影响稽留流产胚胎染色体核型的相关因素分析

李艳秋 韩立薇 韦成厚 张碧云 舒小妹 李玉华

[摘要] 目的 分析影响稽留流产胚胎染色体核型的相关因素。方法 回顾性分析2017年1月—2018年6月因稽留流产行清宫术的152例患者的临床资料，根据胚胎染色体核型分成核型异常组（观察组）和核型正常组（对照组），评估两组间患者年龄、受孕方式、体质指数、停经时间、怀孕次数、流产次数等指标的差异，分析各指标与染色体核型之间关系。结果152例患者中胚胎染色体核型异常组83例，核型正常组69例，两组在年龄、停经时间方面比较差异无统计学意义（P>0.05）；核型异常组的体质指数（22.73±2.48）显著低于核型正常组体质指数（22.92±2.26），差异有统计学意义（P<0.05）；而辅助受孕率59.04%（49/83）、多次妊娠率27.71% （23/83）、多次流产率16.87%（14/83）显著高于核型正常组[辅助受孕率39.13%（27/69）、多妊娠率10.14%（7/69）、多次流产率5.80%（4/69）]，差异有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关分析表明：年龄、体质指数、受孕方式与胚胎染色体核型无关（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；怀孕次数和流产次数与胚胎染色体核型密切相关（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，P5=0.000）。结论 孕妇怀孕次数和流产次数会影响胚胎染色体核型，避免不必要的意外妊娠，避免反复流产将有利于预防稽留流产的发生。

[关键词] 稽留流产；染色体核型；胚胎绒毛

[中图分类号] R714.21 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2019）03（c）-0174-03

[Abstract] Objective To analyze the factors related to the chromosome karyotype of missed abortion embryos. Methods The clinical data of 152 cases of uterine curettage due to missed abortion from January 2017 to June 2018 were retrospectively analyzed. According to the karyotype of embryos， the patients were divided into two groups： abnormal karyotype group （observation group） and normal karyotype group （control group）. The age， mode of conception， body mass index， menopause time， number of pregnancies and the number of pregnancies between the two groups were The relationship between the indexes and chromosome karyotypes was analyzed. Results Among 152 patients， 83 were in abnormal karyotype group and 69 were in normal karyotype group. There were no differences in age and menopause time between the two groups （P>0.05）， but there were significant differences in body mass index， mode of pregnancy， number of pregnancies and number of abortions （P<0.05）. Pearson correlation analysis showed that age， body mass index and mode of conception were not related to embryo chromosome karyotype （r1=0.017， P1=0.837； R2=0.040， P2=0.622； R3=0.055， P3=0.499）； the number of pregnancies and abortions were closely related to embryo chromosome karyotype （r4=0.425， P4=0.000； R5=0.368， P5=0.000）. Conclusion The number of pregnancies and abortions of pregnant women can affect the chromosome karyotype of embryos， avoid unnecessary accidental pregnancy， and avoid repeated abortion， which will be conducive to the prevention of missed abortion.

[Key words] Missed abortion； Chromosome karyotype； Embryo villus

稽留流产又称为过期流产，是早期妊娠的常见并发症，发生率可高达15%左右，其病因復杂多样[1]。目前大量研究表明，胚胎染色体核型异常是造成稽留流产的一个重要因素，约有50%的稽留流产由胚胎染色体异常所造成[2]。回顾性分析2017年1月—2018年6月间152例稽留流产患者的资料发现孕妇怀孕次数和流产次数会影响胚胎染色体核型，避免不必要的意外妊娠，避免反复流产将有利于预防稽留流产的发生。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取的152例患者均因稽留流产在该院门诊及住院行清宫术治疗，年龄23～42岁，平均（31.32±4.09）岁；停经时间40～62 d，平均（50.74±4.38）d。所有患者均签署知情同意书，并获得医院伦理委员会批准后将所得胚胎组织送广州金域医学检验中心有限公司行绒毛膜染色体检查。

