EB病毒DNA和ABCG2联合检测对鼻咽癌发病和预后的临床意义

吴国谦 谢福权 康喜讯

[摘要] 目的 探討EB病毒DNA、ABCG2（乳腺癌耐药蛋白）联合检测对鼻咽癌发病和预后的临床意义。 方法 方便选取该科2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽肿瘤疾病患者为研究对象，所有患者均在鼻内镜下采集鼻咽组织，送检验科进行EB病毒DNA荧光定量PCR检查，根据检测结果分为正常组41例、EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组6例、鼻咽癌组63例。将鼻咽癌组织送病理科进行ABCG2免疫组化分析，对EB病毒DNA进行原位杂交。将ABCG2阳性癌组织设为A组32例，将ABCG2阴性癌组织设为B组31例，比较两组组织对应患者的疾病复发率和生存率。结果 共采集110例患者的鼻咽组织，正常组、EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组、鼻咽癌组的构成比分别为37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌组EB病毒DNA阳性为100.00%。A组组织对应患者的疾病复发率为31.25%，较B组的6.45%高（P<0.05），生存率为75.00%，较B组的96.77%低，差异有统计学意义（χ2=4.795、4.186，P=0.029、0.041<0.05）。结论EB病毒DNA和ABCG2的阳性表达均为鼻咽癌发病和预后变差的促进因素，两者联合检测可用于鼻咽癌的早期诊断和预后评估。

[关键词] 鼻咽癌；EB病毒DNA；ABCG2；发病；早期诊断；预后评估

[中图分类号] R739.63 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2019）03（c）-0004-03

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of combined detection of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 （breast resistance protein） in the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. Methods 110 patients with nasopharyngeal neoplasms admitted to our department from July 2016 to December 2017 were convenient selected and enrolled. All patients underwent endoscopic nasopharyngeal tissue collection and sent to the laboratory for EBV DNA quantitative PCR. According to the test results， there were 41 cases in the normal group， 6 cases in the EB virus DNA positive non-nasopharynx cancer group and 63 cases in the nasopharyngeal carcinoma group. The nasopharyngeal carcinoma tissues were sent to the pathology department for ABCG2 immunohistochemical analysis， and the Epstein-Barr virus DNA was in situ hybridized. The ABCG2 positive cancer tissues were set to 32 cases in group A， and the ABCG2 negative cancer tissues were set to 31 cases in group B. The disease recurrence rate and survival rate of the corresponding groups were compared. Results The total nasopharyngeal tissues of 110 patients were collected. The composition ratios of normal group， EBV DNA positive non-nasopharynx cancer group and nasopharyngeal carcinoma group were 37.27%， 5.45% and 57.28%， respectively. The EB virus DNA positive in the nasopharyngeal carcinoma group was 100.00%.The recurrence rate of disease in group A was 31.25%， which was higher than group B 6.45% （P<0.05）， and the survival rate was 75.00%， which was lower than group B 96.77%，The difference was statistically significant （χ2=4.795， 4.186， P=0.029， 0.041<0.05）. Conclusion The positive expression of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 are the promising factors for the worsening of the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. The combined detection can be used for the early diagnosis and prognosis evaluation of nasopharyngeal carcinoma.

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma； EB virus DNA； ABCG2； Onset； Early diagnosis； Prognosis evaluation

本课题组前期研究结果已经证实，EB病毒DNA在鼻咽癌组织中的阳性表达率较高，但也有小部分非鼻咽癌患者鼻咽组织中的EB病毒DNA呈阳性表达[1-3]。ABCG2阳性表达与鼻咽癌患者淋巴结转移、临床分期均密切相关。结合已有的上述研究基础，方便选取该院2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽肿瘤疾病患者作为研究对象，以探讨EB病毒DNA和ABCG2联合检测对鼻咽癌发病和预后的临床意义，旨在为鼻咽癌的早期诊断和预后评估提供参考依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治的110例鼻咽肿瘤疾病患者作为研究对象。该组患者中，男59例，女51例，年龄32～70岁，平均年龄（50.19±4.07）岁，其中鼻咽良性肿瘤患者47例，鼻咽癌患者63例。根据EB病毒DNA荧光定量PCR检查结果将110例患者分为正常组41例、EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组6例、鼻咽癌组63例，其中正常组男20例，女21例，年龄30～73岁，平均（50.21±3.97）岁。EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组男4例，女2例，年龄29～70岁，平均（50.17±4.04）岁。鼻咽癌组男35例，女28例，年龄29～72岁，平均（50.19±4.02）岁。3组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05）。将鼻咽癌组织送病理科进行ABCG2免疫组化分析，對EB病毒DNA进行原位杂交。将ABCG2阳性癌组织设为A组32例，将ABCG2阴性癌组织设为B组31例，该研究在通过医院伦理委员会审核、获取研究对象及其家属知情、同意后实施。

