细胞色素P450与基质金属蛋白酶-26在宫颈癌中的表达

齐彩霞

（山西大同大学医学院免疫学研究所，山西大同037009）

宫颈癌（cervical cancer）占女性生殖系统恶性肿瘤的半数以上,严重威胁着妇女的健康与生命。病理学上宫颈癌的形成要经历宫颈上皮内瘤变（CIN）阶段，此阶段如果病情得不到控制，癌细胞进而发生侵润、转移，使得病情很快进展为晚期。因此真正能够从基因水平上来了解肿瘤的形成与发展，才能有效的降低宫颈癌的发病率。

国内外已有的研究结果显示细胞色素(cytochrome)P450（CYP1A1）的基因与肿瘤的形成密切相关[1]。它是主要存在于人体肝脏内的一类能够代谢环境中有毒物质的酶类。环境中的化学致癌物进入人体细胞后，经CYP1A1的氧化形成亲电子化合物，与细胞中的大分子物质（如DNA、蛋白质等）形成复合物，导致癌基因与抑癌基因发生突变，形成肿瘤。基质金属蛋白酶（MMPs）能够降解细胞外基质和基底膜，进一步引起肿瘤的侵润与转移，从而增加了患者的死亡率。本实验通过免疫组织化学的方法分别检测CYP1A1与MMP-26在正常宫颈、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌中的表达情况，进一步探讨二者与宫颈癌的发生与发展的关系。

1 资料与方法

1.1 标本来源

随机选取大同市第三人民医院2015-2016存档的经病理证实的宫颈上皮内瘤变(CIN)组织46例(其中病理分级CINⅠ级12例，CINⅡ级15例，CINⅢ级19例)、病理诊断明确的宫颈癌组织29例（术前均未进行化疗及放疗）、以及因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织35例石蜡标本作为对照组。

1.2 主要试剂

CYP1A1、MMP-26抗体购自香港Abcam公司，辣根过氧化物酶标记的二抗、免疫组化试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 方法

应用免疫组织化学S-P染色法分别检测CYP1A1与MMP-26在组织中的表达情况。所有石蜡标本连续切为厚度4 μm的薄片；二甲苯脱蜡，100%、95%、75%乙醇水化；PBS冲洗；按免疫组化试剂盒操作流程进行染色；然后DAB显色；苏木素复染；干燥透明后，中性树胶封片。

1.4 阳性结果判定

CYP1A1、MMP-26阳性表达均位于细胞浆，如果胞浆中出现棕黄色颗粒就定义为阳性。计数出现阳性表达的标本数量得出阳性率；同时利用图像分析系统对阳性细胞进行灰度值的检测。

1.5 统计学方法

所有实验数据采用SPSS软件包进行统计分析，利用卡方检验进行各组间阳性率的比较，利用q检验进行各组间灰度值的比较。

2 结果

2.1 CYP1A1与MMP-26在宫颈癌组织中的表达

见图1～2。

图1 CYP1A1在宫颈癌组织中的阳性表达结果（×400）

图2 MMP-26在宫颈癌组织中的阳性表达结果（×400）

2.2 CYP1A1与MMP-26在宫颈上皮内瘤变组织中的表达

见图3～4。

图3 CYP1A1在宫颈上皮内瘤变（CINⅢ级）中的阳性表达结果（×400）

图4 MMP-26在宫颈上皮内瘤变（CINⅢ级）中的阳性表达结果（×400）

2.3 CYP1A1与MMP-26在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌组织中阳性率的表达情况

见表1。

表1 CYP1A1、MMP-26在3组标本中阳性率的表达

2.4 CYP1A1与MMP-26在不同病理分级的宫颈上皮内瘤变组织中的表达

见表2。

表2 CYP1A1、MMP-26在不同级别CIN中阳性率的表达

2.5 CYP1A1与MMP-26在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌中阳性表达灰度值的检测

见表3。

表3 CYP1A1与MMP-26在三组标本中阳性表达的灰度值

2.6 CYP1A1与MMP-26在不同病理分级的宫颈上皮内瘤变组织中阳性表达灰度值的检测

见表4。

表4 CYP1A1与MMP-26在不同病理级别CIN中阳性表达的灰度值

3 讨论

近几年来宫颈癌的发病率越来越高，而且发病年龄日趋年轻化[2]。其主要原因除了与病毒感染、性生活过早或紊乱、早婚、早产、多产等因素有关，还与环境因素有很密切的关系。多环芳香烃（PAH）是引起环境污染的主要化学成分之一，它进入人体以后主要经过细胞色素P450（CYP1A1）的代谢进而形成致癌物，导致肿瘤形成。有关化学致癌物方面的研究显示，环境中的一些有毒化合物可以诱导CYP1A1的表达，CYP1A1表达增强与肿瘤的发生具有相关性[3]。肿瘤形成以后就具备了向正常组织侵润和转移的能力，但这种能力的前提条件是肿瘤细胞必须能够破坏正常细胞的基底膜。众多的实验研究表明，基质金属蛋白酶（MMPs）类的新成员MMP-26，能够降解细胞外基质蛋白成分，促进肿瘤细胞向正常组织的侵润与转移[4]。

本实验研究应用免疫组化的方法同时检测CYP1A1与MMP-6在正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）、及宫颈癌中的表达情况。二者在3组标本中均有阳性表达，CIN组与宫颈癌组的表达明显强于正常对照组，宫颈癌组与CIN组比较也有明显的统计学意义。同时我们检测了不同病理级别CIN中两种蛋白的表达。CINⅢ中的阳性表达明显高于CINⅡ级、CINⅠ级，而CINⅡ级与CINⅠ级比较无统计学意义。CINⅠ级与CINⅡ级由于病变较局限，细胞异型性小，CYP1A1与MMP-26表达较低，此时病变多能逆转。CINⅢ中二者表达明显增强，组织细胞异型性大，核分裂像多，原位癌形成。该实验结果显示在原位癌形成时期CYP1A1与MMP-26表达明显上调,提示二者有可能参与了肿瘤的发生与发展。Mohammed等研究证实，利用干扰技术能够抑制CYP1A1表达，进而减弱细胞生存能力，促进细胞凋亡[5]，改善预后。因此在宫颈癌的临床预防与治疗方面，可以预先进行CYP1A1及MMP-26的相关检测，可将宫颈癌控制在预防阶段[6]。