1.2 检测方法

1.2.1 组织细胞培养[3] 在无菌条件下利用生理盐水清洗所收集的胚胎组织，分离并获得绒毛组织10～15 mg置于离心管中，加入由0.25%胰蛋白酶、0.02%dNasel、0.1%胶原酶所组成的混合消化液，在37℃水浴箱环境下将绒毛组织充分消化。将消化后的混合液于室温下2 000 rpm离心10 min去除上清，收集绒毛细胞均匀接种于培养瓶，加入Cytogenplus培养液，于37℃下5%的CO2培养箱中培养5 d。5 d后利用倒置显微镜关系细胞贴壁情况，当细胞形成小克隆后即可收获细胞进行G显带制片后观察染色体。

1.2.2 染色体核型分析[3] 采用Leica GSL120全自动核型扫描仪观察片下分裂相，计数20个分裂相，选择5个分散良好的分裂相进行进行核型分析。核型诊断标准参照2016年人类细胞遗传学国际命名体系标准（ISCN2016 ）[4]。

1.3 统计方法

所得数据均录入Excel2010数据表，应用SPSS 19.0统计学软件进行统计学分析，计量资料采用均数加减标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料用百分比（%）表示，组间比较采用χ2检验，相关性采用Pearson相关分析法进行分析， P<0.05為差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胚胎染色体核型结果

152例患者中胚胎染色体核型异常83例，主要包括非整倍体、三倍体、嵌合体、四倍体和染色体结构异常；核型正常69例，其中包括多态性2例，各种染色体核型比例见表1。

2.2 核型异常组与核型正常组各指标比较

两组在年龄、停经时间方面比较差异无统计学意义（P>0.05）；而在体质指数、受孕方式、怀孕次数、流产次数等方面比较差异有统计学意义（P<0.05），见表2、3。

2.3 影响胚胎染色体核型的相关因素分析

Pearson相关分析表明：年龄、体质指数、受孕方式与胚胎染色体核型无关（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；怀孕次数和流产次数与胚胎染色体核型密切相关（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，Pe=0.000）。

3 讨论

稽留流产又称为过期流产或者死胎不下，是自然流产中的一类特殊情况，它指在妊娠早期胚胎或胎儿死亡后未能及时自然排出而滞留于宫腔内，表现为先兆流产的临床症状，或者毫无征兆而因定期的B超检查发现，一般发生于妊娠14周之前。目前稽留流产的病因尚不明确，大量的研究表明，稽留流产是一个多因素影响的综合征反应，其病因涉及精神压力、不良习惯、环境污染、内分泌失调、免疫功能异常、母体感染、遗传基因缺陷等方面[5]。该对152例稽留流产的患者研究也发现，她们年龄相对较大，大多数都超过了30岁，平均年龄（31.32±4.09）岁，而平均停经时间则在（50.74±4.38）d，基本没有超过妊娠3个月的孕期。因此，对于高龄孕妇，密切监测妊娠早期的胎儿发育状况有着重要意义。

越来越多的研究表明[6]：在引起稽留流产的众多因素中，遗传基因缺陷因素中胚胎染色体核型的异常是导致稽留流产发生的重要因素。甚至有学者研究发现，胎儿染色体因素导致的稽留流产可高达60%[7]。也有学者认为，不论是何种原因引起稽留流产，最终都会以启动分子生物机制导致胚胎死亡[8]。因此，直接决定胚胎质量的胚胎染色体核型与稽留流产有着密切的关系。黄和明等[9]发现，胚胎染色体异常，尤其是染色体数目的异常是导致孕妇稽留流产的最主要原因。张建林等[10]对226例早期流产的胚胎组织研究发现，胚胎染色体数目异常占异常核型的80.85%，是引起早期自然流产的主要原因之一。杨锴等[11]通过大样本研究发现，在1 389例稽留流产的胚胎组织中，染色体核型异常高达698例（54%），其中三体型就有427例（31%）。我们在研究中也发现，在152例稽留流产患者中，胚胎染色体核型异常就有89例，比例高达58.55%，其中三倍体62例，占异常核型的69.66%。这种由于胚胎形成时或者是早期受精卵卵裂期同源染色体的不分离而造成的染色体增多，以致三倍体或者非整倍体核型的发生，是引起胎儿发育不良，导致稽留流产的重要因素。

