花生衣化学成分的分离与结构鉴定*

王剑丽，瞿 璐，阮静雅，孙 璠，王 涛，张 祎

（天津中医药大学，天津市中药化学与分析重点实验室，天津 301617）

花生衣（ArachishypogaeaLinn.），又称花生皮，是一味传统中药，性味甘、涩、平，入肺、脾、肝经，具有健脾和胃、养血止血，散瘀消肿之功[1]。现代药理研究表明，花生衣具有抗氧化、抗过敏、降血糖、降血脂及防止血小板减少等多种生理活性[2-3]。花生衣作为花生加工中的副产物，来源广泛，价格低廉，但目前多作为饲料和燃料，利用度低，难以体现其应用价值。为扩大花生衣的应用范围，提高其药用植物资源利用率，本课题对花生衣的化学成分进行了初步研究，为该植物的进一步研究与开发利用提供物质基础。作者采用多种色谱法对花生衣50%乙醇提取物的化学成分进行分离制备，并利用与文献[4-8]类似的方法，鉴定了12个单体化合物的结构，分别为对羟基苯甲酸（1）、原儿茶酸（2）、原儿茶酸甲酯（3）、原儿茶酸乙酯（4）、对香豆酸（5）、儿茶素（6）、表儿茶素（7）、rhodonidin A（8）、槲皮素（9）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷（10）、异鼠李素-3-O-芸香糖苷（11）、3′，5，7-trihydroxyisoflavone-4′-methoxy-3′-O-β-glucopyranoside（12）。其中8为首次从落花生属中分离得到，3为首次从该植物中分离得到的化合物，见图1。

1 仪器与材料

Bruker500MR超导核磁共振波谱仪（德国Bruker公司，AvanceⅢ500 MR），安捷伦6500系列四级杆-飞行时间质谱仪（美国Aglient公司，6520 Accurate-Mass Q-TOF LC/MS）。正相柱色谱用硅胶（48～75μm），高效液相色谱法（HPLC）用分析柱以及制备柱[Cosmosil 5C18-MS-II（250 mm×4.6 mm，5μm）及（250 mm×20 mm，5μm）；Cosmosil PBr（250 mm×4.6 mm，5μm）及（250 mm×20 mm，5μm），日本Nacalai Tesque公司]，氘代甲醇（CD3OD）和二甲基亚砜（DMSO-d6，北京崇熙科技孵化器公司）。分析和色谱纯二氯甲烷（CH2Cl2）、乙酸乙酯（EtOAc）、甲醇（MeOH）、乙腈（CH3CN）、冰醋酸（HAc）等试剂购自天津康科德科技有限公司。

