IgA肾病患者间质病变与T淋巴细胞亚群表达的动态分析

颜兵雪，刘永梅

安徽医科大学附属巢湖医院肾脏内科，安徽巢湖 238000

IgA肾病是全世界范围内最常见的慢性肾小球肾炎。约占原发性肾小球肾炎的40%～50%[1]。诊断依赖于肾穿刺活检，病理特征也呈现多种形式。以往IgA肾病的缺乏统一的分级，牛津分型[2]解决了病理指标可重复性的问题，包括：系膜增殖积分(M)、毛细血管内细胞增生性病变(E)、节段性肾小球硬化或球囊粘连(S)、间质纤维化或小管萎缩(T)，从2009年至今，有众多研究表明新月体(C)是一种有效的预后因素，与肾功能衰竭的进展有关，因此可以纳入新的牛津分类法[3]。

该研究2014年1月—2018年5月在该院确诊的110例的IgA肾病患者伴有不同程度间质纤维化或小管萎缩，分析其外周血T淋巴细胞亚群的变化情况，以提高我们对疾病的诊断、治疗及预后认识。

1 资料与方法

1.1 一般资料

入组病例来源于在该院接受肾活检确诊为IgA肾病的110例患者。均在B超引导下穿刺，要求穿出的肾组织＞10 mm。用于光镜和免疫组化检查的标本固定于4%的中性甲醛固定液中，供电镜检查的标本用3%的戊二醛溶液固定后置于4%的冰壶中保存，并尽快送检，24 h内检查为宜。需排除继发性肾损害，如系统性红斑狼疮、过敏性紫癜、乙型肝炎、肝硬化、实体肿瘤性肾病、血液系统疾病等引起的继发性肾损害。所有入组的病例排除急性感染且在3个月内未用过激素及免疫抑制剂。根据牛津分型间质纤维化或小管萎缩面积分为T0、T1、T2 3组，其中T0组56例，其中男性26例，女性30例，年龄在24～48岁，平均年龄在（29.4±5.3）岁，病程 2d～3.5 年，平均病程（1.4±0.5）年。T1组36例，其中男性16例，女性20例，年龄在27～75 岁，平均年龄在（42.9±7.3）岁，病程 0.5～4 年，平均病程（2.1±0.3）年。T2组18例，其中男性10例，女性 8 例，年龄在 27～67 岁，平均年龄（39.8±8.2）岁，病程 1.2～3.8 年，平均病程（2.7±0.5）年。3 组人员的性别、年龄、病程等差异无统计学意义（P＞0.05）。受试者均获得知情同意，并经过伦理委员会批准。

1.2 观察指标

统计该研究中患者的年龄、性别等一般资料。采用美国BD FACSCanto II流式细胞仪,该实验均使用BD公司的配套试剂。抽取患者清晨静脉全血2～3 mL,并用肝素抗凝，取病人全血 50 μL，加抗体 10 μL，混匀，避光 15 min，加入 1∶10稀释的溶血剂 1 mL，混匀，避光 10 min，然后 5 min后1 500 r/min离心，弃去上清液，加入1 mL PBS后，1 500 r/min离心，弃去上清液，再加入300 μL 1%多聚甲醛固定，在24 h内上机，利用FACS MMCTISET软件检测并自动分析淋巴细胞亚群的百分比。对比观察不同间质病变的IgA肾病患者的CD4+、CD8+T淋巴细胞百分比，以及CD4+/CD8+的变化情况。

1.3 统计方法

使用SPSS 16.0统计学软件进行统计分析。计量资料用（±s）表示，两组间比较采t检验。多组间的比较采用One-Way ANOVA方差分析，若差异有显著性，两组间再用SNK-q进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

根据牛津分型不同间质纤维化或小管萎缩面积分为 T0、T1、T2 组 (T0:0%～25%，T1:26%～50%，T2＞50%)。CD4+、CD8+以及 CD4+/CD8+的 Lewene检验均显示 （P＞0.05）。 CD4+/CD8+在 T0、T1 组，T1、T2 组，T0、T2组之间均差异有统计学意义。并随着间质病变的加重而动态变化。见表1。

