川麦冬多糖对免疫抑制乌骨鸡公雏生长性能和免疫功能的影响

■阳 刚 杨仕群 徐 丹 任少均 舒 刚*

（1.宜宾职业技术学院生物与化工工程系，四川宜宾 644003；2.四川农业大学动物医学院，四川成都 611130）

川麦冬（Ophiopogon japonicus）为四川射洪地区大量种植的一种常见中药，主要利用其干燥块根，其性甘、微苦，微寒。润肺清心、泻热生津、化痰止呕、治嗽行水、润肠通便等功效，主治肺燥干咳、阴虚痨嗽、喉痹咽痛、津伤口渴、内热消渴、心烦失眠、肠燥便秘等症[1]。现代药理研究也表明，麦冬主要含沿阶草苷、甾体皂苷、生物碱、谷甾醇、多糖、氨基酸、维生素等，具有抗疲劳、清除自由基、提高细胞免疫功能以及降血糖的作用。其中麦冬的主要有效成分川麦冬多糖在临床上应用于降血糖、调节免疫、抗心肌缺血、抗过敏和平喘等[2]。目前，川麦冬多糖在地方品种乌骨鸡生产中还没有关于对免疫抑制应用的报道，本试验通过在肉鸡饲料中添加川麦冬多糖，考察对环磷酰胺导致乌骨鸡公雏免疫抑制后生长性能和免疫功能的影响，为开发绿色的川麦冬多糖饲料添加剂提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验用鸡

1 d 出壳健康兴文乌骨鸡公雏300 只，由兴文山地乌骨鸡合作社提供。

1.2 药品与试剂

川麦冬，购于成都市荷花池药材批发市场。川麦冬多糖采用微波提取法：提取时间30 min，微波功率800 W，水与川麦冬液固质量比65∶1，滤液经活性碳脱色、Sevag法除蛋白、减压浓缩后，加入无水乙醇使含醇量达80%，冰箱静置过夜，过滤，沉淀用无水乙醇、乙醚、丙酮洗涤数次，60 ℃烘干，即得到川麦冬多糖。

环磷酰胺(山西普德药业有限公司提供)；生理盐水为自行配制。新威灵（鸡新城疫VG/GA 株活疫苗,由梅里亚动物保健有限公司提供）；新城疫抗原、标准阳性、阴性血清(哈尔滨兽医研究所提供)；免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所提供)。

1.3 主要仪器

AG 135电子天平(赛多利斯公司)，RE-2A型旋转蒸发仪(上海亚东生化仪器厂)，G70D20CN1P-D2微波炉（广州格兰仕），DHW-9170A 电热恒温鼓风干燥箱(苏州上医用仪器厂)，752型紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司），AU2700 全自动生化分析仪(日本奥林巴斯公司产品)，移液枪等。

1.4 试验设计与饲养管理

试验选择1 d 健康乌骨鸡公雏300 只，随机分为3个日粮处理组，每个处理组5个重复，每个重复20只鸡。对照组、环磷酰胺免疫抑制模型组饲喂基础日粮，川麦冬多糖+环磷酰胺免疫抑制组日粮由基础日粮中添加1%的川麦冬多糖配制而成。饲养观察5 d后，对照组胸肌注射0.5 ml 的生理盐水，其余组将环磷酰胺按80 mg/kg 的剂量，生理盐水稀释到体积0.5 ml。采用胸肌注射的方法，连续注射3 d，整个试验为期28 d。试验前鸡舍严格消毒，各组均采用单层笼养，各组自由采食和饮水，舍内温度、湿度及光照等按照乌骨鸡管理方法进行，3 d 时新城疫疫苗点眼滴鼻接种。

1.5 基础日粮

基础日粮按NRC(1994)推荐的肉仔鸡营养需要配制的玉米-豆粕型基础日粮组成及营养水平见表1。

1.6 测定指标及测定方法

1.6.1 生长性能指标

试验期间各试验组详细记录采食、死亡等情况，同时在14、28 d的早上08:00空腹称雏鸡的体质量，计算出平均日增重、平均日采食量和料重比等。

表1 基础日粮组成及营养水平(风干基础)