花生衣由山东翔宇健康制药有限公司提供，由天津中医药大学李天祥教授鉴定为落花生属植物花生的干燥种皮。标本保存于天津中医药大学中医药研究院。

2 提取与分离

图1 化合物1-12的结构

取干燥花生衣（8.0 kg），用50%乙醇溶液依次加热回流提取，减压回收溶剂，得浸膏2 024.4 g。取上述浸膏1 518.3 g溶于水，用EtOAc-H2O（1∶1，v/v）萃取，得EtOAc层和H2O层萃取物分别为389.1 g和830.0 g，不溶性沉淀253.7 g。EtOAc层萃取物（150.0 g）经硅胶柱层析[CH2Cl2→CH2Cl2-MeOH（100∶3→100∶7，v/v）→CH2Cl2-MeOH-H2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶3∶1→6∶4∶1，下层，v/v）]，得到12个组分（Fr.1～Fr.12）。Fraction 5（2.8 g）经硅胶柱层析[CH2Cl2→CH2Cl2-MeOH（100∶1→100∶3→100∶5→100∶7，v/v）]，得到9个组分（Fr.5-1～Fr.5-9）。Fractions 5-3（117.0 mg）和5-4（263.5 mg）分别经制备型高效液相色谱法（PHPLC）分离制备[MeOH-H2O（40∶60，v/v）+1%HAc，5C18-MS-II柱]，得对羟基苯甲酸（1，5.6 mg）、原儿茶酸乙酯（4，8.0 mg）和对香豆酸（5，15.5 mg）。Fraction 6（2.9 g）经Sephadex LH-20凝胶柱层析[CH2Cl2-MeOH（1∶1，v/v）]，得到7个组分（Fr.6-1～Fr.6-7）。Fraction 6-4（940.0 mg）经PH PLC分离制备[MeOH-H2O（20∶80，v/v）+1%HAc，5C18-MS-II柱]以及Sephadex LH-20柱层析（MeOH）纯化，得到原儿茶酸（2，147.0 mg）、儿茶素（6，439.2 mg）和表儿茶素（7，105.3 mg）。Fraction 6-5（396.2 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱层析（MeOH），得到5个组分（Fr.6-5-1～Fr.6-5-5）。Fraction 6-5-4（15.3 mg）经硅胶柱纯化[CH2Cl2-MeOH（100∶3，v/v）]，得到槲皮素（9，5.2 mg）。Fraction 7（2.5 g）经ODS柱层析[MeOH-H2O（20∶80→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，v/v）]得到12个组分（Fr.7-1～Fr.7-12）。Fraction 7-7（113.2 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱层析（MeOH），得到5个组分（Fr.7-7-1～Fr.7-7-5）。Fraction 7-7-3（28.7 mg）经PHPLC分离制备[MeOH-H2O（35∶65，v/v）+1%HAc，5C18-MS-II柱]，得到rhodonidin A（8，11.0 mg）。Fraction 7-8（61.4 mg）经Sephadex LH-20凝胶柱层析（MeOH）和PHPLC分离制备[CH3CN-H2O（22∶78，v/v）+1%HAc，5C18-MS-II柱]，得到异鼠李素-3-Oβ-D-葡萄糖苷（10，5.2 mg）和3′，5，7-trihydroxy isoflavone-4′-methoxy-3′-O-β-glucopyranoside（12，3.5 mg）。Fraction 9（5.0 g）经ODS柱层析[MeOH（10∶90→20∶80→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→100%，v/v）]，得到12个组分（Fr.9-1～Fr.9-12）。Fraction 9-6（1.1 g）经Sephadex LH-20凝胶柱层析（MeOH）和PHPLC分离制备[CH3CN-H2O（17∶83，v/v）+1%HAc，5C18-MS-II柱]，得到原儿茶酸甲酯（3，2.6 mg）。Fraction 9-9（110.2 mg）经PHPLC分离制备[MeOH-H2O（67∶33，v/v）+1%HAc，PBr柱]，得到3个组分（Fr.9-9-1～Fr.9-9-3）。Fraction 9-9-3（25.5 mg）经PHPLC分离制备[CH3CN-H2O（22∶78，v/v）+1%HAc，PBr柱]，得到异鼠李素-3-O-芸香糖苷（11，4.5 mg）。

3 结构鉴定

3.1 化合物1 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z139.039 1[M+H]+（calcd for C7H7O3，139.039 0），确定其分子式为C7H6O3。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ7.87（2H，d，J=9.0 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J=9.0 Hz，H-3，5）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ123.0（C-1），133.0（C-2，6），116.0（C-3，5），163.0（C-4），170.3（C-7）。其1H、13CNMR谱数据与文献[9]相对照，鉴定该化合物为对羟基苯甲酸（p-hydroxybenzoic acid）。

3.2 化合物2 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 153.019 1[M-H]-（calcd for C7H5O4，153.019 3），确定其分子式为C7H6O4。1HNMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ7.57（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.90（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），7.54（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-6）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ123.1（C-1），117.8（C-2），145.9（C-3），151.4（C-4），116.0（C-5），124.2（C-6），170.7（C-7）。其1H、13CNMR谱数据与文献[10]相对照，鉴定该化合物为原儿茶酸（protocatechuic acid）。

3.3 化合物3 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z169.049 5[M+H]+（calcd for C8H9O4，169.049 5），确定其分子式为C8H8O4。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ7.42（1H，br.s，H-2），6.80（1H，d，J=9.0 Hz，H-5），7.40（1H，dd，J=2.0、7.5 Hz，H-6），3.83（3H，s，7-OCH3）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ122.6（C-1），117.5（C-2），146.3（C-3），151.8（C-4），115.9（C-5），123.7（C-6），168.9（C-7），52.3（7-OCH3）。其1H、13CNMR谱数据与文献[11]相对照，鉴定该化合物为原儿茶酸甲酯（protocatechuic acid methyl ester）。

