除湿健脾汤对高血脂大鼠血脂的调节作用

庄俊嵘，蒋霜洁，程 佳，王 飞∗

（1.上海中医药大学附属曙光医院，上海 201203；2.复旦大学附属中山医院，上海 200032）

根据中医理论，可将人体体质分为9种基本类型，即正常体质、阴虚体质、阳虚体质、痰湿体质、湿热体质、气虚体质、瘀血体质、气郁体质、特禀体质［1］。痰湿证是指因脾胃阳虚导致身体运化水湿、津液输布能力失常，因此水湿停聚而导致湿浊内停，或因外感湿痰失治、滞留不去，临床表现为以咳嗽痰多、胸部发闷为主症的证候，是导致大多数人群亚健康状态的主要原因，多发于肥胖之人，本虚而标实，其中气虚阳虚为本，多痰多湿为标［2］，而水液停留在体内是衍生多种疾病的危险因素，如高血脂、糖尿病、心脑血管疾病等。随着现代饮食结构和生活习惯改变，高血脂发病率逐年升高，是指由于体内脂肪代谢或运转异常致使血浆中一种或多种脂质，主要指总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）高于正常的疾病，也是诱发动脉粥样硬化、冠心病等心脑血管疾病的重要危险因素，对人们身体健康和生活质量产生了严重影响。

目前，临床上预防和治疗高血脂的药物主要是他汀类、贝特类，虽然治疗效果较好，但也不可避免地存在肝肾损、肌肉损害等副作用，故开发疗效好、副作用低的药物具有重要意义［3］，而中医药具有标本兼治、毒副作用低等优点，故采用中药治疗高血脂症也成为人们关注和研究的热点。课题组前期研究发现，除湿健脾汤对脾虚痰湿所引起的亚健康状态具有良好的预防和治疗作用，故本实验利用现代药理学技术对除湿健脾汤治疗高脂血大鼠的作用及其作制进行研究，为相关药物开发及临床应用提供基础。

1 材料

1.1 动物 SD 雄性大鼠，体质量180～200 g，购自北京华阜康公司，许可证号 SCXK（京）2014-0004。入室后维持饲料喂养，自由饮水，适应环境1 周。

1.2 仪器 低速离心机（Pico 17，美国赛默飞世尔科技公司）；酶标分析仪（ELX808，美国 Bio-Tek 公司）；CP114电子天平（美国奥豪斯公司）；VORTEX-5 旋涡混合器（江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司）；HWS-24 电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；Scientz-ⅡD 超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。

1.3 试剂 高脂饲料（H10060）、维持饲料（1022）均购自北京华阜康公司；辛伐他丁片（商品名舒降之，规格20 mg，批号 120987，杭州默沙东制药有限公司）。TC 试剂盒（批号 20160312）、TG 试剂盒（批号 20160420）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）试剂盒（批号 20160517）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）试剂盒（批号 20160311）、丙二醛（MDA）试剂盒（批号20161115）、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号20161126）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒（批号20161101）均购自南京建成生物工程研究所。除湿健脾汤提取物为棕色粉末，3.85 g 生药／g提取物，批号 20160210，自制。

2 方法

2.1 提取物制备与质量控制 除湿健脾汤组成为白术5 g、苍术 3 g、白茯苓 3 g、白芍 3 g、当归 2 g、厚朴 2 g、陈皮2 g、猪苓1.5 g、泽泻1.5 g、柴胡 2 g、升麻2 g、防风2 g、甘草1 g，按100 倍量配比称取各药味，加10 倍量水回流提取 2 次，1.5 h／次，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩，70 ℃下减压干燥，得干膏 780 g，即得。再对提取物中白术［4］、茯苓［5］主要活性成分进行质量控制，测得白术内酯Ⅱ、茯苓酸、去氢乙酰茯苓酸含有量分别为0.12、0.15、0.06 mg／g。

2.2 分组 每只大鼠采尾血，分离血清，测定血脂水平，根据该指标将大鼠随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组及除湿健脾汤低、中、高剂量组，每组10 只。

2.3 建模 空白对照组大鼠给予维持饲料，模型组、除湿健脾汤组大鼠给予高脂饲料，均自由饮水。4 周后尾静脉取血，测定血清TC、TG 水平，若给予高脂饲料组的大鼠血脂水平显著高于空白对照组，表明造模成功。再连续灌胃给药8 周，除湿健脾汤提取物低、中、高剂量组给药量分别为 1.5、4.5、13.5 g／kg，阳性对照组给予 20 mg／kg 辛伐他汀，空白对照组、模型组给予等剂量生理盐水，给药体积均为10 mL／kg。给药过程中除空白对照组大鼠给予维持饲料外，其他各组继续给予高脂饲料喂养。

2.4 血液指标检测 末次给药后大鼠禁食不禁水12 h，眼内眦后静脉丛取血，分离血清，按照试剂盒说明书操作步骤检测血清 TC、TG、HDL-C 和 LDL-C 水平。

