党灵杞糖浆的提取工艺及质量标准探讨

梁 文,杨敏飞,黄 鑫

西安市第五医院制剂科(西安 710002)

党灵杞糖浆原为汤剂，具有补中益气、清肝明目、安神等功效，可用于各类眼底疾病的临床治疗，尤其对缺血型视网膜静脉阻塞等相关疾病治疗具有独特功效。但因灵芝草、枸杞子均为相对贵重的中药，且煎煮过程相对不便，尤其是对生活在节奏快、居住环境拥堵的城市上班人群来说，更会浪费时间，不利于其推广使用[1]；同时，因不同人煎煮药剂习惯或条件不同，可能会对药效造成影响，进而影响服用效果[2]。因此，为更方便患者服用，更好的发挥药效，本科室欲将其制备成糖浆制剂。现将党灵杞糖浆提取工艺及质量控制标准介绍如下。

材料与方法

1 仪 器 高效液相色谱仪型号：Waters600，配置Waters2996二极管阵列检测器、色谱工作站为Empower型(均由美国Waters公司生产)，色谱柱选择美国安捷伦公司提供的SB-Aq系列(5m，4.6 mm×250 mm)，KQ5200DE型数控超声波清洗仪(昆山超声仪器公司)，纯水系统为Aquelix5型(美国)，JA系列电子分析天平(上海恒平科学仪器有限公司)。

2 药品试剂 丹参产自于重庆市巫山县庙宇镇；灵芝草子实体(四川省农业科学院微生物研究开发中心提供)；枸杞产于甘肃白银景泰；丙酮、低沸点石油醚、乙腈、乙醇均为分析纯；党参炔苷对照品批号111732-201607，纯度≥98%(中国食品药品检定研究)。

3 党灵杞糖浆制备工艺研究

3.1 党灵杞有效成分提取工艺研究：党灵杞糖浆是党参、灵芝草及枸杞子3味中药精制而成的中成药，其中主要活性成分主要有党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素等有机物质，又有党参多糖、灵芝多糖、枸杞多糖等水溶性成分。因此本研究先对以配方药物为原材料提取上述有机活性物质，之后以上述提取残渣为原料提取各类多糖。

3.1.1 党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素提取工艺考察：选择党参炔苷、类胡萝卜素及灵芝三萜含量为考察指标，选取超声时间(A)、超声温度(B)、料液比(C)为考察因素，每个因素3个水平，设计正交试验，筛选最佳工艺，见表1。

表1 工艺因素水平设计表

按照处方分别称取党参20 g、灵芝草10 g、枸杞子10 g共9份(每份40 g)。按照表2所示，丙酮-石油醚=1∶2混合试剂为提取液，依次超声提取2次，过滤，合并滤液，降压浓缩，定容至100 ml，测定各项试验样品中党参炔苷、类胡萝卜素及灵芝三萜含量，按照40%、30%、30%的权重计算总评分。

表2 正交试验结果

表3 党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素提取的方差分析

根据极差直观分析显示，影响党灵杞糖浆中党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素提取的因素大小依次为A>B>C，最佳超声组合为A2B2C2，见表2。方差分析显示，A、B、C 3因素对提取结果的影响均具有统计学意义(P<0.05)，见表3。因此选择A2B2C2，即最佳提取工艺为超声时间40 min，超声温度43 ℃，料液比为1∶45。

3.1.2 多糖提取工艺考察：选择多糖转移率为考察指标，选取超声温度(A)、超声时间(B)、料液比(C)为考察因素，每个因素3个水平，设计正交试验，筛选最佳工艺，见表4。

表4 工艺因素水平设计表

称取党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素提取残渣20 g作为提取材料，以蒸馏水作为提取液。按照表4设计试验，依次超声提取2次，过滤，合并滤液，降压浓缩，醇沉、除蛋白、离心分离纯化，干燥后的多糖。测定各项试验样品中多糖含量。

极差直观分析显示，影响党灵杞糖浆中主要机成分提取的因素大小依次为A>B>C，最佳组合为A3B3C1，见表5。方差分析显示，A、B、C 3因素对提取结果的影响均具有统计学意义(P<0.01)，见表6。因此选择A3B3C1，即最佳提取工艺为超声温度90 ℃，超声时间55 min，料液比为1∶22。

表5 正交试验结果

表6 多糖提取的方差分析

3.2 党灵杞糖浆制备： 依据上述正交试验所确定的党灵杞配方中党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素及多糖提取工艺参数确定党灵杞糖浆制备工艺如下：依据处方精确称取党参、灵芝草和枸杞子加入45倍的丙酮-石油醚混合提取液，43 ℃下超声提取40 min，提取两次，合并提取液，降压浓缩、纯化后得到干燥的有机活性物质冷藏待用；药渣加入加入22倍蒸馏水，90 ℃下超声提取55 min，提取2次，合并滤液，降压浓缩、纯化至适量。提取的有机活性物质与多糖混合，加入200 g蔗糖、1 g山梨酸钾，蒸馏水定容至500 ml，搅拌溶解，煮沸20 min后装罐即可。