1.6.2 免疫器官指数测定

14、28 d 时，每个重复随机抽取4 只鸡称空腹体质量，颈部放血致死后摘取脾、胸腺及法氏囊，准确称出质量，计算各免疫器官指数。

免疫器官指数(g/kg)=器官质量/活体质量

1.6.3 新城疫抗体滴度

血清新城疫抗体滴度采用微量血球血凝抑制(HI)试验法测定，参照GB/T 16550-2008的方法进行。

1.6.4 血清免疫球蛋白测定

免疫球蛋白(IgG、IgM 及IgA)浓度：血清IgA、IgG及IgM 浓度采用免疫比浊法(Im-munoturbidimetry，ITM)测定。

1.7 数据处理与分析

所有数据采用Excel 软件整理，SPSS 17.0 软件One-Way ANOVA 进行方差分析，用Duncan's 法进行多重比较，试验数据用“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 川麦冬多糖对免疫抑制公雏精神状态和生长性能的影响（见表2）

对各组鸡进行观察并称重。结果发现，对照组与川麦冬多糖+环磷酰胺组鸡生长最好，羽毛紧凑，精神状态好，喜欢运动。而环磷酰胺组鸡生长较差，体轻羽毛零乱，精神萎靡，由此可见免疫抑制模型构建成功。从表2看出，1～14 d时，环磷酰胺组平均日增重显著低于对照组（P＜0.05），环磷酰胺组与川麦冬多糖+环磷酰胺组的平均日采食量低于对照组，但料重比皆高于对照组，但各组差异不显著（P＞0.05）。在15～28 d时，环磷酰胺组平均日增重与平均日采食量均显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）；环磷酰胺组的料重比显著高于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）。0～28 d时，各组比较，环磷酰胺组平均日增重与平均日采食量均显著低于对照组（P＜0.05）；环磷酰胺组的料重比显著高于对照组（P＜0.05）；环磷酰胺组的存活率也显著低于对照组（P＜0.05）。川麦冬多糖+环磷酰胺组各指标优于环磷酰胺组，接近对照组，但均无显著性差异（P＞0.05）。试验结果表明环磷酰胺导致雏鸡生长出现抑制，而川麦多糖能解除抑制。

表2 川麦冬多糖对免疫抑制公雏生长性能的影响

2.2 川麦冬多糖对免疫抑制公雏免疫器官指数的影响（见表3）

由表3 可知，在14、28 d 时，各组胸腺指数比较，环磷酰胺组最低，但与对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组无显著性差异（P＞0.05）。各组脾指数比较，14 d时，环磷酰胺组最低，显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）；28 d 时，环磷酰胺组显著低于对照组（P＜0.05），但与川麦冬多糖+环磷酰胺组无显著性差异（P＞0.05）。法氏囊指数比较，14 d时环磷酰胺组最低，显著低于川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）；28 d 时环磷酰胺组显著低于对照组（P＜0.05），但与川麦冬多糖+环磷酰胺组无显著性差异（P＞0.05）。由此可见，环磷酰胺按照剂量80 mg/kg 给予雏鸡，主要导致脾脏和法氏囊的生长受到抑制，对胸腺的生长影响较小，但川麦冬多糖可解除环磷酰胺对免疫器官发育的抑制。

表3 各组免疫器官指数比较(n=20)

2.3 川麦冬多糖对免疫抑制公雏新城疫抗体滴度的影响（见表4）

表4 各组对新城疫抗体滴度的检查结果(n=20,nlog2)

从表4可知，14、28 d时环磷酰胺组都最低，显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）。由此可见环磷酰胺影响雏鸡对疫苗抗体的生成，加入川麦冬多糖可以让新城疫抗体滴度恢复到接近正常的水平。

2.4 川麦冬多糖对免疫抑制公雏免疫球蛋白的影响（见表5）

表5 各组免疫球蛋白的检测结果(g/l)

由表5可知，IgA浓度在14 d时，环磷酰胺组显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）；IgA浓度在28 d 时，环磷酰胺组显著低于对照组（P＜0.05），与川麦冬多糖+环磷酰胺组差异不显著（P＞0.05）。IgG 浓度比较，14、28 d 时环磷酰胺组皆显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）。IgM 浓度比较，14 d 环磷酰胺组皆显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组（P＜0.05）；28 d时，各组差异不显著（P＞0.05）。