3.4 化合物4 白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z183.064 7[M+H]+（calcd for C9H11O4，183.0652），确定其分子式为C9H10O4。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ7.42（1H，d，J=2.0 Hz，H-2），6.79（1H，d，J=8.5 Hz，H-5），7.40（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-6），4.29（2H，q，J=6.5 Hz，H2-8），1.35（3H，t，J=6.5 Hz，H3-9）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ122.9（C-1），115.9（C-2），146.2（C-3），151.7（C-4），117.4（C-5），123.6（C-6），168.5（C-7），61.7（C-8），14.7（C-9）。其1H、13CNMR谱数据与文献[12]相对照，鉴定该化合物为原儿茶酸乙酯（protocatechuic acid ethyl ester）。

3.5 化合物5 淡黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z165.053 8[M+H]+（calcd for C9H9O3，165.054 6），确定其分子式为C9H8O3。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ7.44（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），6.81（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），7.60（1H，d，J=16.0 Hz，H-7），6.28（1H，d，J=16.0 Hz，H-8）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ127.3（C-1），131.1（C-2，6），116.8（C-3，5），161.2（C-4），146.6（C-7），115.8（C-8），171.2（C-9）。其1H、13C NMR谱数据与文献[13]相对照，鉴定该化合物为对香豆酸（pcoumaric acid）。

3.6 化合物6 淡黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z289.072 4[M-H]-（calcd for C15H13O6，289.071 8），确定其分子式为C15H14O6。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ4.67（1H，d，J=7.5 Hz，H-2），4.08（1H，m，H-3），[2.61（1H，dd，J=8.0、16.0 Hz），2.91（1H，dd，J=5.0、16.0 Hz），H2-4]，6.05（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.00（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），6.92（1H，d，J=1.5 Hz，H-2′），6.83（1H，d，J=8.0 Hz，H-5′），6.77（1H，dd，J=1.5、8.0 Hz，H-6′）。13C NMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ82.4（C-2），68.5（C-3），28.0（C-4），157.2（C-5），96.4（C-6），157.1（C-7）95.7（C-8），156.6（C-9），101.0（C-10），131.9（C-1′），115.2（C-2′），145.8（C-3′），145.8（C-4′），116.3（C-5′），120.2（C-6′）。其1H、13C NMR谱数据与文献[14]相对照，鉴定该化合物为儿茶素（catechin）。

3.7 化合物7 淡黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z289.072 7[M-H]-（calcd for C15H13O6，289.071 8），确定其分子式为C15H14O6。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ4.81（1H，br.s，H-2），4.17（1H，m，H-3），[2.74（1H，dd，J=3.0、17.0 Hz），2.86（1H，dd，J=5.0、17.0 Hz），H2-4]，5.96（1H，d，J=1.5 Hz，H-6），5.94（1H，d，J=1.5 Hz，H-8），6.98（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.77（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），6.80（1H，d，J=2.0、8.5 Hz，H-6′）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ79.8（C-2），67.5（C-3），29.2（C-4），157.3（C-5），96.5（C-6），157.5（C-7），96.0（C-8），157.9（C-9），100.1（C-10），132.3（C-1′），115.3（C-2′），145.9（C-3′），145.7（C-4′），116.0（C-5′），119.5（C-6′）。其1H、13CNMR谱数据与文献[15]相对照，鉴定该化合物为表儿茶素（epicatechin）。