4 质量控制

4.1 性状:本制品为棕红色黏稠液体，味甜。

4.2 党参炔苷含量测定

4.2.2 对照品溶液制备： 分析天平精确称取适量党参炔苷标准品作为对照品，分别加入乙醇溶解，制备成浓度为6.20 mg/ml的对照品溶液备用[3]。

4.2.3 供试品溶液制备：按照处方分别精确称取党参20.00 g、灵芝草10.00 g、枸杞子10.00 g(共40.00 g)共9份，按照L9(33)正交试验设计进行超声处理、纯化，合并滤液后降压浓缩，加乙醇分别定容至100 ml，静置后过滤，收集滤液为供试液。

4.2.4 线性范围确定：依次精确吸取对照品溶液2、4、6、8、10、12、15l进样测定，记录峰面积。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行回归处理。结果所得线性回归方程Y=4.22×106X-1.49×105(R2=0.9993)。表明，党参炔苷在0.15～1.12g范围内具有相对良好的线性关系。

4.2.6 稳定性确定： 精确量取供试样品(正交试验表2中5号试验)溶液，避光条件下分别于4、6、8、10、12、24 h时进样进行色谱测量，记录供试品溶液中党参炔苷峰面积RSD。党参炔苷峰RSD为2.41%。表明，供试样品在24 h内稳定性良好。

4.2.7 加样回收率验证： 精确量取已知含量的正交试验供试品溶液6分(正交试验表2中5号试验)，每份2 ml，分别精确加入2.5 ml对照品溶液，并定容至10 ml，按照色谱条件测定，记录党参炔苷峰面积，计算其回收率RSD。结果，党参炔苷加样回收率为99.6%，RSD为2.60%。表明，该测定条件准确可靠，可用于党参中党参炔苷含量测定。

4.3 党灵杞糖浆验证试验：为确定最佳工艺的优劣性和稳定性，制备党灵杞糖浆3批，通过测定糖浆中党参炔苷含量验证提取工艺，结果见表7。

表7 党灵杞糖浆中党参炔苷含量测定结果

讨 论

糖浆即含有主要药物成分的蔗糖水溶液，口服专用类制剂，其中蔗糖含量≥45%(g/ml)。通常情况下，糖浆因为澄清的，且在存储期间不能出现异臭、酸败或其它变质现象[4]。而含有中药材提取物的糖浆制剂则允许存在少量沉淀，但该沉淀可在轻微晃动后散开[5]；此外制备所添加的其它物质不能对产品稳定性产生影响，不能违反《药品卫生标准》中相关规定。

党灵杞糖浆为纯中药制剂，方剂中党参参气浓烈、味香醇厚，是补益气血、清肺和胃、生津化痰之良药。现代药理研究表明，党参多糖具有调节机体免疫力、促进智力和造血功能的药理功效[6-7]；党参炔苷则具有保护胃黏膜损伤的作用。而党参炔苷为有机活性物质，其提取多采用有机溶剂[8]。灵芝草为我国的高等药用真菌，具有镇静安神、养肺保肝、强心降脂、抗氧化、抗肿瘤等多种功效，其中灵芝多糖及三萜类化合物被认为是灵芝草中的主要药理成分[9]。枸杞子是宁夏枸杞果实，其药用功效主要为补益肝肾、明目润肺[10]。其中主要药理成分为类胡萝卜素和枸杞多糖，其中类胡萝卜素具有抗氧化、抗肿瘤等作用，其中的β-胡萝卜素有维生素A活性，玉米黄素可清除氧自由基、保护视力的作用[10]；枸杞多糖则除具有党参一样的功效外，还具有降血脂的功效，预防脂肪肝。诸药合用，可更好的发挥补中益气、清肝明目、安神等功效[11]。

笔者通过查阅文献发现，上述药物中主要药理成分党参炔苷、灵芝三萜和枸杞中的类胡萝卜素等成分更易溶于有机溶剂，而多糖属于水溶性物质。且多项研究显示，超声提取在各味中药主要药理活性物质提取中具有更好的效果[12-14]。因此，笔者选择超声波热回流技术提取三味中药中的主要药理活性物质。首先，选择丙酮与石油醚的混合液为提取液对配方中易溶于有机溶剂的活性物质进行提取，分离、纯化处理；之后，在其残渣中加入蒸馏水提取多糖成分。将上述两次分离纯化后的提取物混合后制备糖浆。为最大限度提高3味中药中主要活性成分的转移率，笔者以党参炔苷、灵芝三萜、类胡萝卜素及多糖为指标，以影响各指标转移率的超声提取时间、温度及料液比为因素设计L9(33)正交试验，以筛选糖浆制备的最佳工艺。结果显示，党参炔苷、灵芝三萜和枸杞中的类胡萝卜素等易溶于有机溶剂的成分最佳提取工艺为超声时间40 min，超声温度43℃，料液比为1∶45；多糖的最佳提取工艺为超声温度90℃，超声时间55 min，料液比为1∶22。pH是影响微生物滋生的重要因素，其中pH 4～6最适宜真菌生长，6～8适合细菌生长[15]。本研究制备的初液pH约为6，因此需加入一定量的防腐剂。最终测得党参炔苷的线性范围为0.15～1.12g，样品平均加样回收率为99.6%，RSD 2.60%。

综上所述，采用超声热回流技术分批提取党灵杞配方中主要药理活性成分制备糖浆。工艺稳定，质量可控，活性成分测定方法结果可靠，重现性好。