地贫孕妇与非地贫孕妇羊水染色体的对比分析

韦世录 余奇松 陈萍

广西医科大学生命科学研究院（南宁530021）

羊水染色体检查是遗传病产前诊断的重要手段，通过羊水细胞培养进行染色体核型分析，可了解胎儿染色体数目及结构是否正常，诊断胎儿染色体病，可大大减少先天性缺陷患儿的出生。地中海贫血是单基因遗传病，在我国主要发生在长江以南地区，以广东、广西多见，广西部分地区人群中α-地中海贫血6.64%～15.35%，β-地中海贫血3.61%～6.45%［1-2］。中间型及重型地中海贫血患儿的输血及去铁治疗需要高昂费用［3-5］，给社会和家庭带来沉重的经济负担。针对地中海贫血孕妇，国内外相关研究中，更多关注的是胎儿是否为中间型或重型地中海贫血，而其染色体结果关注较少。现将地中海贫血其胎儿羊水染色体异常核型的检出率与非地中海贫血孕妇是否存在差异，经比较、分析，现总结如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象选择2016年1月至2018年8月于广西医科大学第一附属医院产前诊断与遗传病诊断科行羊膜腔穿刺术进行羊水染色体检查的孕妇2 144例，按孕妇是否患有地中海贫血进行分组，地贫组635例，年龄16～48岁，孕周16～24周；非地贫组1 509例，年龄16～47岁，孕周16～24周。纳入标准：有羊膜腔穿刺指征或患者自愿要求进行羊膜腔穿刺并均已签署知情同意书。排除标准：有羊膜腔穿刺术禁忌症。地中海贫血孕妇指的是经地中海贫血基因检测诊断为α-地中海贫血、β-地中海贫血或α复合β地中海贫血的孕妇。

1.2 方法

1.2.1 羊膜腔穿刺指征主要包括高龄孕妇，胎儿超声异常，孕中期血清学筛查异常，无创产前DNA检测结果为高危者，孕早期致畸物质接触史，不良孕产史，夫妇一方为染色体异常。

1.2.2 羊水标本的采集及培养孕妇排空膀胱，取仰卧位，于实时四维彩色多普勒超声波诊断仪（美国GE公司）引导下行羊膜腔穿刺术，抽取孕妇羊水20 mL，送层流培养室的超净工作台内分装至2只无菌离心管，2 000 rpm离心5 min，弃上清液，每管加入5 mL羊水培养基（美国GIBCO公司），无菌吸管吹打混匀，接种于2个50 mL培养瓶内，放入5%CO2、37℃培养箱进行细胞培养。第7～8 d倒置显微镜下观察羊水细胞生长状况，换液。

1.2.3 羊水细胞染色体制备换液次日加入适量秋水仙素，2.5 h后收获细胞，然后经低渗、预固定、固定、滴片、烤片等处理，再常规G显带处理。

1.2.4 染色体核型分析应用全自动染色体图像扫描分析系统（德国Zeiss公司）对羊水载玻片标本进行全自动扫描、拍照，获取羊水细胞中期分裂相染色体图片。应用染色体分析软件对分裂相染色体进行计数与核型排列，计数20个，核型分析7个，若发现嵌合体，则增加计数和分析。异常核型包括数目异常、结构异常及嵌合体，不包括染色体正常多态性。

1.3 统计学方法应用SPSS 19.0统计软件，对两组羊水染色体异常核型检出率、异常核型分布以及不同羊膜腔穿刺指征异常核型检出率进行医学统计学分析及检验，显著性检验水准定为α＝0.05。

2 结果

2.1 羊水细胞培养成功率2 144例孕妇羊水标本中，羊水细胞培养首次培养成功率为99.11%（2 125/2 144），首次培养失败率为0.89%（19/2 144）。首次培养失败的19例孕妇中，13例孕妇接受第2次羊膜腔穿刺术，二次培养成功率为100%（13/13），6例孕妇改脐静脉穿刺并顺利完成胎儿染色体检查。羊水细胞培养总成功率为99.72%（2 138/2 144）。

2.2 地贫组的地贫基因类型及其染色体异常核型检出率2 144例孕妇中，非地贫组占70.38%（1 509/2 144），地贫组占29.62%（635/2 144），其中α-地中海贫血占58.42%（371/635）、β-地中海贫血34.02%（216/635）及α复合β地中海贫血7.56%（48/635）。α-地中海贫血孕妇检出异常核型19例，检出率为5.12%（19/371）；β-地中海贫血孕妇检出异常核型8例，检出率为3.70%（8/216）；α复合β地贫未见异常核型。

