筋骨草超微粉对肉鸡生产性能及血清抗氧化功能、生化指标、免疫指标的影响

林水城，刘云辉，胡可慧，白丁平，黄小红

(福建农林大学中西兽医结合与动物保健福建省高校重点实验室，福建福州350002)

近年来，抗生素作为饲料添加剂在饲料中的应用，很大程度上加速了畜牧业的发展，但也由于长期使用、滥用抗生素，使畜禽机体产生了耐药性，致使畜禽免疫功能受到不同程度的影响，甚至在畜禽体内检测到药物残留，进而导致畜禽产品的安全问题.因此，寻找抗生素替代药物是当下的必然趋势.由于中草药添加剂无污染、无残留及不产生抗药性的优点，深受养殖畜牧业的关注；同时，中草药添加剂有提高畜禽机体免疫能力、促进畜禽生长发育的效果，更是为养殖畜牧业的可持续发展带来新的希望.筋骨草(Ajuga decumbensThunb)别名白毛夏枯草、金疮小草和破血丹等.筋骨草性味苦寒，现代药理研究认为，其具有抗菌、抗病毒和抗炎症的功效[1-2].中草药超微粉粉体粒径可以小至10～25 μm，它拥有一般颗粒所不具备的优点，如良好的药物有效物质溶出度、药效学活性，药物功能性成分起效迅速、完全[3-4]，研究表明，筋骨草可以提高鼠类抗应激能力和抗氧化功能[5-6].目前有关筋骨草超微粉在肉鸡生产中的应用鲜见报道，为此，本试验通过在肉鸡基础日粮中添加筋骨草超微粉，检测试验肉鸡的生产性能及血清的抗氧化功能、生化指标、免疫指标，研究筋骨草超微粉对肉鸡的保健效果，并初步探讨其可能的作用机理，旨在为筋骨草超微粉在家禽生产上的应用提供依据.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材 筋骨草超微粉购自福建中农牧生物药业有限公司.经鉴定，筋骨草为管状花目唇形科筋骨草属多年生草本，其根部膨大，直立，无匍匐茎，有效活性成分乙酰哈巴苷的含量为0.62%.

1.1.2 试验肉鸡 160只1日龄艾维茵白羽肉鸡购自福建圣农集团有限公司.

1.1.3 试剂 总抗氧化能力(total antioxidant capacity，T-AOC)试剂盒、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH-Px)试剂盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)试剂盒和过氧化氢酶(catalase，CAT)试剂盒购自南京建成生物工程研究所；血清甘油三酯、总胆固醇、碱性磷酸酶、尿素氮、总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、钙和磷等试剂盒购自北京利德曼生化股份有限公司；免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及补体C3、C4检测试剂盒购自浙江伊利康生物技术有限公司.

1.1.4 仪器与设备 主要仪器与设备有VIS-7200型可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)、OLYMPUS AU2700型全自动化学免疫分析仪(OLYMPUS公司)、Sk-1快速混匀器(金坛市科析仪器有限公司)和RT-9900半自动生化分析仪(深圳市雷杜生命科学公司).

1.2 试验处理与日粮配方

选取160只1日龄白羽肉鸡随机分为4组(对照组、试验Ⅰ～Ⅲ组)，每组5个重复，每个重复8只鸡.对照组饲喂基础日粮；试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组分别在饲喂的基础日粮中添加500、1 000和2 000 mg·kg-1筋骨草超微粉.基础日粮组成及营养水平见表1，日粮均制成粉状.试验鸡笼养，自由采食与饮水，按肉鸡一般免疫程序免疫.试验在福建省农业科学院动物营养试验场进行，为期42 d，1～21 d为试验前期，22～42 d为试验后期.

1.3 样品的采集及处理

试验第42天时分别从试验Ⅰ～Ⅲ组和对照组每个重复组中随机抽取1只鸡进行采血，采血前空腹12 h，翅下静脉采血，每次每只抽取10 mL全血置离心管中，在4℃、3 500 r·min-1下离心10 min，分离血清，分装于Eppendorf管中，置冰箱(-20℃)中保存，用于血清抗氧化功能、生化指标和免疫指标的测定.