2.5 肝指数、抗氧化指标检测 大鼠取血后脱颈处死，迅速取出肝脏，生理盐水洗净并用滤纸擦干，称定质量，计算肝指数，公式为肝指数=肝脏湿重／体质量×100%。取适量肝组织，加入9 倍体积冰冷生理盐水，组织匀浆，根据试剂盒说明书操作步骤检测匀浆液中SOD、GSH-Px 活性及MDA 水平。

2.6 统计学分析 通过SPSS 20.0 软件进行处理，结果以（）表示，组间比较采用单因素方差分析。P＜0.05 表示具有显著差异。

3 结果

3.1 除湿健脾汤对大鼠体质量、肝指数的影响 整个实验过程中各组大鼠体质量均有增长，并在正常范围内。表1显示，实验结束时模型组大鼠体质量略高，但各组之间无显著差异（P＞0.05）；与空白对照组比较，模型组大鼠肝指数显著升高（P＜0.01），除湿健脾汤中、高剂量组及辛伐他汀组该指标显著降低（P＜0.05）。

表1 除湿健脾汤对大鼠体质量、肝指数的影响（，n=10）

表1 除湿健脾汤对大鼠体质量、肝指数的影响（，n=10）

注：与空白对照组比较，∗∗P＜0.01；与模型组比较，# P＜0.05

组别 体质量／g 肝指数／%空白对照组 409.85±12.42 5.33±1.09模型组 423.63±10.63 11.01±3.22∗∗辛伐他汀组 401.34±14.52 8.54±2.69#除湿健脾汤低剂量组 412.46±13.32 9.33±2.43除湿健脾汤中剂量组 388.45±11.56 8.87±3.21#除湿健脾汤高剂量组 372.58±12.32 8.12±3.08#

表2 除湿健脾汤对大鼠血液指标的影响（mmol／L，， n=10）

表2 除湿健脾汤对大鼠血液指标的影响（mmol／L，， n=10）

注：与空白对照组比较，∗∗P＜0.01；与相同周次的模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 时间点／周 TC TG LDL-C HDL-C空白对照组 0 1.69±0.22 0.78±0.18 0.33±0.22 1.32±0.28 1.69±0.21 0.77±0.17 0.34±0.28 1.34±0.24 12 1.68±0.20 0.78±0.22 0.34±0.20 1.33±0.32模型组 0 1.69±0.18 0.81±0.33 0.34±0.23 1.33±0.29 4 9.32±2.11∗∗ 1.18±0.20∗∗ 7.16±2.18∗∗ 0.84±0.15∗∗12 10.14±2.16∗∗ 1.31±0.34∗∗ 9.45±1.66∗∗ 0.88±0.26∗∗辛伐他汀组 0 1.63±0.16 0.79±0.15 0.33±0.78 1.37±0.26 4 9.14±2.61 1.35±0.20# 7.25±1.29 0.88±0.34 12 5.47±1.52## 0.86±0.23## 8.12±2.13 1.41±0.25##除湿健脾汤低剂量组 0 1.69±0.19 0.79±0.22 0.33±0.24 1.32±0.19 4 9.37±2.98 1.18±0.22 7.18±2.22 0.86±0.20 12 6.22±1.76# 0.99±0.15# 8.59±2.43 0.96±0.11#除湿健脾汤中剂量组 0 1.68±0.22 0.76±0.19 0.34±0.28 1.32±0.24 4 9.05±2.66 1.17±0.21 7.17±1.98 0.86±0.14 12 5.84±1.61## 0.83±0.16## 8.01±2.88 1.04±0.15#除湿健脾汤高剂量组 0 1.68±0.26 0.78±0.15 0.39±0.27 1.33±0.25 4 8.77±3.01 1.17±0.18 7.15±1.87 0.87±0.19 12 5.51±1.28## 0.80±0.25## 7.55±3.25 1.22±0.15##4

3.2 除湿健脾汤对大鼠血液指标的影响 表2显示，造模前各组 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平无显著差异（P＞0.05）；高脂饮食造模4 周后与空白对照组比较，其他组TC、TG、LDL-C 水平显著增加（P＜0.01），HDL-C 水平显著降低（P＜0.01）；灌胃给药8 周后与模型组比较，辛伐他汀组、除湿健脾汤组 TC、TG、LDL-C 水平显著，HDL-C水平显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。

3.3 除湿健脾汤对大鼠肝脏抗氧化指标的影响 表3显示，造模前各组MDA 水平及SOD、GSH-Px 活性无显著差异（P＞0.05）；高脂饮食造模4 周后与空白对照组比较，各组 MDA 水平显著增加（P＜0.01），SOD、GSH-Px 活性显著降低（P＜0.01）；灌胃给药8 周后与模型组比较，辛伐他汀组、除湿健脾汤组 MDA 水平显著降低（P＜0.05，P＜0.01），SOD、GSH-Px 活性显著升高（P＜ 0.05，P＜0.01）。

