不同溶剂对柴胡中柴胡皂苷a溶出效果的影响

河南科技大学化工与制药学院，河南 洛阳 471023

柴胡是伞形科柴胡属植物的干燥根，为常用中药，具有解热镇痛、利胆保肝的作用。柴胡皂苷a是柴胡药材的主要有效成分，是含有柴胡类中成药质量标准中重要的检测指标。在目前的中成药质量标准评价体系下，提高药材中柴胡皂苷a的溶出度无疑是提取工艺研究的重点，其中溶剂种类的选择尤为重要。目前有文献对柴胡的提取溶剂进行优选，然而得出的结论却差异较大，有高浓度的乙醇，如70%乙醇[1-2]，有碱性高浓度乙醇，如含5%氨水的95%乙醇[3]，亦有常规提取溶剂水[4]。可见，从已有的相关文献判断，并不能得到明晰的结论，这种状况无法对相应的科研和生产起指导作用。基于此，本文以药材中柴胡皂苷a的溶出度为指标，对不同溶剂对药材中柴胡皂苷a溶出效果进行考察，为合理选用柴胡的提取溶剂奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Waters 600-2487高效液相色谱仪；RE-52AA旋转蒸发仪(郑州长城科工贸)；KQ-500DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；METTLER-AE240型电子分析天平。

1.2 试药 柴胡药材购自洛阳关林药材市场，经河南科技大学尹卫平教授鉴定为北柴胡BupleurumchinenseDC.的干燥根；柴胡皂苷a(自制，面积归一化法测定其纯度高于98%)；乙腈(DIKMA公司，色谱纯)，重蒸水自制，大孔树脂(天津南开大学化工厂)，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取柴胡皂苷a 2.2 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.2 供试品溶液的制备[5]称取柴胡药材10份，每份20 g，分别用水、30%、50%、70%、95%乙醇和5%NaOH水溶液、5%NaOH-30%乙醇、5%NaOH-50%乙醇、5%NaOH-70%乙醇、5%NaOH-95%乙醇进行提取。提取方式为10倍量溶剂，提取3次，每次1 h。提取完毕后，将所得提取液合并，回收溶剂，真空干燥，得相应浸膏。

分别称取相当于0.4 g生药的浸膏(以水为提取溶剂的样品取相当于2 g生药浸膏)，加水溶解后，于AB-8型大孔吸附树脂(内径1.2 cm，柱长9 cm)上样，先用0.5 mol/LNaOH 80 mL洗脱，弃去；然后用水洗脱至中性(约40 mL)；再用30%乙醇30 mL洗脱，弃去；最后用95%乙醇100 mL洗脱，搜集95%乙醇洗脱部分，水浴蒸干，用50%乙醇溶解转至10 mL量瓶中，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。

2.3 色谱条件 Hypersil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：(见表1)；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长：210 nm；进样量：10.0 μL。各样品及标准品的HPLC色谱图见图1。

表1 流动相梯度变化

2.4 线性关系 考察分别精密吸取柴胡皂苷a对照品溶液2.5、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0 μL注入液相色谱仪，依“2.3”项下色谱条件分析并测定峰面积。以峰面积(A×10-6)与进样量(X)进行线性回归，得柴胡皂苷a的回归方程为A=3.371X-0.0271(r= 0.9998)。结果表明，柴胡皂苷a在0.55～3.3 μg范围内与其峰面积呈良好的线性关系。如图2。

2.5 精密度试验 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作为提取溶剂的样品溶液10.0 μL，注入液相色谱仪，连续进样5次，测定峰面积。结果显示柴胡皂苷a的峰面积RSD为 1.51%，说明精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密移取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作为提取溶剂的样品溶液10.0 μL，分别于0、2、5、10、12 h注入液相色谱仪，依法测定柴胡皂苷a的峰面积。结果显示柴胡皂苷a峰面积的RSD为1.83%，表明样品在12 h内基本稳定。

2.7 重复性试验 精密称取“2.2”中同一5%NaOH-30%乙醇作为提取溶剂的柴胡提取物5份，每份浸膏折合生药材0.4 g，依法富集其中的柴胡皂苷a并测定含量。结果显示，以5%NaOH-30%乙醇作为提取溶剂从20 g柴胡药材中提取得到柴胡皂苷a的含量为97.5 mg，RSD为2.10%。

2.8 回收率试验 精密称取已测知含量的5%NaOH-30%乙醇作为提取溶剂的柴胡提取物5份，每份折合生药材0.2 g，加入适量对照品溶液，按样品溶液的制备方法处理，并依法测定，计算柴胡皂苷a的回收率。结果见表2。

表2 柴胡皂苷a回收率试验结果

2.9 样品测定 按照“2.3”项下柴胡皂苷a的分析方法对各样品进行测定，并计算折合20 g柴胡生药中柴胡皂苷a溶出量。结果见表3。

表3 提取溶剂对柴胡皂苷a的溶出量结果

3 讨论

3.1 溶剂中碱浓度的确定 柴胡皂苷a结构中的环氧醚环不稳定，在提取过程中易发生开裂，造成结构转化[6]，降低提取液中柴胡皂苷a的含量，而碱性溶剂可以抑制该过程的发生。因此，本文在考察提取溶剂的种类时增加了不同浓度的碱性乙醇，同时确定提取溶剂中氢氧化钠的浓度为5%，因为在该浓度下可以很好的抑制柴胡皂苷a的结构转化。

3.2 提取方式的确定 柴胡中的有效成分包括挥发油和皂苷两大类成分[7]，前者提取采用水蒸气蒸馏法，后者以溶剂法为主。本文主要优化皂苷的提取，并不涉及挥发油。有文献[3，8]采用先提取柴胡挥发油，再提取药渣中的皂苷的方式提取柴胡，以达到对柴胡的充分利用，但是这种提取方式在提取挥发油的过程中已经有部分柴胡皂苷a发生结构转化，换句话说这种提取方式在顾忌了挥发油的同时损失了柴胡皂苷a的提取率。

3.3 提取溶剂种类的确定 由表3的测定结果可知，对于不同浓度的中性乙醇水溶剂系统，50%和70%的乙醇对柴胡皂苷a的溶出度较高，其次是30%的乙醇，再次是95%的乙醇，溶出度最差的是水溶液。考虑到成本的因素，50%乙醇是中性溶剂系统中对柴胡皂苷a溶出度最佳的溶剂。对于不同浓度碱性乙醇，同样50%的碱性乙醇表现出了对柴胡皂苷a的良好溶出能力，且比中性50%乙醇的溶出量高近30%。可见，碱性50%乙醇对柴胡皂苷a的溶出能力最强。然而，实际生产中，柴胡往往是与其他药材一同进行提取，如果采用碱性50%乙醇作为提取溶剂，那么在提高了柴胡皂苷a溶出度的同时，碱性环境极有可能对其他成分造成破坏，此时50%乙醇应作为首选提取溶剂，而只有当提取的目的仅仅是柴胡皂苷a时，可选用碱性50%乙醇作为提取溶剂。

中医临床用药的主要形式是煎剂，作为煎剂的提取溶媒水在表3中显示出对柴胡皂苷a较低的溶出度，由于中药发挥作用的机理是多成分、多靶点起效，因而据此判断水不宜作为柴胡的提取溶剂是不可取的，该方面还有待进一步的深入研究。本文通过系统地考察提取溶剂对柴胡皂苷a溶出度的影响，为进一步规范柴胡的提取工艺提供参考。