3.8 化合物8 黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 575.120 7[M-H]-（calcd for C30H23O12，575.119 5），确定其分子式为C30H24O12。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ3.96（1H，d，J=9.0 Hz，H-2），3.99（1H，m，H-3），[2.52（1H，dd，J=9.5、14.5 Hz），2.95（1H，dd，J=6.0、14.5 Hz），H2-4]，5.90（1H，d，J=2.5 Hz，H-6），5.54（1H，d，J=2.5 Hz，H-8），[2.50（1H，d，J=11.5 Hz），2.67（1H，d，J=11.5 Hz），H2-10]，6.42（1H，s，H-13），4.92（1H，d，J=7.0 Hz，H-2′），4.10（1H，m，H-3′），[2.60（1H，dd，J=7.5、16.5 Hz），2.85（1H，dd，J=5.5、16.5 Hz），H2-4′]，6.12（1H，s，H-6′），6.84（1H，d，J=2.0 Hz，H-10′），6.79（1H，d，J=8.5 Hz，H-13′），6.74（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-14′）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ79.6（C-2），66.9（C-3），28.4（C-4），100.5（C-4a），157.7（C-5），97.1（C-6），158.1（C-7）95.9（C-8），156.4（C-8a），89.9（C-9），46.0（C-10），95.3（C-11），194.1（C-12），112.8（C-13），164.4（C-14），83.5（C-2′），67.9（C-3′），27.8（C-4′），104.0（C-4′a），166.3（C-5′），91.0（C-6′），168.1（C-7′），105.6（C-8′），155.2（C-8′a），131.3（C-9′），114.9（C-10′），146.5（C-11′），146.6（C-12′），116.4（C-13′），119.7（C-14′）。其1H、13CNMR谱数据与文献[16]相对照，鉴定该化合物为rhodonidin A，并结合2D NMR谱的解析，对文献中C-4和C-4′位之间的化学位移进行了调换。

3.9 化合物9 黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 303.051 2[M+H]+（calcd for C15H11O7，303.049 9），确定其分子式为C15H10O7。1H NMR（DMSO-d6，500 MHz）谱数据：δ6.19（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.41（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.67（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.89（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.54（1H，d，J=2.0、8.5 Hz，H-6′），12.50（1H，br.s，5-OH）。13CNMR（DMSO-d6，125 MHz）谱数据：δ146.7（C-2），135.6（C-3），175.7（C-4），160.6（C-5），98.1（C-6），163.8（C-7），93.3（C-8），156.0（C-9），102.9（C-10），121.9（C-1′），115.0（C-2′），145.0（C-3′），147.6（C-4′），115.5（C-5′），119.9（C-6′）。其1H、13C NMR谱数据与文献[17]相对照，鉴定该化合物为槲皮素（quercetin）。

3.10 化合物10 黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z477.105 0[M-H]-（calcd for C22H21O12，477.103 8），确定其分子式为C22H22O12。1H NMR（DMSO-d6，500 MHz）谱数据：δ6.20（1H，br.s，H-6），6.43（1H，br.s，H-8），7.94（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.91（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.50（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-6′），5.56（1H，d，J=7.0 Hz，H-1″），3.23（1H，dd，J=7.0、7.0 Hz，H-2″），3.25（1H，m，overlapped，H-3″），3.11（1H，m，overlapped，H-4″），3.11（1H，m，overlapped，H-5″），[3.33（1H，m，overlapped），3.59（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6″]，3.84（3H，s，3′-OCH3），12.60（1H，br.s，5-OH）。13C NMR（DMSOd6，125 MHz）谱数据：δ156.1（C-2），132.9（C-3），177.3（C-4），161.1（C-5），98.7（C-6），164.5（C-7）93.7（C-8），156.3（C-9），103.8（C-10），121.0（C-1′），113.4（C-2′），146.8（C-3′），149.3（C-4′），115.1（C-5′），121.9（C-6′），100.7（C-1″），74.3（C-2″），76.3（C-3″），69.7（C-4″），77.4（C-5″），60.5（C-6″），55.6（3′-OCH3）。其1H、13CNMR谱数据与文献[18]相对照，并结合2D NMR谱的解析，鉴定该化合物为异鼠李素3-O-β-D-葡萄糖苷（isorhamnetin-3-O-β-Dglucoside）。

