卵巢癌患者顺铂化疗效果与PURA等位基因的关系

李君 王倩青 张晓兰

(1新乡市中心医院妇科妇瘤科，河南 新乡 453000；2青海大学附属医院肿瘤妇科)

卵巢癌是临床中十分常见的恶性妇科肿瘤，其临床发病率及病死率居高不下，有研究指出我国卵巢癌发病率及死亡率呈明显的逐年增高趋势，对妇女的健康安全造成严重威胁〔1〕。现阶段临床中对卵巢癌患者进行治疗的标准策略为铂类药物联合手术治疗〔2〕。卵巢癌的治疗及诊断技术不断提高，晚期卵巢癌生存率无明显改善〔3〕。PURA是与RNA或DNA具有高度亲和力的蛋白，在肿瘤的发生及发展过程中PURA可与E2F1、pRb等蛋白因子结合并诱发下游信号通路，是重要的潜在抑癌基因〔4〕。此外，有研究结果显示，PURA蛋白在多种化疗药物作用下产生DNA损伤修复〔5〕，但PURA等位基因与卵巢癌顺铂化疗疗效的相关性研究仍鲜有报道，本文分析卵巢癌患者顺铂化疗疗效与PURA等位基因的关系。

1 资料方法

1.1一般资料 选取2010年1月至2018年1月间新乡市中心医院妇产科收治的经病理检查确诊卵巢癌患者作为研究对象，所有患者采用20 mg/m2剂量顺铂(H37021362，齐鲁制药有限公司)进行治疗。依照国际妇产科联盟TNM分期系统〔6〕对患者进行分期，依照巴塞罗那分级系统〔7〕对患者行组织病理学分析。采用QIAGEN提取全血DNA。所有患者对本研究知情，并签署知情同意书。

1.2PURA等位基因分析 通过检索PUBMED数据库分析PURA等位基因(rs142688247)，并采用引物及探针序列，基因上游引物5′-GGGCGCTCAAAAGCGAGTT-3′，下游引物5′-GCCAGAGCGTCACGGAAC-3′，C等位基因探针：5′-VIC-GCATCCGCCAGACGGTCAA-3′，T等位基因探针：5′-FAM-AGCTTGGCCAGAGCGTCAC-3′。采用PCR法检测时选用6 μl体系，其中包括40×无菌水0.125 μl，基因组DNA 1 μl，2× TaqMan 2.5 μl，依照定量PCR法检测，其反应程序为60 s 95℃、15 s 95℃、60 s 60℃，共45个循环，后采用序列检测系统及PCR系统进行检测分析，并向循环中加入非模板，10%样品重复检测做质控。

1.3统计学方法 采用SPSS20.0软件行χ2检验，绘制生存曲线评估患者生存率。

2 结 果

2.1患者临床病理特征 全部患者中治疗后3年内复发41例，治疗后3个月完全缓解148例、部分缓解34例。患者临床病理特征为：年龄(64.32±10.84)岁；有吸烟史者132例；有避孕药服用史82例；有淋巴转移者10例；分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期135例，Ⅲ期42例，Ⅳ期4例。复发者41例，治疗反应：完全缓解148例，部分缓解34例，稳定10例，进展6例，无信息2例。

2.2临床特征与基因型相关性 通过数据库检索分析PURA基等位基因共发现T型和C型，本组研究结果显示T型基因出现频率占31.25%，C型基因出现频率占34.62%，基因型差异与患者病理分期差异无统计学意义(P>0.05)，在治疗反应性上T型基因携带者对药物反应性显著高于C型携带者(P<0.05)，见表1。

表1 临床特征与基因型的相关性〔n(%)〕

2.3PURA基因多态型与患者总生存率 PURA T基因型患者治疗总生存率明显优于PURA C基因型患者(P<0.05)，见图1。

图1 患者生存曲线

3 讨 论

卵巢癌是现阶段临床中较为常见的恶性妇科肿瘤，一般情况下患者多无特异性临床症状，因而常被患者忽视进而导致患者在发现时多以发展至中晚期〔8〕。现阶段临床中多采用手术方案对卵巢癌患者进行治疗，但单独采用手术方案对中晚期患者进行治疗时其手术效果较差，因而导致患者治疗质量较差，术后病死率及复发率居高不下，且对患者生活质量产生严重不良影响〔9〕。一般情况下，卵巢癌患者术后病情恶化或复发时临床中导致患者死亡的主要原因之一。有学者指出，在卵巢癌患者采用手术方案治疗同时联合应用化疗方案可有效弥补手术治疗不足〔10〕。顺铂是现阶段临床中较为常见的化疗药物，其具有较高的临床疗效。但在对卵巢癌患者进行治疗时顺铂类药物仍存在一定缺陷，临床中如何寻找到提高铂类药物细胞毒作用靶点十分迫切。研究结果显示，采用顺铂对卵巢癌患者进行治疗时常引起肿瘤细胞死亡的机制为细胞无法有效修复断裂DNA双链并出现持续性积累〔11〕。

PURA基因微乳染色体5q31区基因包括早期生长反应基因-1及白介素，可编码多种细胞因子。有学者采用荧光原位杂交技术分析结果显示，在骨髓增生异常综合征中可见EGR-1与PURA多种形式移位，并可能导致病情恶化发展至急性髓细胞性白血病〔12〕。PURA蛋白是重要的核基质成分，在非雄激素依赖前列腺细胞中过表达PURA可诱导应激反应通路基因表达，并促进细胞分化调节细胞功能。卵巢上皮细胞病变在卵巢癌发生及发展过程中起到十分重要的作用，在鉴别卵巢癌发生过程中多种人卵巢癌体外模型及卵巢上皮细胞系行全基因组分析，结果表明20%异常表达基因与细胞外成分密切相关〔13〕，且在细胞内肿瘤发生及发展过程中PURA基因起到十分重要的作用。有研究结果显示，肿瘤细胞对顺铂等化疗药物治疗的敏感度与DNA密切相关〔14〕。有研究结果显示，PURA等位基因与多种肿瘤发生及发展密切相关〔15〕。本组研究结果显示，两组病理分型相近T型基因携带者对药物反应性显著高于C型携带者，且T型基因改变与患者生存期密切相关。分析认为，T型基因变异可改善细胞内DNA修复能力，提高化疗药物治疗敏感度，此外T型基因变异对卵巢癌治疗的临床疗效有一定促进作用。此外，PURA T型基因对化疗反应正向作用，加速肿瘤细胞修复损伤能力，提高化疗药物敏感度，改善患者预后质量。此外，PURA T基因型可作为评估顺铂治疗质量的预后因子，但其等位基因功能尚未完全揭示，仍有待后续深入研究。