E-cad启动子区甲基化与其在子宫内膜异位症的表达的相关性分析

叶丽珍

研究背景：子宫内膜异位症简称内异症，作为一种具有侵袭性的妇科良性疾病，它表现的子宫内膜组织的远处种植与生长，与恶性肿瘤的侵袭及转移性极其相似。目前其发病机制尚未清楚。最近研究表明，作为重要的粘附因子之一的E-cad表达的下降或丧失与恶性肿瘤的低分化、高侵袭、淋巴及远处转移呈正相关。以E-cad基因启动子区的DNA甲基化为代表的表观遗传改变可能是某些肿瘤中表达减少或丧失的主要原因。学者们推测，在具有与恶性肿瘤相似生物学行为的内异症发生、发展中，细胞粘附分子E-cad表达的下降或丧失可能起同样重要作用，E-cad基因启动子甲基化与内异症相关，可能是内异症发病中的异位内膜种植的始发机制之一。

关键词：钙粘蛋白;启动子甲基化;子宫内膜异位症

研究目的：本研究通过检测子宫内异症的异位内膜及对照组在位内膜组织的E-cad启动子区甲基化状况与其蛋白表达关系，探索内异症可能的发病机制，以及在发生、发展中的作用，为子宫内膜异位症的治疗找到新的突破点，并为进一步可能的临床治疗建立理论基础。

研究方法：

1.样本资料：采用随机对照法，收集广州医科大学附属第二医院妇科2013年1月至2015年1月手术治疗的并经病理证实的标本共65例，其中异位内膜组织（巧克力囊肿囊肿）45例为研究组，对照组为20例同期因诊刮、子宫切除而取到的正常子宫内膜组织。

2方法：通过免疫组化、Western Blotting检测E-cad异位与在位内膜表达情况;并采用甲基化特异性PCR检测异位与在位内膜E-cad启动子甲基化状况。

3.统计学分析：采用SPSS17.0统计软件进行统计学分析。用X²和Spearmans等级相关性分析比较异位内膜与正常子宫内膜E-cad蛋白表达及甲基化情况。P<0.05有统计学意义。

对比结果：

1.内异症组E-cad蛋白阳性率为40%，对照组中E-cad蛋白阳性率为100%。X²=20.526，P=0.000，P<0.05，有统计学意义。

2.内异症组13例Ⅰ-Ⅱ期样本中，E-cad蛋白阳性率为61%，17例Ⅲ期样本中，E-cad蛋白阳性率为41%，15例Ⅳ期样本中，E-cad阳性表达率降低为2%，内异症组E-cad蛋白阳性率在不同的临床分期呈直线相关，X²=5.023，P=0.081，P>0.05，无统计学意义。

3.45例内异症组中甲基化例数为26例，甲基化率为58%;20例对照组中甲基化例数为0，甲基化率为0%。X²=19.259，P=0.000，P<0.05。有统计学意义。

4内异症组Ⅰ-Ⅱ期E-cad启动子甲基化率为23%，Ⅲ期甲基化率为59%，Ⅳ期甲基化率为86%。X²=9.702，P=0.008，P<0.05，有统计学意义。

5.Spearmans等级相关分析显示在内异症不同临床分期中E-cad启动子甲基化与蛋白表达之间相关系数，分别是Ⅰ-Ⅱ期r=-0.850，Ⅲ期r=-0.842，Ⅳ期r=--0.961，P=0.000，P<0.05，有统计学意义。

（一）内异症组异位内膜和对照组在位内膜组织中E-cad蛋白表达情况分析

把收取的45例内异症异位内膜和20例对照组正常子宫内膜样本为对照分别石蜡包埋切片，以E-cad为一抗，进行免疫组化试验，得到每个样本的免疫组化的组织切片，按照上面试验方法介绍的E-cad蛋白表达阳性与阴性判定方法，判定E-cad蛋白是否表达。按照要求读片，根据文献报道正常的子宫内膜腺上皮有E-cad表达，而内异症中E-cad蛋白有低表达或者不表达。实验结果见表1内异症组、对照组E-cad蛋白阳性率表达比较。（n，%）

E-cadherin基因启动子CpG岛的异常甲基化可能是导致蛋白表達下调的原因之一。诸多恶性肿瘤中，E-cad基因启动子区域呈现高度甲基化引致的E-cad表达丧失是肿瘤侵袭性的可能机制，那么，在具有与恶性肿瘤相似远处种植行为的内异症发病中，E-cad启动子甲基化也可能是引起该基因表达下降或丧失的关键原因。

结论

E-cad在子宫内膜异位症中呈低表达，E-Cad启动子5端CpG岛甲基化可能是内异症中该基因失活的机制之一。E-cad启动子区域5CpG岛在内异症中呈高甲基化状态，而在正常内膜组织则为非甲基化状态，E-cad基因启动子异常甲基化可能与为内异症有密切相关性，可能参与内异症的发生、发展。E-cad基因启动子区域5CpG岛在Ⅲ、Ⅳ期内异症者中的甲基化率显著高于Ⅰ、Ⅱ期，而E-cad蛋白表达率则相反。E-cad启动子甲基化程度越高，其蛋白表达越低，内异症临床分期越晚。