重型血友病A患儿关节出血后IL—1β、IL—6、TNF—α释放与关节病变形成的相关性研究

周娟

[摘要] 目的 探讨重型血友病A患儿关节出血后IL-1β、IL-6、TNF-α释放与关节病变形成的相关性。方法 方便选取该院（2015年1月—2017年1月）收治的重型血友病A患儿60例，无关节出血组（n=20），关节出血组（n=36），急性关节出血组（n=20），慢性关节出血组（n=15），应用酶联免疫吸附实验测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。 结果 急性关节出血组关节病变患者细胞內TNF-α信使核糖核酸表达水平（6.695±2.523）ng/L，明显高于无关节病变患者（1.791±1.479）ng/L，差异有统计学意义（t=4.934 6，P<0.05）；急性关节出血组关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平分别为（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；无关节病变者分别为（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性关节出血组关节病变与无关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平对比差异无统计学意义（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。结论 重型血友病A患儿急性关节出血TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高，以TNF-α表达水平最高，且伴关节病变患儿TNF-α水平也明显升高，因此关节病变形成的关键因子为TNF-α。

[关键词] 重型血友病A；急性关节出血；TNF-α；IL-6；IL-1β；关节病变

[中图分类号] R4 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2019）03（a）-0013-03

[Abstract] Objective To investigate the relationship between the release of IL-1β， IL-6 and TNF-α and the formation of joint lesions in children with severe hemophilia A. Methods 60 patients with severe hemophilia A admitted to our hospital （January 2015 to January 2017）， no joint bleeding group （n=20）， joint bleeding group （n=36）， acute joint bleeding group were selected （n=20）， chronic joint bleeding group （n=15）， serum TNF-α， IL-6， IL-1β levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Results The expression level of TNF-α messenger ribonucleic acid in patients with acute joint hemorrhage was （6.695±2.523）ng/L， which was significantly higher than that of patients without joint disease （1.791±1.479）ng/L. The difference was statistically significant （t=4.934 6， P<0.05）； acute joint expression levels of IL-6 and IL-1β messenger RNA in the joints of the hemorrhagic group were （0.912±0.525）ng/L and （1.879±1.542）ng/L， respectively. The patients without joint lesions were （1.263±0.647）ng/L and （0.971 8±0.517）ng/L， respectively. There was no significant difference in the expression levels of IL-6 and IL-1β messenger RNA in articular lesions （t=1.336 2， 1.592 9， P>0.05）. Conclusion The levels of TNF-α， IL-6 and IL-1β in patients with severe hemophilia A are significantly increased， and the expression level of TNF-α is the highest， and the level of TNF-α is also significantly increased in children with joint disease. Therefore， the key factor for the formation of joint lesions is TNF-α.

[Key words] Severe hemophilia A； Acute joint bleeding； TNF-α； IL-6； IL-1β； Joint disease

血友病A为一种先天性出血性疾病，主要原因为缺乏凝血因子Ⅷ，统计显示，每年发病率为0.02%[1]。虽然随着医学技术的发展，血友病的治疗效果有了极大的提高，但血友病关节出血后第一合并症关节病变并没有得到有效的预防和治疗，导致患者出现炎症甚至残疾[2]。虽然世界血友病联盟推荐预防治疗，但该预防治疗也仅能降低出血时间的发生几率，若患者形成了关节病，就不能再逆转，因此预防治疗效果不全面[3]。有学者研究显示，同样的出血情况下，关节病形成存在个体差异，这提示血友病关节病的形成不仅与关节出血有关，还存在其他因素[4]。血液充满关节腔后激活基质金属蛋白酶类、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核/巨噬系统释放白细胞介素-1β（IL-1β），致使血管内皮生长因子增加，形成滑膜炎性反应，出血后滑膜内铁沉积损害软骨细胞，导致关节出现功能障碍或退行性变，这个过程与风湿性关节很相似[5]。目前在风湿免疫病领域中，已经发现了炎性反应因子与关节炎的关系，特别是TNF-α、白介素-6（IL-6）、IL-1β，且抗TNF-α、IL-6、IL-1β的靶向药物也已广泛运用于慢性关节病变预防[6]。虽然目前知道TNF-α、IL-6、IL-1β与血友病关节病变有密切关系，但其形成过程中的作用如何还不清楚，本研究选取我院（2015年1月—2017年1月）收治的重型血友病A患儿60例，就探讨重型血友病A患儿关节出血后IL-1β、IL-6、TNF-α释放与关节病变形成的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

方便选取该院收治的重型血友病A患儿60例，均经临床检查确诊，根据不同关节出血情况分为4组，无关节出血组（n=20），其中男12例，女8例；年龄2～18岁，平均（8.21±3.11）岁；关节出血组（n=36），其中男22例，女14例；年龄2～18岁，平均（8.17±3.21）岁；急性关节出血组（n=20），其中男11例，女9例；年龄2～18岁，平均（8.09±3.34）岁；慢性关节出血组（n=15），其中男8例，女7例；年龄2～18岁，平均（8.47±3.05）岁，4组患者一般资料对比差异无统计学意义（P>0.05）。纳入标准：①符合重型血友病A诊断标准；②患儿及（或）家属均知情研究；③年龄2～18岁；④无抑制物产生病史者；排除标准：①病程中曾服用过免疫制剂者；②近期服用过抗炎镇痛药物者；③合并其他感染者；④存在自身免疫系统疾病者。该研究所选病例经过伦理委员会批准。

