银黄可溶性粉治疗羊肺炎的试验观察

刘若楠，邹东敏，侯海婷，刘 芳，马玉忠

(河北农业大学动物医学院，河北保定071000)

呼吸系统疾病是影响养羊业的重大疾病，这类疾病的特点是传播速度快，难以控制。在该类疾病中尤以肺炎多发。肺炎主要由病原体和寄生虫侵袭、饲养环境的改变、营养缺乏、应激等因素引起。银黄可溶性粉是金银花和黄芩的提取物，具有止咳平喘，抗病毒，抗细菌及解热等功效[1-2]，对动物的呼吸道疾病，尤其对肺炎治疗效果显著。

河北省唐县是全国闻名的育肥羊养殖大县，当前羊的存栏量为100多万只，当前羊肺炎的发病率很高。本研究选取该县患肺炎的病羊，通过不同剂量的银黄可溶性粉治疗效果观察，来确定银黄可溶性粉的最佳治疗剂量，以便为羊肺炎的中药治疗打下基础。

1 材料与方法

1.1 药品及试剂 银黄可溶性粉，由北京生泰尔科技股份有限公司生产；普通琼脂培养基，购自北京澳博星生物技术有限责任公司；犊牛血清，购自杭州四季青生物公司；链球菌、肺炎双球菌微量生化鉴定管，购自浙江省杭州天和微生物试剂有限公司；革兰染色液，购自潍坊汉唐生物工程公司。

1.2 试验动物及分组 选取河北省保定市唐县某养殖场患肺炎小尾寒羊100只，体重在15～20 kg，随机分为4组，对照组、试验1组、试验2组和试验3组，每天每只羊分别饲喂银黄可溶性粉0、0.5 g、1 g、1.5 g。连用10 d，停药后观察10 d。

1.3 方法

1.3.1 病料采集与分离培养 用无菌棉拭子采取患羊的鼻腔分泌物，在超净台上将棉拭子用无菌生理盐水稀释，接种于血清营养琼脂平板上，37 ℃培养18～24 h，镜检。

1.3.2 细菌纯化和生化鉴定 将典型单菌落接种于血清营养琼脂培养基平板上，37 ℃恒温培养18～24 h后，革兰染色镜检，观察细菌的形态结构。如果出现其他杂菌，按照上述方法再次进行纯化培养，直到血清琼脂培养平板上全部为纯化的细菌为止。用接种环挑取分离培养所得的单菌落，分别接种于细菌微量生化鉴定管中进行鉴定。

1.3.3 临床症状及剖检变化 观察病羊的临床症状，选取病羊进行尸体剖检，并记录病理变化。

1.3.4 病理组织学检查 将采集的病料放入Bouin氏液中固定，制备石蜡切片，进行病理组织学观察。

1.3.5 血液常规指标测定 在治疗的第0天、10天、20天采集颈静脉血液，用日本光电MEK～6450K 血细胞分析仪检测血液常规指标。

1.4 数据处理 用SPSS19.0软件对试验数据进行统计分析。P<0.05差异显著，P<0.01差异极显著。

2 结果

2.1 细菌的分离培养和纯化 病料在血清琼脂平板上培养时出现了2种菌落。一种为灰白色、透明的微小菌落(见中插彩版图1)，该细菌革兰染色为阳性，呈球形或卵圆形，长链状排列，初步判断为链球菌(见中插彩版图2)。另一种为光滑、湿润的菌落(见中插彩版图3)，染色镜检为革兰阳性球菌，呈圆形或椭圆形，大多成对，从形态上初步判断为肺炎双球菌(见中插彩版图4)。

图1 链球菌的分离培养

图2 链球菌革兰染色 (1 000×)

图3 双球菌分离培养

图4 肺炎双球菌革兰染色 (1 000×)

2.2 细菌的生化鉴定

2.2.1 链球菌的生化鉴定 该菌对葡萄糖、果糖、乳糖产酸产气，蔗糖只产酸，山梨醇、M.R.试验、 V-P试验、甘露醇试验阴性，符合链球菌的生化特征[5](表1)。

表1 链球菌生化鉴定结果

注：“+”阳性;“-”阴性.“⊕”产酸产气

2.2 肺炎双球菌的生化鉴定 根据生化结果可知，分离菌株能分解葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖，甘露醇、山梨醇、七叶苷、M.R.、硝酸盐还原试验阴性，符合肺炎双球菌生化特性[3](表2)。

