Snail蛋白和细胞外基质蛋白1在原发性肝癌中的表达及与其临床特征和预后的相关性

杨长俊 高兴军

HCC是临床中常见的恶性肿瘤之一[1]。目前研究认为，在众多的肿瘤增生与侵袭的分子通路中，EMT通路在肿瘤的发生、进展中存在关键作用，Snail蛋白是EMT通路中的关键蛋白之一，而较多文献提示ECM1在多种恶性上皮肿瘤中出现高表达，可能与促癌细胞繁殖、转移有很大相关性[2-3]。本研究收集了71例HCC患者的各项临床资料，旨在探讨Snail蛋白和ECM1在HCC中的表达及与其临床特征和预后的相关性，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

选取2012年1月至2013年3月我院收治的71例HCC患者作为研究对象。纳入标准：(1)所有患者均符合诊断符合2015年中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的临床诊断标准[4]；(2)所有患者均经手术治疗且术后病理学检查均确诊；(3)本研究经医院伦理委员会批准；(4)所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书参与本次研究。排除标准：(1)未进行根治性切除术治疗者或者手术前已行放化疗者；(2)出现远处转移、合并肝性脑病者；(3)除HCC外存在其他恶性肿瘤者；(4)临床及随访资料不完整或缺乏准确性者。71例HCC中，男性50例，女性21例，年龄27～72岁，平均年龄(52.96±6.15)岁；Child Pugh 分级：A级39例，B级32例。

二、方法

收集71例HCC患者的各项临床资料，手术过程中收集癌组织标本进行甲醛固定、石蜡包埋，同时采集71份癌旁正常组织作为参照，比较两者间Snail蛋白和ECM1的表达水平，分析Snail蛋白和ECM1表达与HCC临床病理特征的关系。对71例HCC进行为期5年的随访，随访方式包括电话随访、短信随访、回院复查等，比较不同表达水平患者5年生存率，采用Logistic多因素回归分析影响HCC患者预后死亡的危险因素。

三、检测与结果判定

兔抗人ECM1多克隆抗体购自美国Proteintech生物科技有限公司，兔抗人 Snail多克隆抗体来源于福州迈新生物技术开发有限公司。细胞质中出现明显棕黄色颗粒者为阳性细胞。随机选取10个高倍(400)视野，每个视野计数100个细胞，共计1 000个细胞。统计ECM1阳性表达水平，阳性判断：将阳性染色细胞数<10%定义为阴性，≥10%定义为阳性。Snail以细胞核或细胞质出现棕黄色染色为阳性细胞，PBS代替一抗为阴性对照，严格按试剂盒说明书、技术规范手册进行实验操作。

四、 统计方法

结 果

一、两种组织标本中Snail蛋白和ECM1表达情况

71例患者癌组织Snail蛋白阳性47例、表达率为66.19%，明显高于癌旁组织26例(36.61%)，具有统计学意义(χ2=12.432，P<0.05)；ECM1在癌组织阳性56例(78.87%)，明显高于癌旁组织12例(χ2=54.633，16.90%)，具有统计学意义(P<0.05)。

二、 Snail蛋白和ECM1表达与肝癌患者不同临床特征的关系

Snail蛋白在不同年龄、性别、肿瘤直径中的表达情况无明显差异(P>0.05)，ECM1在不同年龄、性别、肿瘤直径、肝硬化、肿瘤直径中的表达情况无明显差异(P>0.05)；Snail蛋白在病理分期、微血管侵犯、肝硬化中其表达情况存在明显差异(P<0.05)；ECM1在病理分期、微血管侵犯中其表达情况存在明显差异(P<0.05)，见表1。

三、 71例HCC患者预后情况

随访5年结束后，Snail蛋白表达阳性、表达阴性者5年总生存率分别为21.27%(10/47)、37.50%(9/24)；ECM1表达阳性、表达阴性者5年总生存率分别为19.64%(11/56)、33.33%(5/15)，不同Snail蛋白、ECM1表达水平HCC患者5年总生存率比较差异具有统计学意义(P<0.001)。

经非条件多因素Logistic回归模型结果显示：病理分期(Ⅲ期)、肿瘤直径(>5cm)、微血管侵犯(有)、 Snail蛋白(阳性)、ECM1(阳性)均为影响HCC患者预后的独立危险因素(P<0.001)，见表2。

表1 Snail蛋白和ECM1表达与肝癌患者不同临床特征的关系

表2 影响HCC患者预后的多因素分析

讨 论

信号分子转录因子在肿瘤发生发展过程中起到了主要作用，间质细胞转分化是影响人体心脏、外周神经系统及生理过程伤口愈合的主要机制之一，当人体出现病理改变后，间质细胞转分化机制可使引起一系列分子和细胞事件，其中包括影响转录因子Snail蛋白[5]。本组研究中发现肝癌组织Snail蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织，与ECM1同为影响HCC患者预后的危险因素，与既往文献报道相似，事实上Snail蛋白可促进上皮细胞向间质细胞的转化，对于其通路的特征性，Snail蛋白可能作为肿瘤逆转的有效靶向[6]。

ECM1首次的出现是在1994年，自老鼠成骨机制细胞系MN7中分离出来的一种分泌性糖蛋白，参与多类生物学过程，其中包括促细胞增殖机制，同时在各类恶性肿瘤中呈现高表达[7]。既往多类动物研究实验[8]对肝癌细胞和组织分析后发现，无论是在细胞或组织中ECM1在肝癌的蛋白、基因表达水平都明显高于其他正常组织，与本组研究结果相似，同时，本组研究认为ECM1高表达的患者预后较差，相对于低表达的肝癌患者，更易病情恶化并出现不良预后。

综上所述，Snail蛋白和ECM1在HCC中表达阳性率高于癌旁组织，Snail蛋白和ECM1表达阳性者预后较差。本组研究存在不足之处为研究样本数量较低，研究结论仍然需要进一步探讨。