2.3 两组羊水染色体异常核型检出率比较2 144例羊水标本共检出异常核型134例，检出率为6.25%，其中地贫组检出率为4.25%（27/635），非地贫组检出率为7.09%（107/1 509），经χ2检验，差异有统计学意义（P＜0.05），可以认为两组羊水染色体异常核型检出率有差别。

2.4 两组羊水染色体异常核型分布情况两组按数目异常、结构异常、嵌合体统计染色体异常核型分布情况见表1。经χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05），尚不能认为两组羊水染色体异常核型分布有差别。

表1 两组羊水染色体异常核型分布Tab.1 Abnormal chromosome karyotype distribution in two groups of amniotic fluid 例

2.4.1 数目异常地贫组“数目异常”11例，其中性染色体数目异常4例：染色体数47，XXX综合征2例；染色体数47，XXY综合征1例；染色体数45，X单体1例。常染色体三体7例：21-三体5例，18-三体2例。

非地贫组“数目异常”48例，其中性染色体数目异常10例：染色体数47，XXX综合征3例；染色体数47，XXY综合征6例；染色体数45，X单体1例。常染色体三体34例：21-三体22例、18-三体10例、13-三体2例。三倍体1例：染色体数69，XXX。标记染色体3例：染色体数47，XY/XX，+mar。

2.4.2 结构异常地贫组“结构异常”11例，其中性染色体结构异常2例：均为inv（Y）臂间倒位；常染色体结构异常9例：t（11；18）相互易位、rob（13；14）罗氏易位、inv（5）短臂臂内倒位各 1例，t（1；12）相互易位2例，inv（9）臂间倒位4例。

非地贫组“结构异常”47例，其中性染色体结构异常3例：t（X；19）相互易位、i（X）长臂等臂染色体、inv（Y）臂间倒位各1例；常染色体结构异常44例：t（1；4）、t（1；5）、t（1；10）、t（3；9）、t（3；10）、t（8；11）、t（8；15）相互易位、rob（13；15）、rob（13；22）罗氏易位、inv（4）臂间倒位、inv（5）臂内倒位，ins（4；2）正向插入，del（4）（p15.2）、add（7）（p22）各 1例，rob（14；21）罗氏易位 2例，add（15）（p13）2例，inv（9）臂间倒位26例。

2.4.3 嵌合体地贫组“嵌合体”5例，其中性染色体嵌合3例：46，XX/46，XY嵌合体1例，45，X/46，XY嵌合体2例；常染色体嵌合2例：21-三体嵌合、13-三体嵌合各1例。

非地贫组“嵌合体”12例，其中性染色体嵌合9 例：47，XXY/46，XY 嵌合体、46，X，i（X）（q10）/45，X嵌合体各1例，46，XX/46，XY嵌合体3例，45，X/46，XY 嵌合体2例，45，X/46，XX 嵌合体2例；常染色体嵌合3例：21-三体嵌合、20-三体嵌合、2-三体嵌合各1例。

2.5 两组不同羊膜腔穿刺指征异常核型检出率比较两组不同羊膜腔穿刺指征孕妇的染色体异常核型检出率分布情况见表2。各羊膜腔穿刺指征中，非地贫组异常核型检出率均高于或等于地贫组，差异无统计学意义（χ2＝2.379，P＞0.05），尚不能认为两组不同羊膜腔穿刺指征染色体异常核型检出率有差别。“夫妇染色体异常”指征中，两组检出率均为100%，“无创高危”指征中，非地贫组检出率为100%，地贫组为60.00%，检出率非常高。

表2 两组不同羊膜腔穿刺指征异常核型检出率比较Tab.2 Comparison of abnormal detection rates of different types of amniocentesis in two groups 例

3 讨论

地中海贫血是由于某类珠蛋白合成受抑所引起的溶血性贫血，但并不涉及血红蛋白结构的异常，如α-珠蛋白合成受抑者称α-地中海贫血，β-珠蛋白合成受抑者称β-地中海贫血。患有地中海贫血的夫妇，在妊娠期间，临床医师根据孕妇及丈夫的地中海贫血类型，做出是否进行胎儿地中海贫血产前诊断的必要性，以避免中间型或重型地中海贫血患儿的出生，这是以往地中海贫血孕妇研究的主要关注点，而对其染色体结果关注较少。携带地中海贫血基因的孕妇，其胎儿染色体异常核型检出率是否不同。本研究中地贫组与非地贫组的羊水染色体异常核型检出率分别为4.25%（27/635），7.09%（107/1 509），地贫组低于非地贫组，差异有统计学意义（P＜0.05），而两组羊水染色体异常核型在数目异常、结构异常、嵌合体分布以及不同羊膜腔穿刺指征检出率的比较，差异无统计学意义（P＞0.05），可能的原因：（1）地贫组样本偏少，引起统计学上的误差；（2）地贫孕妇因妊娠重型或中间型地贫胎儿，孕早期被引产，其染色体可能存在异常。

