三角帆蚌和马氏珍珠贝软体脂肪酸的分析

杨书婷吴 皓刘 睿孙晶晶韦小翠张 焱程建明∗

（1.南京中医药大学药学院，江苏 南京 210023；2.江苏省海洋药物研究开发中心，江苏 南京 210023）

珍珠贝主要包括三角帆蚌、马氏珍珠贝和褶纹冠蚌，其中三角帆蚌是淡水珍珠中养殖最广品种，马氏珍珠贝又称马氏珠母贝或合浦珠母贝，是目前世界上用于海水珍珠生产的主要贝类，其育珠产量占海水珍珠产量的85% 以上［1］，但每年采集珍珠后其软体得不到充分利用，造成严重的资源浪费［2］。《本草纲目》 记载其 “止渴除热，解酒毒，去眼赤，明目除湿，主妇人劳损下血，除烦解热毒，血崩带下”；《食疗本草》 记载其 “主大热，解酒毒，去眼赤，止渴”，具有很好的药效，所含脂肪酸类成分是主要的能量和营养物质，其中不饱和脂肪酸具有显著的药理活性［3-4］。本实验研究淡水与海水中珍珠贝软体脂肪酸组成，筛选出优势品种，为进一步开发其药用价值提供参考。

1 材料

FA1104 型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；九阳匀浆机（九阳有限公司）；冻干机（美国Labconco 公司）；Milli-Q 超纯水机（美国 Millipore 公司）；KQ-500DE 型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；SB-2100 旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。正己烷（阿拉丁，批号201406）；甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号20170912）；三氟化硼乙醚（南京凯基生物科技发展有限公司）；无水硫酸钠（西陇化工股份有限公司）。

三角帆蚌采于浙江诸暨，贝龄24 个月；马氏珍珠贝采于广西北海，贝龄14 个月，经南京中医药大学刘圣金副教授鉴定为正品。

2 方法

2.1 三角帆蚌与马氏珍珠贝冻干粉制备 取适量软体置于篮中，沥干过夜，清洗干净，匀浆，-20 ℃放置 4 h，转移至-80 ℃过夜后，冷冻干燥后粉碎，过40 目筛，即得淡黄色珍珠贝冻干粉。

2.2 索氏提取 取珍珠贝冻干粉3 g，加入150 mL 正己烷，索氏提取6 h，提取溶液减压回收，三角帆蚌油脂得率为3.5%，马氏珍珠贝油脂得率为6.2%。取适量油脂，分别置于25 mL 试管中，加入10% KOH-CH3OH（80%甲醇）2 mL，在60 ℃水浴中皂化至油珠消失，冷却后加入2 mL三氟化硼乙醚-甲醇（三氟化硼乙醚 ∶甲醇=1 ∶3），60 ℃水浴甲酯化 30 min，冷却，加 4 mL 正己烷，5 000 r／min 离心10 min，取上层，水洗至中性。加无水硫酸钠静置过夜，正己烷稀释 2 倍，过 0.22 μm 微孔滤膜，供试品进GC-MS 分析。

2.3 超声提取 取珍珠贝冻干粉3 g，加入150 mL 正己烷，超声（40 kHz，300 W）提取30 min，提取溶剂减压回收，三角帆蚌油脂得率为 3.1%，马氏珍珠贝油脂得率5.9%。皂化和甲酯化方法同 “2.1”项。

2.4 GC-MS 分析（图1～4）

2.4.1 GC-MS 条件 Agilent HP-5 色谱柱（0.25 mm×30 mm，0.25 μm）；进样口温度 220 ℃；检测器温度250 ℃；载气为高纯度氦气；柱体积流量 1.0 mL／min；进样时间 1 min；溶剂延迟 3 min；柱起始温度 110 ℃，保持5 min，然后以 5 ℃ ／min 升温至 185 ℃ ，再以 5 ℃ ／min 升温至 280 ℃；采用分流进样模式，分流比 10 ∶1；进样 1 μL。