表2 肺炎双球菌生化鉴定结果

注：+:阳性;-:阴性

2.3 临床症状及剖检变化

2.3.1 临床症状观察 病羊体温升高，精神沉郁，食欲减退，并伴有腹泻、消瘦、贫血、流鼻涕等症状。鼻液初期呈浆液性，后期变为脓性，呼吸次数增多，严重者咳嗽、气喘。粪便稀软并混有黏液。有的病羊眼睑肿胀，结膜充血。

2.3.2 剖检病理变化 可见胆囊显著肿大(见中插彩版图5)；肺纤维化(见中插彩版图6);呈大叶性肺炎，切开有大量泡沫流出；全身淋巴结肿胀，胃肠道黏膜充血、出血(见中插彩版图7);皱胃黏膜出血严重(见中插彩版图8)。有的病羊会伴有腹水；心脏质软，心内膜及冠状沟附近有出血点。

图5 胆囊增大

图6 纤维素性肺炎

图7 肠道出血

图8 皱胃出血

2.4 病理组织学观察 可见肺泡壁增厚，肺间质增宽，炎性细胞增多(见中插彩版图10)(正常肺泡壁见中插彩版图9);细支气管也有部分渗出物(见中插彩版图11);肺泡内有大量渗出物(见中插彩版图12);静脉扩张、充血，肺泡壁细胞增生。

图9 正常肺泡壁 (100×)

图10 肺间质增宽 (100×)

图11 细支气管内有渗出物 (400×)

图12 肺泡内渗出物 (400×)

2.5 血常规测定 如表3所示,0 d时，各组羊的白细胞和嗜中性粒细胞数显著升高。10 d时，第1组、第2组羊的白细胞与对照组相比差异极显著(P<0.01)，嗜中性粒细胞与对照组相比差异显著(P<0.05)；20 d时，第2组、第3组羊的白细胞与对照组相比差异极显著(P<0.01)，嗜中性粒细胞与对照组相比差异显著(P<0.05)。

3 讨论

通过病羊临床症状观察、病理剖检及实验室诊断，确定引起羊肺炎的主要病原菌是链球菌和肺炎双球菌。链球菌和肺炎双球菌是在自然界分布广泛，属于条件致病菌。但是应与巴杆菌鉴别诊断，后者为革兰阴性菌。目前，我国对羊的支原体肺炎研究的较多，而对链球菌的研究相对较少。羊肺炎的发生涉及宿主、病原体、环境等因素。发病后造成羊免疫抑制和免疫调节功能下降[4]，引起纤维素性肺炎、败血症甚至死亡。肺炎时羊出现明显的临床症状和病理变化，血液常规指标也明显高于正常值。在治疗的第10天时，第2组、第3组羊的白细胞、嗜中性粒细胞数目都有了明显的下降，说明炎症反应减轻。经过20 d后，第2组和第3组白细胞和嗜中性粒细胞接近正常水平。通过以上数据可以看出，第2组和第3组的治疗效果较好。综合考虑，以第2组(金美康1.0 g/只)的用法和用量最佳，故每天每只羊 1.0 g银黄可溶性粉，连用10 d，可以有效降低肺炎发生。

表3 血液常规指标变化 (n=25)

指标参考值第2组第3组0 d10 d20 d0 d10 d20 dWBC(×109/L)4.00-12.0032.89±0.0515.03±0.12**12.18±0.10**34.15±0.0913.56±0.11**12.45±0.10**Gran(×109/L)0.40-6.2418.90±0.147.43±0.08*9.90±0.03*19.50±0.117.83±0.04*6.02±0.07*

*:与对照组相比差异显著(P<0.05)；**：与对照组相比差异极显著(P<0.01)

目前，肺炎链球菌疫苗大多都是荚膜血清型疫苗，只能引起血清特异性反应，有一定的局限性[9]，所以做好平时的预防工作尤为重要，规模化养羊场应根据药敏试验结果选择合理治疗药物[5]。本病全年均可发生，尤其冬春季节，注意防寒保暖，给予适量维生素，提高动物本身的抵抗力，减少疾病的发生。