地贫组羊水染色体异常核型检出率低于非地贫组，这对产前诊断临床工作及实验室检测有一定的指导意义。在日常产前遗传咨询中，地中海贫血孕妇可能会提出“地贫是否导致胎儿染色体异常或者增加胎儿染色体异常的几率”的问题，少数重型地贫患儿生育史的地中海贫血孕妇，对于胎儿是否为重型地贫或染色体异常，往往非常关注，妊娠期间心理负担较大，临床医师可据此提供更准确的咨询，消除其思想包袱。实验室的胎儿染色体检测要求认真、细致、客观，不管标本来自地中海贫血孕妇还是非地中海贫血孕妇，应一视同仁，保证检测结果客观、准确，减少主观因素的误差。本研究染色体异常核型检出率为6.25%（134/2 144），与国内相关报道一致［6-7］。邓国生等［8］对266例地贫孕妇的羊水染色体核型进行分析，异常核型（包括正常多态性）的检出率为6.0%，剔除染色体正常多态性，异常核型检出率应为4.51%，与本研究地贫组异常核型检出率4.25%相近。

羊膜腔穿刺术通过抽取羊水进行检验，以了解胎儿发育情况以及治疗胎儿病症或终止妊娠，是妊娠中期产前诊断的重要手段。不管孕妇是否为地中海贫血基因携带者，只要有羊膜腔穿刺适应症而无禁忌症，可行羊膜腔穿刺术。孕妇年龄、唐氏筛查高风险、超声异常、不良接触史（如放射线，农药）、不良孕产史及夫妇染色体异常是导致胎儿染色体异常较为常见的危险因素，是羊膜腔穿刺的主要指征。随着社会的发展和二胎政策的放开，孕妇高龄化的趋势日趋明显。有研究显示［9］：二孩政策开放后，有产前诊断需求的高龄孕妇增加，由27.2%上升到37.9%。孕妇年龄越大，胎儿染色体异常的风险就越大，可能与卵子老化有关。卵子不同程度的老化，将导致减数分裂过程中染色体不分离的几率增加［10-11］。国内报道夫妇染色体异常易导致反复流产及胎儿染色体异常［12-13］，“夫妇一方为染色体异常携带者”孕育染色体异常胎儿具有较大的风险。亲代染色体异常涉及染色体条数不同，子代染色体异常的遗传概率也不同。亲代染色体异常涉及染色体条数越多，子代染色体异常的可能性越大。罗小金等［14］对96例胎儿染色体倒位病例进行回顾性分析，显示遗传自双亲87例，遗传概率为90.6%。本研究有9例“夫妇一方为染色体异常携带者”，其中4例涉及1条异常染色体，5例涉及2条异常染色体，且遗传概率均为100%。因此，夫妇一方确认为染色体异常携带者时，妊娠期间建议进行胎儿染色体检查，以确定胎儿染色体是否正常。本研究9例“夫妇一方为染色体异常携带者”，遗传概率100%，可能的原因有三：一是夫妇异常的染色体本身易遗传给胎儿；二是胎儿染色体为非平衡易位，孕早期易停育、死胎或流产；三是样本量少，存在偶然因素。

综上所述，在产前诊断临床实践中，临床医师根据高龄孕妇、唐氏高危、超声异常、不良孕产史、不良接触史、无创高危、夫妇染色体异常等不同的产前诊断指征，给予孕妇不同的遗传咨询。本研究中，产前诊断指征“无创高危”及“夫妇染色体异常”的羊水染色体异常核型检出率均较高，尤其夫妇染色体异常，临床上应高度重视，避免遗漏。针对地中海贫血孕妇的产前遗传咨询，咨询医师也可据此提供更合理、更全面的产前诊断服务，适当安抚地贫孕妇因过分担心地贫可能导致的胎儿染色体异常所引起的焦虑，减轻地贫孕妇的心理负担。