。

1.2 方法

对患者行实时荧光定量检查以及涂片抗酸染色法检查。

实时荧光定量检验方法：首先完成对患者DNA的提取，使用医用试管将患者的痰液标本收集之后，在标本中加入浓度为4%的NaOH，摇晃试管直至均匀放置常温下20min。等待患者的痰液标本产生了相应的液化，将1ml的混合液完成5min的离心处理，之后去除上清液，将离心管内部的沉淀物质取出。之后在其中加入1ml的生理盐水完成5Min的再次离心，将沉淀物取出之后，将其中加入50l的DNA提取液，摇晃均匀置于100℃环境中10min，再次完成5min的离心，放置零下20℃待检测。

其次就是完成PCR检测，通过取出如上等同的患者痰液样品，完成上清液去除之后，添加2l置于PCR反应管内部，完成1min的离心。将其放置于仪器的样品槽内部，处于93℃置于2min，处于55℃以下至45s，然后置于65℃以下1min，来回循环10次。将其放置于仪器的样品槽内部，在93℃以下放置30s至55℃以下45s时间，来回循环30次。完成阴性质控品的阳性定量参考，通过依照FQ-PCR的软件阙值，从中得出呈现对比增长的数值扩增曲线。如果该条曲线的Ct数值在36以下即为阳性，反之如果超出40即为阴性。如果曲线Ct数值处于36～40之间，则完成重复检测之后仍然处于36～40之间，那么判断结果是阴性。

涂片抗酸染色法检查：通过将患者的痰液标本涂片进行收集之后，等待其干燥后固定实施Z-N染色，之后静待染色结果。阴性片标准为：必须浏览300个视野，未检出抗酸杆菌。

1.3 统计学方法

通过使用SPSS18.0软件统计分析，通过使用χ2检验，以样本值的P＜0.05代表存在显著差异，具有统计学意义。

2.结果

通过对患者行涂片抗酸染色法检测，阳性检测共计为33例41.25%，对患者行实时荧光定量检验，阳性检测共计为69例86.25%，实时荧光定量检验诊断方法检验率，相较涂片抗酸染色法检测明显较高（P＜0.05）。并且实时荧光定量PCR检测诊断方法的灵敏度诊断率达到了76例95.00%，而涂片抗酸染色法检测灵敏度则仅为68例85.00%，灵敏度诊断率同样存在显著差异（P＜0.05），见表。

表 患者检测指标对比相较[n（%）]

3.讨论

结核病在当前临床医学中属于一种，由于患者发声结核分枝杆菌所诱发的病症，该病属于传染性疾病，尤为常见的病症就是肺结核病。该病主要的传染途径就是呼吸道感染，通常以唾液、飞沫的传染方式尤为常见。在我国当前主要是依照患者的既往病史、影像学检查以及实验室检查等方法[2-3]，完成对该病的临床综合性判断。实验室的具体检查方法相对较多，可以通过使用痰标本培养、痰液涂片抗酸染色法以及本次研究所使用的实时荧光定量PCR检测诊断方法。而实时荧光定量PCR检测诊断方法，是现如今临床中所新兴的一种诊断方法，具备了较为简单的手术操作特点，同时还能够确保诊断方法的高效性。通常要想完成这一实验过程，往往需要在3h之内就可以全部完成，很大程度的将患者的实验室检查所耗费时间有所减短，提高了整体的诊断效率。

综上所述，结合本次研究结果可知：通过对结核病患者行实时荧光定量检验方法诊断，可以取得显著的诊断率，具备较高的灵敏性和特异度，可以及早为结核病患者的早期治疗提供临床依据，在一定程度上对患者的治疗预后起到直接影响，可以在临床中推广应用。