表1 不同间质纤维化或小管萎缩(T)面积的T淋巴细胞亚群的比较（±s）

表1 不同间质纤维化或小管萎缩(T)面积的T淋巴细胞亚群的比较（±s）

组别 CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+T0（n=56）T1（n=36）T2（n=18）F值P值36.52±5.46 39.31±5.05 42.08±5.97 8.005 0.001 23.96±2.24 23.38±2.12 22.71±1.70 2.591 0.080 1.53±0.25 1.70±0.30 1.86±0.32 10.646 0.000

3 讨论

研究证实IgA肾病是自身免疫性疾病，血清多聚IgAl(pIgAl)的增多及糖基化的结构缺陷是导致IgA肾病发生发展的重要因素[4]。辅助性T细胞主要表面标志是CD4，具有协助细胞免疫和体液免疫的功效，细胞毒性T细胞主要表面标志是CD8，可特异性杀伤靶细胞，机体免疫系统平衡的维持靠两大细胞亚群相互作用，产生相对平衡的免疫应答[5]。T淋巴细胞亚群是临床上最常用的反应免疫状态的临床指标，CD4+、CD8+，以及CD4+/CD8+的异常，提示免疫功能的异常。CD4+T细胞可调节抗体的产生，包括IgA，推测系统性归巢CD4+T可能直接导致IgA肾病中pIgA的产生[6]。CD8+T细胞的细胞毒作用，再加上活化巨噬细胞的细胞毒反应，可能导致加速肾小球和间质的损伤。

研究表明淋巴细胞数量和类型影响IgA肾病的间质纤维化和小管萎缩的进展。国内叶寒青等人[7]研究82例IgA肾病有间质纤维化和小管萎缩改变者的CD4+/CD8+（1.84±0.82） 明显高于 健 康对照组的（1.36±0.40）。该实验的研究表明IgA肾病小管萎缩或间质纤维化越严重的患者CD4+/CD8+值越高，与其基本相符。杨森等[8]报道IgA肾病患者有较高的CD4+绝对值和较低或无明显变化的CD8+绝对值。弓玉祥等人[9]研究肾间质中淋巴细胞的浸润情况，结果表明在高倍镜下T1、T2、T3组的CD4+细胞数分别为（10.28±8.01）%、（25.33±2.82）%、（38.01±8.65）%，CD8+细胞数分别为 （11.62±6.07）%、（25.78±7.82）%、（72.60±16.08）%，T1和 T2组的 CD4+、CD8+细胞数高于 T0组，T2组的CD4+、CD8+细胞数又高于T0组，该研究是外周血中的淋巴细胞表达情况，该研究3组之间CD4+%的均值不全相等，T1和T2组的CD4+高于T0组，但T1、T2组的CD4+差异无统计学意义。3组之间的CD8+无统计学意义。与二人研究结果有区别。众多研究表明IgA肾病牛津分型中小管萎缩或间质纤维化对肾脏不良预后具有独立的检测价值[10]。IgA肾病患者T淋巴细胞计数在不同程度的间质纤维化或小管萎缩呈现动态变化，且这种变化跟疾病严重程度有关。随着间质纤维化或小管萎缩面积的增大，发生终点事件的概率逐渐增高。国外已有研究证实IgA肾病的发病与主要组织相容性复合体有关(MHC),Kurtulus等[11]报道，CD4+细胞可能通过识别肾小管上皮细胞上的MHCⅡ类抗原释放细胞因子IFN-γ、TNF-β、IL-3、TGF-β导致间质纤维化，从而影响IgA肾病的进展。Meng XM等[12]指出抑制TGF-β1/Smad信号通路，可以防止或减慢慢性肾脏病的纤维化。几乎所有的免疫细胞类型：调节性T细胞、B淋巴细胞和Th细胞参与了这一过程，和受损的内源性肾细胞一起，释放各种细胞因子，如TGF-β1，是导致肾纤维化的核心驱动力[13]。

未来若能找到调节和干预IgA抗体产生的方法，以及阻断或延缓间质纤维化或小管萎缩的途径，将降低IgA肾病患者或延缓终末期肾病发生的概率。