1.4 指标的测定

1.4.1 生产性能的测定 分别于试验第21和42天对每组5个重复鸡进行称重，称重前空腹12 h，测定采食量、平均日增重、日采食量和料重比.

1.4.2 血清抗氧化功能的测定 SOD活性采用羟胺法测定，MDA浓度采用TBA法测定，CAT活性采用可见光法测定，T-AOC和GSH-Px活性采用化学比色法测定.测定仪器为可见分光光度计，具体操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行.

表1 基础日粮组成及营养水平(风干基础)Table 1 Composition and nutrient level of the basal diet(DM basis)

1.4.3 血清生化指标的测定 血清中的甘油三酯、总胆固醇、尿素氮、总蛋白、白蛋白、钙、磷、碱性磷酸酶、谷草转氨酶和谷丙转氨酶等指标均送往福州市空军医院检验科检测，测定仪器为全自动化学免疫分析仪，具体操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行.

1.4.4 血清免疫指标的测定 免疫球蛋白IgA、IgG、IgM及补体C3、C4的含量采用免疫比浊法测定，测定仪器为半自动生化分析仪.

1.5 数据处理

试验数据以平均值±标准差表示，用SPSS 2.0统计软件进行单因素方差分析和LSD多重比较.

2 结果与分析

2.1 筋骨草超微粉对肉鸡生产性能的影响

由表2可知：试验前期(1～21 d)，与对照组相比，试验Ⅰ～Ⅲ组肉鸡的平均日增重有提高的趋势，但差异不显著(P＞0.05)；试验Ⅱ组的料重比显著降低了5.30%(P＜0.05)，其他各组之间则差异不显著(P＞0.05).试验全期(1～42 d)，与对照组相比，试验Ⅰ～Ⅲ组肉鸡的平均日增重、日采食量和料重比均有提高的趋势，但差异均不显著(P＞0.05).

表2 筋骨草超微粉对肉鸡生产性能的影响1)Table 2 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the growth performance of broilers

2.2 筋骨草超微粉对肉鸡血清抗氧化功能的影响

由表3可知：与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组肉鸡血清的T-AOC分别提高了40.27%(P＞0.05)、56.06%(P＜0.05)和25.40(P＞0.05)，SOD 活性分别提高了13.97%(P＜0.01)、17.44%(P＜0.01)和 12.61%(P＜0.01)，GSH-Px活性分别提高了 3.23%(P＞0.05)、4.52%(P＞0.05)和 2.61%(P＞0.05)，CAT 活性分别提高了7.14%(P＞0.05)、12.49%(P＞0.05)和 6.19%(P＞0.05)，MDA 浓度分别降低了 7.14%(P＞0.05)、12.49%(P＞0.05)和6.20%(P＞0.05).

表3 筋骨草超微粉对肉鸡血清抗氧化功能的影响1)Table 3 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum antioxidant capacity of broilers

2.3 筋骨草超微粉对肉鸡血清生化指标的影响

由表4可知：与对照组相比，试验Ⅰ组肉鸡血清的甘油三酯浓度显著降低(P＜0.05)，试验Ⅱ和Ⅲ组极显著降低(P＜0.01)；试验Ⅰ～Ⅲ组的尿素氮浓度极显著降低(P＜0.01)；试验Ⅰ～Ⅲ组的总蛋白含量和磷浓度显著提高(P＜0.05)；试验Ⅰ组的白蛋白含量显著提高(P＜0.05)，试验Ⅱ和Ⅲ组极显著提高(P＜0.01).试验Ⅰ～Ⅲ组的总胆固醇浓度、谷草转氨酶活性、谷丙转氨酶活性、钙浓度与对照组的差异不显著(P＞0.05).