1.2 方法

收集所有患儿的临床资料，使用紫帽管采集静脉血标本，3 000 r/min离心25 min，应用酶联免疫吸附实验测定血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平。对外周单个核细胞进行核糖核酸反转录、提取，使用反转录-聚合酶链反应测定TNF-α、IL-6、IL-1β的信使核糖核酸表达量。采集外周血标本，用Trizol法提取细胞总核糖核酸，测定核糖核酸的浓度和纯度[7]。

1.3 统计方法

选用SPSS 20.0统计学软件分析数据，计数资料以[n（%）]表示，采取χ2检验，计量资料以（x±s）表示，采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 关节出血后炎性反应因子变化情况

关节出血组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平与无关节出血组对比差异无统计学意义（P>0.05）；关节出血组患者细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平均明显提高，差异有统计学意义（P<0.05）；急性出血组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平与无关节出血组对比差异无统计学意义（P>0.05）；急性出血组患者细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平均明显提高，差异有统计学意义（P<0.05）；慢性出血组患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平与无关节出血组对比差异无统计学意义（P>0.05）；慢性出血组患者细胞内TNF-α信使核糖核酸表达水平明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）；急性出血期患者血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平以及细胞内TNF-α、IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平与慢性出血组对比差异无统计学意义（P>0.05）。表1、表2、表3。

2.2 关节病变患儿炎性反应因子表达水平

急性关节出血组关节病变与无关节病变血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平对比差异无统计学意义（P>0.05）；急性关节出血组关节病变患者细胞内TNF-α信使核糖核酸表达水平（6.695±2.523）ng/L，明显高于无关节病变患者（1.791±1.479）ng/L，差异有统计学意义（t=4.934 6，P<0.05）；急性关节出血组关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平分别为（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；无关节病变者分别为（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性关节出血组关节病变与无关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平对比差异无统计学意义（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。表4～5。

3 讨论

血友病会导致患儿异常出血，一般以关节出血为主，若出血症状严重，还可能导致患儿死亡，虽然凝血因子替代治疗具有一定效果，但也只能将该疾病转变为致残性疾病[8]。重度血友病患者出血时间发生在关节处占比达82%，因反复出血的原因，最终会引发关节病变，不仅会带来巨大的疼痛感，还会导致患者关节永久性功能障碍。有学者的小鼠模型、体外细胞研究表示，在血友病关节病变的形成过程中，IL-10、IL-6、IL-1β、TNF-α等炎性反应因子有重要作用[9]。有研究显示，血友病关节出血由机械损伤引发的可行性很小，而促炎性细胞因子却会对软骨组织和滑膜造成巨大破坏，特别是TNF-α、IL-6、IL-1β，且这些促炎性细胞因子还会将伤口愈合时间延长[10]。

该研究结果显示，急性关节出血组关节病变患者细胞内TNF-α信使核糖核酸表达水平（6.695±2.523）ng/L，明显高于无关节病变患者（1.791±1.479）ng/L，差异有统计学意义（t=4.934 6，P<0.05）；急性关节出血組关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平分别为（0.912±0.525）ng/L、（1.879±1.542）ng/L；无关节病变者分别为（1.263±0.647）ng/L、（0.971 8±0.517）ng/L，急性关节出血组关节病变与无关节病变细胞内IL-6、IL-1β信使核糖核酸表达水平对比差异无统计学意义（t=1.336 2、1.592 9，P>0.05）。关节出血患者血清TNF-α水平无明显提高，而细胞内TNF-α的信使核糖核酸表达水平明显提高，分析与实验取血标本和时间把握不足以及TNF-α容易裂解有关，而信使核糖核酸表达水平较稳定，所以明显提高。结果显示，急性关节出血组关节病变与无关节病变TNF-α的信使核糖核酸水平存在差异，而其余因子无差异，说明TNF-α为关节病变形成的关键因子。结果显示，关节出血慢性组TNF-α的信使核糖核酸水平高于无关节出血组，而其余因子无差异，说明血友病慢性滑膜炎形成中，TNF-α为关键因子，有巨大作用。学者刘国青等[11]做过类似研究，发现急性关节出血组伴关节病变与急性关节出血组不伴关节病变的 TNF-α的细胞内 mRNA 的水平[（5.584±3.634） vs （1.680±1.590）]差异有统计学意义（P=0.02），与该研究结果一致。

綜上所述，重型血友病A患儿急性关节出血TNF-α、IL-6、IL-1β水平明显升高，以TNF-α表达水平最高，且伴关节病变患儿TNF-α水平也明显升高，因此关节病变形成的关键因子为TNF-α。

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[11] 刘国青，陈振萍，唐凌，等.重型血友病A患儿关节出血后IL-1β、IL-6、TNF-α释放与关节病变形成的相关性研究[J].首都医科大学学报，2018，39（3）：314-319.

（收稿日期：2018-12-07）