食用菌提取多糖对酒精性肝损伤改善测试*

董瑞瑞，程传喜，蒋文娟

（1.郑州工业应用技术学院，河南 新郑 451150；2.黄河科技学院，河南 郑州 450000）

肝脏可以担负解毒和分泌等功能。近些年酒精性的肝病死亡率逐渐上升，已经引起了医疗行业的高度重视和深度研究［1-2］。酒精性肝损伤主要指的是在短时间内饮入超出负荷的酒，导致肝脏解毒能力不堪重负引起的肝器官受损。

当前酒精性肝损伤的发病机制相关研究已经取得了很大进展，不过其治疗方案突破不是很大，还无法高效治疗此类病症［3-4］。目前临床上比较常用的酒精性肝损伤治疗方案一般为营养支持、水飞蓟素等。上述方法虽然在一定程度上能够消除酒精带来的氧化应激，但此类治疗方案存在着疗效不确定性强和副作用大等不足［5-6］。

针对上述情况，提出利用食用菌提取多糖对酒精性肝损伤进行改善与治疗。

1 食用菌多糖提取

1.1 仪器和试剂

多糖提取仪器：旋转式的蒸发仪器；电子天平和红外光谱仪。

多糖提取试剂：蒽酮、纯度为95%的乙醇、浓硫酸、葡萄糖和石油醚、乙醚及三氯乙酸。在实验过程中所用水为蒸馏水。

实验用到的食用菌为姬菇Hypsizigus marmoueus（Peck）Bigelw。

标准的葡萄糖溶液调制过程为：精准称取105℃使其干燥一直到恒重，分析纯葡萄糖的对照品110 mg，加入少量水将其溶解，放置到110 mL容量瓶中，以此调制成1 mg·mL-1标准葡萄糖试剂。选取25 mL的1 mg·mL-1标准溶剂，将水放到溶液中定容到500 mL，溶液浓度是50 g·mL-1。

1.2 多糖提取

称风干粉碎食用菌样品并精准到0.000 2 g，经过回流去除脂肪，干燥。

选取脱脂样品干粉形式与蒸馏水以1∶25配比添加二次蒸馏水，将温度设置成90℃，时间设置为3 h，次数设置为3次。利用旋转蒸发仪将合并得到的溶液进行浓缩，浓缩至大约25 mL即可。将其5倍体积大概125 mL 95%乙醇进行沉淀，并密封放24 h。利用砂芯漏斗对沉淀品进行过滤，然后抽干，用10 mL的水复溶，添加3%的三氯乙酸，一直到不再生成白色沉淀，将蛋白质去除，对溶液进行浓缩，添加125 mL乙醇醇析。将所得样品静置过夜，过滤，利用10 mL的乙醇清洗2次，利用10 mL的乙醚清洗1次，得到食用菌多糖样本。

2 食用菌多糖对酒精性肝损伤改善测试

2.1 实验材料

将上述中得到的食用菌多糖样本和雄性实验小白鼠当作主要实验材料，实验鼠为6周龄，体重大约20 g，上下波动2 g。

实验用的主要试剂为：甲硫氨酸、二甲苯、肝素、四乙氧基丙烷、ALT、AST和TG等。

实验主要使用到的器材有：分光光度计、冷冻离心机、酶标仪和超声破碎仪。

2.2 方法

2.2.1 构建酒精性肝损伤模型

将实验鼠喂养3 d，并随机分成对照组和模型组以及多糖组，每组实验鼠为14只。利用蒸馏水和实验样品配制，每天对测试样品灌胃一次，持续30 d。在实验期间给实验鼠提供颗粒饲料，在饮食与饮水方面均不予控制。当实验到31 d时，每组实验鼠禁饮水和吃食12 h之后，模型组用50%的乙醇对实验鼠进行灌胃，构建实验鼠酒精性肝损伤模型，对照组用同体积蒸馏水对实验鼠进行灌胃。将死亡实验鼠去除，各个组选出10只鼠在模型构建12 h之后取眼球并进行采血，将血清分离，并分别测定ALT、AST、TG之后，迅速处死实验鼠。取实验鼠肝脏并设计为石蜡以及超薄的切片做病理检查与细胞超微构造观察，剩余肝脏在-80℃下保存留作备用，以实现抗氧化损伤情况的测定［7-8］。

2.2.2 制备肝匀浆

选取实验鼠肝进行称重，并利用生理盐水将表面的污垢清除干净，剪碎之后加入已预冷的50 mmol·L-1磷酸缓冲液中［9-10］。将处理中的样本放到冰水中超声破碎并制成10%的肝匀浆，用于MDA等指标的测定。

2.2.3 实验状况观测

在实验进行中观察实验鼠毛发光泽程度和精神状态以及死亡等状况并记录。在实验之前称重，实验后每周称实验鼠体重一次并记录，一直到处死实验鼠。

2.2.4 测定指标与实验数据处理

分别对ALT、AST、TG、MDA等进行测定，并通过SPSS17.0对所得数据进行处理及分析。其中，单因素方差利用检验组之间进行两两差异性对比得到。

3 实验结果与分析

3.1 食用菌多糖对实验鼠体重产生的影响

对各个实验组的实验鼠进行处理，持续4周，在4周中按照常规饲养方式喂养。实验结果如表1所示。和对照组相比，多糖组实验鼠的生长以及精神状态与体重方面未存在异常，也没有出现中毒与死亡的情况。一直到第30天多糖组实验鼠平均体重和空白组相比并无明显差异。

表1 食用菌多糖对实验鼠体重产生的影响Tab.1 Effect of polysaccharide on body weight of rats

3.2 食用菌多糖对酒精性肝损伤影响

酒精性肝损伤影响结果见表2。当提供50%乙醇溶液之后，实验鼠先呈现出了兴奋状态，然后行走不稳，四肢难以支撑，0.5 h后醉倒且呼吸比较急促，还存在抽搐的情况，该状态大概持续了1 h。对照组实验鼠的精神状态良好，且食欲旺盛，在12 h之后模型组实验鼠状态普遍比较差，且精神萎靡，毛色光泽性不强，活动也有所减少。对照组和多糖组无变化，但模型组的实验鼠存在死亡迹象，死亡时间大概集中在1 h～2 h。和酒精模型组比较，多糖组实验鼠对酒精性肝损伤有明显的抑制效果，存活率高。实验结果显示，食用菌多糖对酒精性肝损伤具有保护和改善作用。

表2 食用菌多糖对酒精性肝损伤影响Tab.2 Effect of edible fungi on alcoholic liver injury

4 结语

上述研究中，利用提取食用菌多糖将小老鼠当作实验对象，对酒精性肝损伤改善性能进行测试。经实验结果显示，食用菌多糖对于酒精性肝损伤具备良好地改善作用，可显著降低肝损伤程度，以保障肝功能具有相对完整性。通过以上实验与分析，力争为开发护肝药物提供一定依据。