3.11 化合物11 黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z623.163 0[M-H]-（calcd for C28H31O16，623.161 8），确定其分子式为C28H32O16。1H NMR（DMSO-d6，500 MHz）谱数据：δ6.17（1H，d，J=2.0 Hz，H-6），6.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-8），7.85（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），6.91（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.51（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-6′），5.43（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.22（1H，dd，J=7.5、7.5 Hz，H-2″），3.24（1H，dd，J=7.5、9.0 Hz，H-3″），3.05（1H，dd，J=9.0、9.5 Hz，H-4″），3.28（1H，m，H-5″），[3.34（1H，dd，J=5.0、11.0 Hz），3.71（1H，br.d，ca.J=11 Hz），H2-6″]，4.42（1H，d，J=1.5 Hz，H-1″′），3.40（1H，dd，J=1.5、3.5 Hz，H-2″′），3.26（1H，dd，J=3.5、9.5 Hz，H-3″′），3.08（1H，dd，J=9.0、9.5 Hz，H-4″′），3.27（1H，m，H-5″′），0.98（3H，d，J=6.0 Hz，H3-6″′），3.83（3H，s，3′-OCH3），12.57（1H，br.s，5-OH）。13C NMR（DMSO-d6，125 MHz）谱数据：δ156.4（C-2），132.8（C-3），177.0（C-4），161.0（C-5），98.9（C-6），164.2（C-7），93.8（C-8），156.2（C-9），103.9（C-10），120.9（C-1′），113.1（C-2′），146.7（C-3′），149.3（C-4′），115.1（C-5′），122.1（C-6′），101.2（C-1″），74.2（C-2″），76.3（C-3″），70.0（C-4″），75.8（C-5″），66.7（C-6″），100.8（C-1″′），70.2（C-2″′），70.5（C-3″′），71.7（C-4″′），68.2（C-5″′），17.6（C-6″′），55.5（3′-OCH3）。其1H、13CNMR谱数据与文献[19]相对照，并结合2D NMR谱的解析，鉴定该化合物为异鼠李素-3-O-芸香糖苷（isorhamnetin-3-O-rutinoside）。

3.12 化合物12 黄色粉末。高分辨Q-TOF-ESIMS给出其准分子离子峰m/z485.107 0[M+Na]+（calcd for C22H22O11Na，485.105 4），确 定 其 分 子 式 为C22H22O11。1H NMR（CD3OD，500 MHz）谱数据：δ8.11（1H，s，H-2），6.21（1H，br.s，H-6），6.32（1H，br.s，H-8），7.39（1H，d，J=2.0 Hz，H-2′），7.06（1H，d，J=8.5 Hz，H-5′），7.22（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-6′），4.96（1H，d，J=7.5 Hz，H-1″），3.52（1H，dd，J=7.5、9.5 Hz，H-2″），3.48（1H，dd，J=8.5、9.5 Hz，H-3″），3.38（1H，dd，J=8.5、9.0 Hz，H-4″），3.43（1H，m，H-5″），[3.68（1H，dd，J=6.0、12.0 Hz），3.90（1H，dd，J=2.0、12.0 Hz），H2-6″]，3.90（3H，s，4′-OCH3）。13CNMR（CD3OD，125 MHz）谱数据：δ155.3（C-2），124.9（C-3），181.9（C-4），159.2（C-5），100.2（C-6），166.7（C-7），95.1（C-8），158.2（C-9），106.0（C-10），125.4（C-1′），119.2（C-2′），147.7（C-3′），151.0（C-4′），113.6（C-5′），124.1（C-6′），102.8（C-1″），75.0（C-2″），77.9（C-3″），71.6（C-4″），78.3（C-5″），62.7（C-6″），56.8（4′-OCH3）。其1H、13CNMR谱数据与文献[20]相对照，并结合2D NMR谱的解析，鉴定该化合物为3′，5，7-trihydroxyisoflavone-4′-methoxy-3′-O-βglucopyranoside。

4 结果与讨论

花生衣产量大，价格低廉，但目前多作为饲料和燃料等低附加值产品使用，利用率低。加大对花生衣的研究和应用，可以提高花生的综合利用价值和经济价值，对促进中国食品工业的发展、增强人们的身体健康有重要的现实意义。笔者通过对花生衣的化学成分的研究，为其综合开发利用提供了实验依据。在此过程中，从花生衣50%乙醇提取物中鉴定了12个单体成分。其中化合物8为首次从落花生属中分离得到，化合物3为首次从该植物中分离得到。