2.4.2 MS 条件 电子轰击（EI）离子源；电子能量70 eV；离子源温度230 ℃；接口温度 220 ℃；选取全程离子碎片扫描模式；质量扫描范围为m／z45～450。

3 结果

三角帆蚌中确定25种脂肪酸，马氏珍珠贝中确定26种脂肪酸。运用面积归一化法得出各脂肪酸的相对含有量，结果见表1。

由表可知，三角帆蚌中含有饱和脂肪酸48.25%，以十六烷酸（26.53%）、十七烷酸（5.12%）、硬脂酸（9.15%）为主；含有不饱和脂肪酸（19.45%），以 9-十八碳烯酸（6.94%）、11-二十碳烯酸（7.05%）为主。马氏珍珠贝中含有饱和脂肪酸 21.92%，以十六烷酸（13.70%）、硬脂酸（4.81%）为主；不饱和脂肪酸55.81% ，以 9，12-十八碳二烯酸（24.60% ）、5，8，11，14，17-二十碳五烯酸（6.41% ）、EPA（6.41% ）、DHA 酸（6.66%）为主。

图1 三角帆蚌索氏提取脂肪酸GC-MS 总离子流图

图2 马氏珍珠贝索氏提取脂肪酸GC-MS 总离子流图

图3 三角帆蚌超声提取脂肪酸GC-MS 总离子流图

图4 马氏珍珠贝中超声提取脂肪酸GC-MS 总离子流图

超声提取2种珍珠贝软体中脂肪酸类成分，三角帆蚌中确定24种脂肪酸，马氏珍珠贝中确定21种脂肪酸。运用面积归一化法得出各脂肪酸的相对含有量，结果见表2。

由表可知，三角帆蚌中含有饱和脂肪酸40.53%，以十六烷酸（23.65%）、十七烷酸（4.12%）、硬脂酸（7.50%）为主；含有不饱和脂肪酸（23.34%），以 9-十八碳烯酸（7.32%）、13-二十碳烯酸（7.52%）为主。马氏珍珠贝中含有饱和脂肪酸 29.45%，以十六烷酸（20.11%）、硬脂酸（5.73%）为主；不饱和脂肪酸46.08% ，以9，12-十八碳二烯酸（20.10% ）、5，8，11，14，17-二十碳五烯酸（5.86% ）、EPA（6.41% ）、DHA 酸（3.65%）为主。

4 讨论

三角帆蚌和马氏珍珠贝是淡水与海水养殖珍珠主要品种，马氏珍珠贝占海水珍珠产量的85%以上。但是贝肉没有得到充分应用，造成资源浪费。对废弃的珍珠贝软体脂肪酸成分研究，为珍珠贝软体综合开发利用提供参考。

脂肪酸主要包括饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸，不饱和脂肪酸在营养学和医药方面具有很好的药理作用［5］。花生四烯酸、EPA 和DHA 等多不饱和脂肪酸可以提高人体免疫力［6］。自然界中大豆油等植物油中含有较多的花生四烯酸，鲑鱼和金枪鱼等海洋鱼类动物中也含有较多的长链不饱和脂肪酸［7-9］。不饱和脂肪酸除了作为营养品、保健品、健康辅料和食品添加剂外，对生理功能方面也有作用，尤其对神经系统、视觉系统、智力发育和心血管病方面有很好的作用［10-11］。

目前，没有统一的标准和方法对生物体中的脂肪酸进行提取和分析［12］。文章采用传统的索氏提取和现代化的超声提取2种方法进行比较。结果显示，索氏提取与超声提取整体差异不大。由于索氏提取时间久，对脂肪酸类成分提取更加完全，但操作繁琐，提取时间久。并且，与超声提取差异不大。因此，采用更加高效的超声提取。

对三角帆蚌和马氏珍珠贝中脂肪酸进行分析，可以看出马氏珍珠贝中脂肪酸含有量高于三角帆蚌，EPA、DHA含有量显著高于三角帆蚌。因此，马氏珍珠贝软体可以作为提取EPA、DHA 的原料。EPA、DHA 具有促进视网膜形成、抑制血小板聚集、抑制肿瘤生长等作用［13］。三角帆蚌中硬脂酸含有量较高，且硬脂酸是重要的化工原料［14-15］。因此，三角帆蚌和马氏珍珠贝软体中脂肪酸均有研发价值。

表1 三角帆蚌和马氏珍珠贝脂肪酸成分