1.2 方法

鼻内镜下采集研究对象鼻咽组织，送检验科进行EB病毒DNA荧光定量PCR检查，阴性对照为双蒸水，阳性对照为合成的DNA片段，反应条件：95℃，预变性，10 min；92℃，30 s；72℃，延伸，30 s，共40个循环。EB病毒DNA阳性判定标准[4]：拷贝数≥1×103copy/mL。

根据EB病毒DNA荧光定量PCR检查结果将110例患者分为正常组、EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组、鼻咽癌组。将鼻咽癌组织送病理科进行ABCG2免疫组化分析，主要步骤为：组织脱水，石蜡包埋，连续切为厚度为4 μm的切片，二甲苯及乙醇脱蜡、水化后，枸橼酸缓冲液（pH 6.0）进行抗原热修复，滴加一抗、二抗，DBA显色，苏木精复染，脱水、透明、中性树胶封片，在高倍镜下观察。ABCG2阳性判定标准[5]：高倍镜下随机选取10个视野观察，细胞膜呈黄色或棕黄色、褐色为阳性细胞，阳性细胞比例>10%判定ABCG2为阳性。对EB病毒DNA进行原位杂交。将ABCG2阳性癌组织设为A组，将ABCG2阴性癌组织设为B组，比较两组组织对应患者的疾病复发率和生存率。

1.3 统计方法

研究数据的统计学处理应用SPSS 24.0统计学软件，计数资料采用[n（%）]描述，进行χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 110例鼻咽疾病患者鼻咽组织的EB病毒DNA检出情况

110患者中，正常组（EB病毒DNA阴性非鼻咽癌）共41例，所占比例为37.27%，EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组共6例，所占比例为5.45%，鼻咽癌组共63例，病理组织EB病毒DNA阳性率为100.00%，所占比例为57.28%。

2.2 两组患者随访期间的疾病复发率、生存率比较

鼻咽癌组中，病理组织ABCG2阳性患者共32例，病理组织ABCG2阴性患者共31例，均接受放疗+手术+化疗，术后平均随访时间（8.12±0.96）个月。A组随访期间的疾病复发率较B组高（P<0.05），生存率较B组低（P<0.05），见表1。

3 讨论

鼻咽癌为发生在鼻咽腔侧壁或顶部的恶性肿瘤，具有预后不佳的特点。我国为鼻咽癌的高发国家，且近年来人群的鼻咽癌发病形势仍呈现出不断严峻的趋势[6]。因此，探索能够辅助该疾病早期诊断和预后评估的客观指标具有重要意义[7]。早期提出的肿瘤干细胞学说认为肿瘤组织内有一小群细胞与干细胞具有类似的广泛增殖、自我更新及分化潜能等特性，并能表达于某些正常干细胞相同的标记蛋白[8-9]。现阶段研究发现，肿瘤干细胞的细胞膜上多有ABC转运蛋白表达，其中ABCG2参与异外源性物质新陈代谢的第三阶段，被认为是代谢物排出的“泵”，也是肿瘤干细胞亚群细胞的分选标志，与细胞增殖密切相关[10-11]。