表3 除湿健脾汤对大鼠肝脏抗氧化指标的影响（， n=10）

表3 除湿健脾汤对大鼠肝脏抗氧化指标的影响（， n=10）

注：与空白对照组比较，∗∗P＜0.01；与相同周次模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别 时间点／周 MDA／（nmol·mg prot-1）SOD／（U·mg prot-1）GSH-Px／（U·mg prot-1）空白对照组 0 1.38±0.76 292.74±16.96 510.33±70.56 1.35±0.38 302.22±20.88 511.21±77.56 12 1.32±0.43 304.79±18.36 516.32±71.23模型组 0 1.37±0.64 303.56±17.55 516.54±67.43 4 2.09±0.32∗∗ 253.67±23.78∗∗ 451.23±63.23∗12 2.96±0.65∗∗ 241.88±19.57∗∗ 437.26±55.84∗∗辛伐他汀组 0 1.43±0.41 291.51±18.69 513.47±74.94 4 2.16±0.43 258.16±29.59 456.69±61.47 12 1.66±0.61## 285.83±35.92# 474.15±60.29#除湿健脾汤低剂量组 0 1.39±0.44 304.03±15.56 509.97±78.33 4 2.22±0.27 249.76±26.65 447.56±70.44 12 1.97±0.44## 262.27±22.65# 459.34±67.49除湿健脾汤中剂量组 0 1.37±0.47 298.94±19.06 512.35±74.35 4 2.16±0.25 258.32±26.05 456.34±61.29 12 1.73±0.54## 282.40±38.70# 484.66±58.82#除湿健脾汤高剂量组 0 1.39±0.66 305.29±20.91 507.51±71.28 4 2.11±0.41 251.33±27.63 451.21±66.73 12 1.49±0.25## 292.88±20.78## 499.53±69.35##4

4 讨论

随着人们生活水平提高，一些 “富贵病”的发病率也逐渐增加，成为危害人类身体健康和工作生活的重要因素。其中，高脂血症是一种常见病症，在中老年人中发病率较高，并已呈现年轻化的发展态势，可引起动脉粥样硬化、冠心病、脑血栓、脑出血等，甚至危及生命［6］。

中医认为，“肥甘厚味”的高血脂症可导致脾胃受损，进而引起痰湿证，而高脂饮食是导致肥胖和血脂增高的重要原因，故可利用高脂饮食来建造高血脂动物模型。前期研究认为，高脂饮食喂养的大鼠会出现痰湿特征，并具有肥胖、血脂高的特点，可为该动物模型的应用提供了一定支持［7-8］，而且脾虚、气虚是生痰的根本，故欲化湿降浊则必须益气健脾。

除湿健脾汤是由除湿健脾汤经少许改良而成，出自《万病回春》 卷三，具有健脾除湿之功效，主治久泻、色苍而齿疏、倦怠、食减下坠［9］，在临床应用上具有悠久历史，经国家中医药管理局审核组认定为中华名方（“国家中医药名词术语成果转化与规范推广”项目编号2015GLZX01），方中茯苓、白术为君药，前者归脾肾经，既能补脾虚，又是祛湿圣药，后者归脾胃经，可强脾胃、除湿燥；臣药陈皮和气健脾，祛湿化痰［10］；炙甘草为使，调和诸药，诸药合用，相辅相成，标本兼治，共奏益气健脾、祛湿化浊之功效［11］。现代药理研究发现，黄芪有效成分具有降压和降脂的功效［12］；茯苓醇提取物能有效降低高脂血症小鼠的血脂［13］；白术精提物具有调节高脂大鼠血脂紊乱的作用［14］；薏苡仁水对高血脂模型大鼠具有良好的保护作用［15］，故除湿健脾汤具有健脾补气、降低血脂的作用。血清 TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平是反映体内脂质代谢情况的关键性指标［16］，本实验发现，除湿健脾汤能明显降低高脂饮食引起的肝指数及TC、TG、LDL-C 水平，明显提高HDL-C 水平，减轻肝脏损伤，表明它能有效治疗高脂饮食所引起的脂质代谢紊乱。

高血脂症能引起肝脏中自由基水平增加、抗氧化酶活性降低，导致脂质过氧化损伤［17］，故在高血脂防治过程中不仅要关注对血脂的调节能力，更要加强机体抗氧化的能力［18］。MDA 是脂质过氧化反应产物，可引起细胞损伤，其水平可表明脂质过氧化程度［19］；SOD、GSH-Px 是机体内具有抗氧化活性的物质，可将体内形成的过氧化物转换为毒害较低或无害的物质，有效抑制自由基氧化损伤，进而实现预防因氧化伤害所造成的各种疾病［20］。本研究发现，高血脂大鼠肝脏中 MDA 水平增加，SOD、GSH-Px 活性降低，表明高血脂症可引起脂质过氧化水平增加、清除自由基能力降低；给予除湿健脾汤后，可显著提高肝脏SOD、GSH-Px 活性，降低 MDA 水平，表明该方可能通过抗氧化作用来降低大鼠自由基水平，调节机体脂肪代谢。

综上所述，除湿健脾汤能显著降低高血脂大鼠的体质量、肝指数，改善肝功能，调节体内血脂水平，其机制可能与抗氧化作用有关。