表4 筋骨草超微粉对肉鸡血清生化指标的影响1)Table 4 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum biochemical indexes of broilers

2.4 筋骨草超微粉对血清免疫指标的影响

由表5可知：与对照组相比，试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组肉鸡血清的IgA含量分别提高了28.72%(P＜0.01)、36.01%(P＜0.01)和31.58%(P＜0.01)，IgG 含量分别提高了8.91%(P＞0.05)、12.29%(P＜0.05)和 9.94%(P＞0.05)，IgM 含量分别提高了 12.13%(P＜0.01)、14.61%(P＜0.01)和 13.46%(P＜0.01)，C3含量分别提高了11.95%(P＜0.05)、17.96%(P＜0.05)和 13.12%(P＜0.05)，C4含量分别提高了 29.25%(P＜0.01)、33.97%(P＜0.01)和31.26%(P＜0.01).表明试验各组血清的免疫指标均无显著差异(P＞0.05).

表5 筋骨草对肉鸡血清免疫指标的影响1)Table 5 Effects of A.decumbens ultramicro powder on the serum immune indexes of broiler mg·L-1

3 讨论

3.1 筋骨草超微粉对肉鸡生产性能的影响

大多数中草药添加剂能调节畜禽机体的代谢平衡，促进畜禽生长发育，增加经济效益.何二国等[7]研究表明，黄党散超微粉能提高肉鸡的成活率、平均日增重，降低料重比；施新荣等[8]研究表明，黄芪超微粉能显著提高肉鸡的平均日增重，降低料重比.本试验前期(1～21 d)在饲粮中添加筋骨草超微粉能提高肉鸡的料重比，其中，试验Ⅱ组的料重比显著高于对照组(P＜0.05)，表明筋骨草超微粉能有效促进肉鸡前期的生长发育；在试验全期(1～42 d)，筋骨草超微粉有提高肉鸡平均日增重的趋势，但与对照组的差异不显著(P＞0.05)，对日采食量和料重比也无显著影响(P＞0.05).可见，在日粮中添加1 000 mg·kg-1筋骨草超微粉能有效提高肉鸡前期的料重比.

3.2 筋骨草超微粉对肉鸡血清抗氧化功能的影响

机体在代谢过程中产生的氧自由基会导致生物膜中的多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化作用，形成MDA和氢过氧基等脂质过氧化物，破坏膜结构，最终造成组织细胞的损伤[9-10].动物体内存在一套完整的抗氧化系统(酶类和非酶类清除机制)，其中，酶类系统包括SOD、GSH-Px和CAT等[11]，这些抗氧化物质在清除自由基和防止生物分子损伤等方面起着重要作用[12].T-AOC可反映机体自由基代谢的状况，是整个机体非酶系统抗氧化能力最重要的体现[13].赵香菊等[14]研究表明，添加不同含量的女贞子超微粉能提高肉仔鸡血清中的T-AOC及GSH-Px、SOD的活性，降低MDA浓度；邓文琼等[15]研究表明，穿心莲超微粉可有效提高三黄鸡血清的抗氧化能力.本试验结果显示：在饲粮中添加筋骨草超微粉可提高肉鸡血清的T-AOC及GSH-Px、SOD、CAT的活性，降低MDA浓度，T-AOC显著提高(P＜0.05)，SOD活性极显著提高(P＜0.01).可见，筋骨草超微粉可通过提高肉鸡血清的抗氧化酶活性来增强机体的抗氧化功能.