Jones等[12]发现人类卵子的非整倍体发生比例平均可达20%，Vialard等[13]发现引起卵子非整倍体发生的机制可能跟卵子老化有关，而Battaglia等[14]深入研究发现，当卵母细胞减数分裂时候纺锤体的异常就可能提示着卵子老化或者是非整倍体发生的可能性。当卵母细胞在减数分裂阶段受到外界因素、毒性物质等综合因素的干扰就会引起同源染色体的黏附和凝聚，从而导致了受精卵染色体数目的异常。我们对胚胎染色体核型异常与核型正常组的患者进行对比研究也发现，在稽留流产患者中，胚胎染色体核型正常组与异常组在年龄、停经时间方面无差异，而在体质指数、受孕方式、怀孕次数、流产次数等方面差异有统计学意义（P<0.05）。通过Pearson相关分析表明：年龄、体质指数、受孕方式与胚胎染色体核型无关（r1=0.017，P1=0.837；r2=0.040，P2=0.622；r3=-0.055，P3=0.499）；怀孕次数和流产次数与胚胎染色体核型密切相关（r4=-0.425，P4=0.000；r5=-0.368，P5=0.000）。因此，建议育龄期妇女避免不必要的意外妊娠，避免反复流产将有利于预防稽留流产的发生。

[参考文献]

[1] Jansen RP.Spontaneous abortion incidence in the treatment of infertility[J].Am J ObstetGynecol， 1982， 143（4）：451-473.

[2] Murphy TF. The moral significance of spontaneous abor tion[J]. J Med Ethics， 1985， 11（2）：79-83.

[3] 中華医学会妇产科学分会产科学组.复发性流产诊治的专家共识[J].中华妇产科杂志，2016，51（1）：3-9.

[4] 谢金芳，黄艳丽，纪霞.4例早期自然流产绒毛组织的改良培养及染色体核型分析[J].中华医学遗传学杂志，2016，33 （5）：721-723.

[5] 曹泽毅.中华妇产科学[M]. 3版.北京：人民卫生出版社，2014.

[6] Munne S， Chen S， Colls P， et al. Maternal age， morphology development and chromosome abnormalities in over 6000cleavage-stage embryos[J]. Reprod Biomed Online，2007， 14（5）：628-634.

[7] 朱正锴.早期自然流产胚胎染色体数目异常的临床分析[J].中国优生与遗传杂志，2017，25 （5）：47-49.

[8] 姚婷，刘国忠，侯海燕，等.早期胚胎停育绒毛组织的蛋白质组学分析[J].国际生殖健康/计划生育杂志，2017，36（3）：251-255.

[9] 黄和明，邢园园，马杰彦，等.稽留流产患者绒毛组织的染色体核型分析[J].中国优生与遗传杂志，2017，25（11）：77-78.

[10] 张建林，张俊荣，杨益梅，等.226例早期自然流产绒毛组织的细胞遗传学分析[J].中国妇幼保健，2018，33（17）：3958-3960.

[11] 杨楷，祝建疆，戚红，等.1389例稽留流产绒毛细胞染色体核型分析[J].中国优生与遗传杂志，2014，22（7）：53-54.

[12] Jones KT. Meiosis in oocytes： predisposition to aneuploidyand its increased incidence with age[J].Hum Reprod Update 2008， 14（2）：143-158.

[13] Vialard F，Boitrelle F，Molina-Gomes D，et al. Predisposi tionto aneuploidy in the oocyte[J].Cytogenet Genome Res. 2011，133（2-4）：127-135.

[14] Battaglia DE， Goodwin P，Klein NA，et al.Influence ofmater nal age on meiotic spindle assembly in oocytes fromnatu rally cycling women[J].Hum Reprod，1996，11（10）：2217-2222.

（收稿日期：2018-12-20）