该课题组早期研究结果显示，鼻咽癌组织的ABCG2阳性表达率高达58%，且与鼻咽癌患者淋巴结转移密切相关，EB病毒DNA在鼻咽癌组织中的阳性表达率高达100%。该研究主要探讨EB病毒DNA和ABCG2联合检测对鼻咽癌发病和预后的临床意义。研究内容共分为两部分，第一部分为分析鼻咽疾病患者鼻咽组织的EB病毒DNA检出情况，结果显示小部分非鼻咽癌患者的鼻咽组织中EB病毒DNA也呈阳性表达，正常组、EB病毒DNA阳性非鼻咽癌组、鼻咽癌组的构成比分别为37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌组EB病毒DNA阳性为100.00%，与早期研究结果基本保持一致，表明鼻咽组织EB病毒DNA阳性为鼻咽癌发生的危险因素。第二部分为根据ABCG2免疫组化检测结果对EB病毒DNA阳性鼻咽癌组织进行分组，分为ABCG2阳性（A组）、阴性（B组），比较ABCG2阳性（A组）、阴性（B组）鼻咽癌组织患者的预后情况，分析两者联合检测的作用，结果显示A组组织对应患者的疾病复发率为31.25%，较B组的6.45%高，生存率为75.00%，较B组的96.77%低，差异有统计学意义（P<0.05），表明ABCG2阳性表达可导致鼻咽癌患者预后变差。这与叶倩等人[12]在相关研究中得出，根据ABCG2免疫组化检测结果对EB病毒DNA阳性鼻咽癌组织分组后，ABCG2阳性对应患者的疾病复发率为29.12%，生存率为78.43%，其疾病复发率高于ABCG2阴性，生存率低于ABCG2阴性，与该文所得结论一致，具有临床意义。

综上所述，该研究得出EB病毒DNA和ABCG2的阳性表达均为鼻咽癌发病和预后变差的促进因素，两者联合检测可用于鼻咽癌的早期诊断和预后评估。但由于现阶段国内外尚无较多相关研究报道，且该次研究选取的样本量较小。因此，所得研究结果的客观性还有待日后开展更多实践研究进行检验。

[参考文献]

[1] 李琴，谢琼.EB病毒衣壳抗原抗体、早期抗原抗体、EB病毒DNA检测对鼻咽癌的诊断、预后评估价值[J].临床和实验医学杂志，2017，16（4）：359-363.

[2] 黄若葵，杜日昌，熊奇斌，等.鼻咽癌组织Skp2与ABCG2蛋白表达及其临床意义[J].中华肿瘤防治杂志，2015，22（15）：1184-1188.

[3] 孙洁.肿瘤干细胞标志物CD133、CD117和ABCG2潜在功能性多态与非小细胞肺癌预后的关联研究[D].南京：南京医科大学，2016.

[4] 谢嵘，余磊涛.ABCG2、Hif-2α在乳头状甲状腺癌患者外周血中表达与预后相关性研究[J].当代医学，2017，23（22）：97-98.

[5] 张倩，孙秀锦，宋丹.血浆EB病毒DNA定量监测在局部晚期鼻咽癌治疗及随访中的临床意义[J].临床肿瘤学杂志，2014，19（11）：1000-1003.

[6] 李勤琴，唱凱，邓少丽，等.全血中EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌患者预后中的临床意义[J].国际检验医学杂志，2017， 38（8）：1109-1111.

[7] 翁敬锦，司勇锋，邓卓霞，等.鼻咽癌复发患者EB病毒DNA及抗体的表达情况及其临床意义[J].广西医学，2016， 38（10）：1355-1358.

[8] 冯燕纯，陈杰荣，郭允苗.鼻咽癌患者组织样本中EB病毒DNA拷贝数与患者预后的相关性研究[J].热带医学杂志，2017，17（6）：693-696.

[9] 刘艳石，刘璐.EB病毒抗体及其DNA在鼻咽癌复发患者血清中的表达水平及其临床意义[J].中国医学前沿杂志：电子版，2017，9（12）：115-119.

[10] 孙琦，邓展锋，史顺畅，等.鼻咽癌患者血浆EBV DNA和VCA-IgA联合检测及临床意义[J].医学信息，2016，29（30）：118-119.

[11] 万世恒，康喜讯，陈静华，等.外周血和鼻咽组织EB病毒DNA检测对鼻咽癌诊断和防控的临床观察[J].中国肿瘤临床与康复，2015（6）：666-668.

[12] 叶倩，李筱莉，陈岩松，等.联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值[J].现代肿瘤医学，2016，24（19）：3045-3048.

（收稿日期：2019-01-03）