3.3 筋骨草超微粉对肉鸡血清生化指标的影响

血清中的甘油三酯浓度在一定程度上反映了畜禽体内的脂肪代谢状况，浓度过高则显示脂肪代谢发生障碍.本试验结果显示，在饲粮中添加筋骨草超微粉能降低肉鸡血清中的甘油三酯浓度，表明筋骨草超微粉能促进肉鸡的脂肪代谢，使更多的脂肪氧化，以提供机体蛋白质合成所需的能量，进而促进肉鸡的生长.血清中的总蛋白和白蛋白含量能反映机体蛋白质代谢和免疫功能的强弱.血清中的尿素氮浓度作为畜禽蛋白质代谢和氨基酸平衡的一个衡量指标，直接反映了机体蛋白质和氨基酸代谢水平，其浓度下降表明机体蛋白质合成增加，氮素利用提高及尿素合成降低[16].邓必贤[17]研究表明，在饲粮中添加黄芪超微粉能提高血清中的总蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮浓度.蔡旭斌等[18]研究表明，在饲粮中添加太子参茎叶多糖能提高血清中的总蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮浓度，促进断奶仔猪蛋白质的合成.本试验在饲粮中添加筋骨草超微粉可提高肉鸡血清中的总蛋白和白蛋白含量，降低尿素氮浓度，表明筋骨草超微粉能加速机体蛋白质的合成，促使肉鸡快速生长发育.血清中的钙和磷作为机体最多的，也是必须的矿物质元素，参与机体的能量代谢，钙和磷的浓度反映了机体钙和磷的代谢水平[19].祝国强等[20]研究表明，中草药添加剂能提高肉鸡血清中的无机磷浓度，促进骨骼钙化和生长，促使肉鸡快速生长发育.本试验结果显示，在饲粮中添加筋骨草超微粉可提高肉鸡血清中的磷浓度，表明筋骨草超微粉能加快肉鸡骨盐沉积的速度，刺激骨骼生长，满足肉鸡快速生长的需求.碱性磷酸酶是一种参与消化过程的酶，其活性可反映肝细胞变性和坏死的程度.谷草转氨酶和谷丙转氨酶的活性也是反映肝细胞损伤的主要敏感指标，当肝脏受到损伤时，血液中这两种酶的活性会快速增加[21].本试验结果显示，在饲粮中添加筋骨草超微粉对肉鸡血清中的谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性均无显著影响(P＞0.05)，表明在饲粮中添加筋骨草超微粉不会损伤机体，对肉鸡生长安全无害.

3.4 筋骨草超微粉对肉鸡血清免疫指标的影响

免疫球蛋白主要存在于机体血清之中，是家禽体液免疫系统的重要组成物质，拥有特异性抗体和非特异性抗体.免疫球蛋白IgA、IgM和IgG具有抗菌、抗病毒和抗毒素的功能，是家禽体内重要的免疫球蛋白，保护家禽免受外界有害物质的侵入.范天宝[22]研究表明，在饲粮中添加复方黄芪能有效提高肉鸡的IgA、IgM和IgG含量；王帅兵等[23]将杨树花超微粉添加到肉鸡饲粮中发现，其可以促进雏鸡体内IgA、IgM和IgG的含量.本试验结果与上述前人[22-23]的研究结果相似.本试验在肉鸡的饲粮中添加筋骨草超微粉，可提高肉鸡血清中的IgA、IgM和IgG含量，尤其对IgA和IgG的增加效果更为明显.补体是存在于家禽血液和组织液中的经过活化后产生的具有酶活性的蛋白质，其中，C3和C4作为补体系统重要的组成成分在体液免疫中发挥着至关重要的作用.补体系统经激活后，产生多类生物活性物质，介导一系列生物学效应，发挥机体特异性和非特异性的防御功能，如C3和C4含量的提高，则说明了机体特异性免疫增强.林淑慧[24]研究表明，银杏叶提取物能有效提高肉鸡血清中的C3和C4含量，增强肉鸡的免疫能力；李杰[25]研究表明，在日粮中添加1%酒蒸女贞子能显著提高肉鸡早期血清中的C3和C4含量.本试验结果显示，在饲粮中添加筋骨草超微粉能显著提高肉鸡血清中的C3含量(P＜0.05)，极显著提高C4含量(P＜0.01).此结果与上述前人[24-25]的研究结果一致.

4 结论

在饲粮中添加筋骨草超微粉能改善白羽肉鸡血清的抗氧化功能和生化指标，增强免疫功能，提高肉鸡前期的生产性能.在本试验条件下，筋骨草超微粉在肉鸡饲粮中的适宜添加量为1 000 mg·kg-1.