3 讨论与结论

3.1 川麦冬多糖对免疫抑制公雏精神状态与生长性能的影响

环磷酰胺在临床上主要用来治疗肿瘤，但其副反应能抑制骨髓和导致机体免疫功能低下，很多免疫抑制模型就通过注射其来制备[3]。董晓芳等[4]对肉鸡采用1次性腹腔注射环磷酰胺[10 mg/(kg·BW)]的方法成功制备了肉鸡免疫模型。本试验中采用环磷酰胺注射公雏后，雏鸡的兴奋性降低，食欲下降，体重下降，而川麦冬多糖可以对环磷酰胺导致的抑制得到解除。从生长性能数据可以看出，环磷酰胺组1～14 d时，平均日增重显著低于对照组；15～28 d 时，环磷酰胺组生长性能显著低于对照组和川麦冬多糖+环磷酰胺组；川麦冬多糖+环磷酰胺组生长性能接近对照组。冯焱等[5]报道都指出给鸡注射不同剂量的环磷酰胺可显著抑制鸡体质量的增加，且与剂量呈依赖关系。赵谨[6]的研究表明环磷酰胺使雏鸡采食量、日增重显著降低（P＜0.05），料重比显著升高（P＜0.05）。环磷酰胺对大鼠、猪都能抑制生长[7-8]。黄精粗多糖、黄芪多糖、复合多糖、桑黄多糖等对鸡、鼠都能解除环磷酰胺对其生长的抑制[9-11]。

3.2 川麦冬多糖对免疫抑制公雏免疫器官指数的影响

胸腺、脾和法氏囊是鸡的主要免疫器官，胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数可以评价鸡的免疫状态。环磷酰胺作为免疫抑制剂，可抑制机体免疫功能[12]。环磷酰胺可显著降低鸡早期脾脏指数和法氏囊指数，对胸腺指数的影响效果不显著[5]。有研究表明麦冬多糖对小鼠胸腺和脾脏重量有明显增加作用，具有促使T 淋巴细胞和B 淋巴细胞增殖的作用[13]。韩凤梅等[14]证实山麦冬多糖对环磷酰胺造成的小鼠免疫器官损伤有一定的恢复作用，能显著增强免疫低下小鼠的胸腺和脾脏质量，还能升高注射环磷酰胺小鼠外周血的白细胞数。本试验结果也表明，环磷酰胺注射雏鸡后能导致14 d时的脾脏、法氏囊指数下降，28 d时，与对照组同样差异显著（P＜0.05），但与川麦多糖+环磷酰胺组差异不显著（P＞0.05）；川麦多糖可以改善环磷酰胺导致的免疫抑制状态，让脾脏、法氏囊指数恢复到正常水平。环磷酰胺也降低胸腺指数，但与对照组未达到显著水平。

3.3 川麦冬多糖对免疫抑制公雏新城疫抗体滴度的影响

新城疫抗体滴度是反映雏鸡体内对新城疫病毒的特异性应答，抗体越高说明机体的体液免疫功能越强。环磷酰胺不仅能造成细胞免疫抑制, 还可造成体液免疫抑制。它对体液的抑制作用比较明显, 且持续时间较长。本试验证实，单用环磷酰胺能导致雏鸡新城疫抗体下降明显，显著低于对照组、川麦多糖+环磷酰胺组；与免疫器官指数降低相对应。研究表明，多糖对体液免疫功能是具有促进作用的[15]。例如有黄芪多糖能解除环磷酰胺导致肉鸡抗体下降的报道[16]。

3.4 川麦冬多糖对免疫抑制公雏免疫球蛋白的影响

血清中IgA、IgG和IgM 3 种免疫球蛋白在血清中的含量高低是判断动物体液免疫功能的重要指标之一。环磷酰胺导致雏鸡血清中的3 种免疫球蛋白显著降低（P＜0.05），IgM 在28 d 时才逐渐恢复到正常水平。而文献报道麦冬多糖能显著提高运动训练大鼠外周血WBC和LC数量,增加CD4+百分比、CD4+/CD8+,提高血清的IgA、IgM、IgG含量[17]。本试验也证实了川麦冬多糖可以逆转环磷酰胺对雏鸡免疫球蛋白生成的抑制，达到正常的水平。这些试验结果进一步验证了川麦冬多糖对体液免疫功能的促进效果。

综上所述，川麦冬多糖具有免疫调节作用，能使环磷酰胺造成的雏鸡免疫抑制状态恢复到正常水平。